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1. 정액의 채취와 사정상태가. 채취방법
가장 많이 이용되는 정액의 채취방법으로 수압법과 인공질법이 있다.
(1) 수압법(digital manipulation)
수압법의 요령은 수캐가 발정된 암캐를 맞아 교미할 의사를 보이면 곧 음경귀두의 구상부위를 한쪽 손으로 잡은 후 구상부의 후부를 약간 압박하여 발기를 도우면서 음경을 아래로 향하게 한다. 다른 한손은 37℃로 유지된 깔대기형 채취관에 정액을 채취한다. 여기에서 특히 주의해야 할 점은 충분한 양의 정액이 채취될 때까지 계속 일정한 압박을 유지하도록 하고 채취관이 음경에 닿지 않도록 하여야 한다.
(2) 인공질법
인공질법은 인공질에다가 먼저 40℃내외의 더운 물을 채우고 고무내통에는 공기를 넣어서 적당한 온감과 압박감을 주도록 되어 있다. 인공질내는 대체로 건조된 상태이기 때문에 윤활제를 사용한다. 발기를 돕기 위하여 발정온 암캐를 이용할 수도 있으나,없을때는 음경 또는 음경귀두의 후부를 마사지하여도 된다. 음경이 발기될 증세를 보일때 음경을 인공질내로 유도한다. 이때 수캐는 곧 전진운동을 하게 되는데, 한손으로는 인공질을 단단히 잡고, 다른 한 손으로는 음경귀두의 후부를 쥐고 있으면서 보조자로 하여금 인공질에 부착된 펌프장치를 이용하여 계속 자극을 촉진시킨다. 인공질법은 수압법보다 위생적이며, 보기에 좋은 장점이 있다.
개의 정액채취 과정
(3) 전기자극법
가축에서 사용되는 원리를 적용한 방법으로 30V/20A의 전류를 3초간씩 10∼12회 통전시키는 방법이다. 정액채취를 위하여 실제로 응용하기는 어렵고, 단지 실험 연구시에 이용할 수 있는 방법이다.
표. 사정시기별 사정량과 사정 소요시간
보 고 자 | 사정량(㎖) | 사정소요시간(초) | ||||
제 1 기 | 제 2 기 | 제 3 기 | 제 1 기 | 제 2 기 | 제 3 기 | |
Maule('62) | 0.3∼2.0 | 0.5∼4.0 | 3∼25 | 30∼50 | 50∼80 | 3∼30 |
Dubiel('72) | 0.1∼2.0 | 0.1∼3.0 | 1.5∼25 | 5∼90 | 5∼300 | 1∼10 |
Arthur('75) | 0.3∼5.0 | 0.5∼3.5 | 2∼30 | 30∼50 | 50∼90 | 3∼35 |
구로다('88) | 1.0 | 1.7 | 5.5 |
나.사정상태
수캐의 정액도 돼지와 같이 분획채취를 하게 되며, 정액을 일정한 간격으로 3기로 구분하여 채취한다. 제 1기에 사정되는 부분은 전진운동시에 사출되는 것으로서 주로 요도점막의 분비물인 수양성 액체이며, 정자농도는 아주 낮다. 제 2기의 정액은 가장 정액농도가 짙은 부분으로서 유백색이며 점조성이 높은데, 전진운동이 정지되면서 사출되는 부분이다. 제 3기의 정액은 제 1기의 것과 마찬가지로 수양성인 액체로서 정자농도가 낮고 주로 전립선의 분비물로 구성되어 있다.
2. 정액성상가.이화학 성상
1회 사정량과 정자수는 품종, 연령, 채취방법, 채취조건등에 따라 다르며, 동일 품종내의 개체간에도 물론 차이가 있다. 사정량에 있어서 체중이 20kg이내인 개에서는 평균 5.4ml(1∼22.5ml), 20kg이상에서는 평균 12.8ml(2∼45ml)로서 체중간에 차이가 있다. 사정량은 숙련정도에 따라 채취량에 차이가 큰 것을 알 수 있다. 정액량과 정자농도는 봄과 여름에 대체로 정액량이 많아지고, 정자수는 감소되며, 가을과 겨울에는 반대로 정액량은 감소되고 정자수는 많아져 계절간에 차이가 있다.
성견의 정자활력은 60∼100%이며, 대개 70∼90%면 양호한 정액이라고 할 수 있다. 기형 정자율은 5∼10%이며 여름철에는 기형율이 다소 높아진다.
