세포 밖 소포체의 제타 전위 분석 (Zeta Potential measurement of Extracellular Vesicles by

[With위드인스트루먼트]

안녕하세요.

Particle Metrix GmbH 사의 국내 단독 대리점, 위드인스트루먼트입니다.

이번에는 Zetaview를 활용하여 엑소좀(Exosome)을 포함한

세포 외 소포체(Extracelluar Vesicles [EVs])의 제타 전위 (Zeta Potential [ZP]) 분석한

결과에 대한 내용을 소개 드리고자 합니다.

ZP는 입자 (particle)의 표면 전위를 측정하는 것에 널리 사용되는 방법이며

일반적으로 입자가 띈 표면 전하의 지표로 사용되고 있습니다.

콜로이드의 분산 안정성 (Colloid Stability)은 표면 화학, 생물학적 결합,

적용된 이론적 모델에 영향을 받습니다.

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ZP에 영향을 주는 요소들을 조사하였습니다.

EVs는 Choriocarcinoma(융모막암종) 유래 JAr 세포에서 추출하였고

다양한 Phosphate 이온 농도(0.01mM, 0.1mM, 1mM)로 설정된

Phosphate-Buffered Saline (PBS)으로 수집하고, 계면활성제 (Tween-20)의

포함 유무, 10mM의 몇 종류의 Salts(NaCI, KCI, CaCI₂, AICI₃) 및

다른 pH값 (4, 7, 10)으로 ZP를 측정했습니다.

세포 및 엑소좀(Exosome)의 생리학적 구조

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30 ~ 200nm EVs 입자 크기 분포 분석 by Zetaview®

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PBS의 농도, 입자의 농도에 따라 ZP를 측정한 결과 (pH 6.9)

10^6 EVs/ml (흰색), 10^7 EVs/ml (회색), 10^8 EVs/ml (진한 회색)

PBS 1mM에서 0.01mM과 확실한 차이를 확인하 수 있었습니다. (p<0.05)

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Tween-20의 첨가 유무에 따라 ZP를 측정한 결과 (pH 6.9)

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10mM NaCI, KCI, CaCI₂, AICI₃를 첨가한 ZP측정 및 이온의 세기 측정한 결과 (pH 6.9)

CaCI₂와 AICI₃이 이온 강도와 ZP값이 확실히 다른 것을 확인했습니다. (p<0.05)

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pH의 변화에 따른 ZP의 측정한 결과 (10₈ Particles/ml)

0.01mM(검은색), 0.1mM(회색), 1mM(흰색)

PBS 1mM에서 0.01mM과 확실한 차이를 확인할 수 있었습니다. (p<0.05)

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이 연구는 EVs의 직접적인 특성화를 위해 Zeta Potential을 적용하는 것을

목표로 진행했습니다.

Choriocarcinoma(융모막암종) 세포 유래 EVs에서 다가 이온의

고농도인 (CA²⁺, AI³⁺) 음이온 (phosphate)의 사용은

EVs의 모든 농도 (10^6/ml, 10^7/ml, 10^8ml)에서 ZP의 음수 값 수치를

감소시켰지만 ZP값에 대한 1가 이온의 영향은 크지 않았습니다. (K⁺, Na⁺, CI^-)

연구에 사용한 EVs에 ZP는 용액의 pH에 따라 달라졌습니다.

계면활성제 (Tween-20)의 사용도 상당히 ZP의 음수 값을 감소시켰습니다.

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감사합니다.