표. 정액량과 정자수
보 고 자 | 정 액 량(㎖) | 정 자 수 | 비 고 |
Nooder(1950) | 1∼20 | 0.88∼5.88억/㎖ | |
Harrop(1955) | 1.25억/㎖ | ||
Boucher등(1958) | 7(1.8∼16.5) | 3.14(0.01∼9.66)억/㎖ | Beagle종 |
Bertlett(1962) | 12(0.9∼19.2) | 2.47억/㎖(제 2 기) | 잡 종 |
星과 山內(1968) | 9.5(2∼20) | 2.7(0.6∼6.4)억/㎖ | |
黑田과 廣江(1972) | 8.25 | 2.24억/㎖ | 스피츠 |
Dubiel(1973) | 1∼61 | 0.5∼17억/㎖(전체) | 여러가지 품종의 정자수 |
武石등(1975) | 5.3 | 0.92억/㎖ | Beagle종 |
정액의 pH는 채취방법과 사정부분에 따라 다소 차이가 있다고 하나 큰 차이는 아니다. 제 1기 6.37, 제 2기 6.10, 제 3기 7.20로서 평균 6.75(5.8∼6.9)인데, 대체로 6.1∼7.0정도로써 약산성이나 중성에 가깝다. 특이하게 산도가 높거나 낮을때는 이물질이 혼입되었거나 염증성 질병으로 의심할 수 있으며 이때의 정액은 버려야 한다. 정액채취의 빈도에 따라 정자농도에 차이가 있는데 주 2회 채취의 경우가 매일 또는 주 1회 채취때보다 1회 사정당 정자수가 많은 것을 알 수 있으며 한편 3주 이상 매일 정액채취에서도 성욕의 감퇴가 없었다는 보고가 있다.
나.화학적 성상
수분이 98%, 고형질 2%(무기질 0.7%, 유기질 1.8%)로서 고형질은 말의 4.3%보다 낮은 편이다. 1.8%의 유기질 중에는 총단백질이 1.3%, 지질 0.2%, 기타 0.3%로서 단백질이 가장 많다. 武石등(1975)은 계절에 따른 정액의 과당과 GPC 함량의 변화를 조사하였는데, 봄과 여름의 과당함량은 각각 2.57과 2.94mg/100ml로서 가을과 겨울보다 높으며, GPC의 함량은 봄에 145.09mg/100ml로 높은데 반하여 여름에는 74.13mg/100ml로 현저히 감소됨을 보고하였다.
3. 정액의 보존가.액상보존
개 정자는 채취직후 원정액을 35∼37℃에 보존할 경우 약 20∼24시간 생존이 가능하기는 하나 희석을 하여 보존하면 생존성이 좋아지고 1주일까지 연장도 가능하다. 채취한 원정액으로 수정시킨 결과에서 Schutte(1965)는 50∼60% 수태시킬 수 있었고, Gill등(1970)은 정자수 1.57×108/ml 이상 주입하므로서 자연교배와 같은 수태율을 얻을 수 있었다.
黑田와 黃江(1972)은 37℃에서 세정된 정자의 대사능력을 조사한 결과 3% glycine액, 0.1M 제 2인산나트륨액 또는 우유가 첨가될때 대사능력이 양호하였고, 그들은 특별히 inositol, glycine, peptone, trisaminomethane, citric acid, 난황 등과 설파제 및 항생제로서 조제된 PETIC 희석액에서 대사능력이 우수함을 발표한 바 있다.
표. Petic액의 조성
성 분 | 양(㎎) |
NaH2PO4·12H2O | 20 |
Kcl | 30 |
Inositol | 60 |
Glycine | 375 |
Peptone | 500 |
Na3C6H5O7·2H2O | 900 |
Tris(hydroxymethyl) aminomethane | 1,211 |
Citric acid | 681 |
Homosulfamine | 10 |
Egg Yolk | 20(v/v%) |
※ 상기액을 92℃에서 10분간 가열하여 멸균소독한 후 페니실린 900IU/㎖, 스트렙토마이신 0.9mg/㎖를 첨가하고 원정액과 페틱액을 1:8로 희석할때 4∼5일간 보존이 가능하였고, Thacher 와 Almquist(1953)는 2.68% 난구액과 우유를 같은 양으로 혼합한 보존액으로서 120 시간후 50%의 활력을 유지할 수 있었다.
Foot(1964)는 다음과 같이 조제된 난구액으로 10∼20배 희석에서 수정이 가능한 활력을 4일간 유지할 수 있었다.
완충액 : Sodium citrate, dihydrate ………… 1.45g
Glycine ………………………………… 0.93g
Glucose ………………………………… 1.25g
증류수 ………………………………… 100ml
위의 완충액에 난황 20%, penicillin G 1,000IU/ml, dihydrostrepto-mycin 1mg/ml 첨가한다.
Gill등(1970)은 trisaminomethane을 첨가한 보존액으로 주입 정자수를 2억 이상으로 희석한 후 수정시킨 결과에서 24시간 보존한 정액이라면 자연교배와 같은 수준의 수태율을 얻을 수 있다고 하였다.
완충액 : Trisaminomethane……………………… 2.4g
Citric acid, monohydrate…………… 1.3g
Fructose………………………………… 1.0g
증류수 ………………………………… 100ml
위의 완충액에 72.2ml에 glycerol 8.8ml과 난황 20ml, penicillin G 1,000IU/ml, dihydrostreptomycin 1mg/ml 첨가한다.
개에서 액상정액으로서 인공수정시키고자 할때 위에 든 2 가지 대표적인 희석액중 어느 하나를 택하여 사용하면 1∼2일간의 단기간 보존에서 좋은 결과를 기대할 수 있다.
나.동결보존
Seager(1969)에 의하여 최초로 동결정액의 수태가 성공된 이후로 Ande-rsen (1972), Seager와 Fletcher(1973), 武石등(1976)의 성공한 예들이 보고 되었다.
Harrop(1962)는 난구액에 10% glycerol을 첨가후 2 시간 동안 평형하여 -79℃에서 12개월간 저장한 동결정액이 융해후 45%의 활력을 유지시킬 수 있었으며, Foote (1964)는 20% 난황과 11% glycerol이 첨가된 트리스 완충액에 희석하여 30일간 저장후에도 활력이 양호하였다. Rohloff(1978)은 트리스 희석액에 glycerol과 DMSO를 같이 첨가한 결과 첨가수준이 각각 최고 8%와 1%에서, 평형시간은 30분에서 가장 정자생존성이 좋았다고 하였다.
표. 냉동보존시 정액의 활력
품 종 | 사정후 | 융해후 | 보 존 기 간 (월) | |||||
1 | 2 | 3 | 6 | 9 | 12 | |||
비 이 글 | 80 | 50 | 50 | - | 50 | 50 | 50 | 50 |
잡 종 개 | 90 | 50 | 45 | - | 45 | 45 | 45 | - |
동결정액의 수태실험 결과를 보면, Seager와 Fletcher(1973)는 32두 수정에 15두 수태, 武石등(1976)은 20% 가열 분유액, 난구액 및 6% glucose액을 각각 3:1:1로 혼합하고, 최종 glycerol 농도가 4%인 희석액으로 동결후 12개월 보존한 정액으로 수정시킨 결과 4두중 3두를 수태시킬 수 있었다. 개에서 동결정액의 이용은 일부 선진국에서만 상업화되었을 뿐이며 더 많은 연구가 이루어져야 할 것이다.
4. 정액의 주입가.수정적기
수정은 적어도 배란전 12시간 전후에 인공수정을 하여 정자가 난관상부에서 배란되는 난자와 만나도록 하여야 한다. 배란전 3일에서 배란후 2.5일 사이에, 다시말하면 초출혈후 제 10∼12일에 1회, 13∼14일에 재차 주입하도록 권하고 있으며, 수정적기를 모를 때는 수캐와 접속시켜 허용하는 자세를 취할 때 1차로, 1∼2일후에 재차 인공수정시키는 방법도 좋다.
나. 주입방법(1) 주입기
주입피펫은 길이 20cm, 직경 6mm의 플라스틱 또는 초자관이면 된다. 소 정액 주입피펫을 반으로 자른 것이면 적당하다. 주입피펫은 5∼10ml의 주사기에 고무관으로 연결하며, 때에 따라서는 질경 또는 질개구기가 필요할 경우도 있다. 주입기는 자외선소독이나 E.O가스멸균시킨 것을 사용해야 한다.
(2) 암캐의 보정
대형견에서는 암캐를 세운 자세에서 주입하기도 하나, 보조자가 암캐를 거꾸로 눕히고 사지를 하늘을 향한 자세에서 주입하는 것이 용이하다. 사나운 암캐는 주입 전에 약간 마취시킬 수도 있고 입마개를 부착시켜 시술자가 물리지 않도록 보정을 확실히 한 후에 주입하는 것이 좋다.
(3) 주입요령
<참고문헌>