흡광도 측정 실험 관련 좋은 소식이에요.

학교 학생이 분광광도계를 이용한 실험을 하고 싶어서 수소문을 했는데 대여는 불가능하고 막막했었어요. 그런데 타 공업고등학교에서 화학공업과에서 분광광도계를 가지고 있어서 기능사 자격증을 따려고 하는 학생들과 수업을 하실 때 청강을 할 수 있도록 기회를 주신다고 하셨습니다. 이후 학생과 함께 흡광도를 측정할 수 있도록 해주신다고 하셨습니다.  작년 코로나로 학생들을 위해서 다양한 실험을 못한 것이 미안하여 이번에는 열심히 해보려고 하는데, 실험 분광광도계 관련 수업을 청강하고, 분광광도계를 실제 사용해 본 후기에 대해서 다음에도 말씀드리겠습니다.학생이 하고자 하는 실험은 아래와 같은데 혹시 유의해야 될 사항이나, 아시는 것 있으면 조언 부탁드립니다. ^^Total phenolic contents 시험법1) 시료 1600µL에 2N FC reagent 100µLㅇ와 20% Na2CO3 (w/v) 300 µL를 첨가한 뒤 30분간 반응 시킨다.2) 30분 뒤 765nm에서 흡광도를 측정하고, 그 결과를 기입한다.3) 대조군(일반적 gallic acid)은 1~2를 여러 농도에서 실시하고, 흡광도가 0.100~0.700인 농도를 4개 이상 찾아 항산화제 농도와 흡광도 사이의 standard curve를 그리고 추세선식(y=-ax+b 형태)을 구한다.4) 시료 역시 여러 농도로 희석하여 1~2를 실시하여 흡광도가 0.100~0.700인 농도를 찾아 그 때의 흡광도를 4에서 구한 추세선식에 대입하여 동일한 값을 나타내는 대조군의 농도를 구한다.5) 결과는 대조군(주로 Gallic acid) equivalent mg/mL (또는 g) sample로 표기한다. Total flavonoids contents 시험법1) 시료 1000µL에 5% NaNO2 (w/v) 60 µL와 10% AlCl3 (w/v) 60 µL를 첨가한 뒤 5분간 반응시킨다.2) 1M NaOH 용액 400 µL와 D.W 480 µL를 첨가하고 6분간 반응시킨다.3) 반응이 끝난 뒤 510nm에서 흡광도를 측정한다.4) 대조군(일반적으로 quercetin)은 1~2를 여러 농도에서 실행하고, 흡광도가 0.100~0.700인 농도를 4개 이상 찾아 항산화제 농도와 흡광도 사이의 standard curve를 그리고 추세선식(y=-ax+b 형태)을 구한다.5) 시료 역시 여러 농도로 희석하여 1~2를 실행하여 흡광도가 0.100~0.700인 농도를 찾아 그 흡광도를 4)에서 구한 추세선식에 대입하여 동일한 값을 나타내는 대조군의 농도를 구한다.6) 결과는 대조군(주로 quercetin) equivalent mg/mL (또는 g) sample로 표기한다. DPPH 항산화 측정 실험1) DPPH 시약 용액을 특정한 파장대에서 흡광도(=색농도)가 일정하게 나오도록 조절한다.(일반적으로 1.0000)2) DPPH 시약과 항산화제를 적당한 시간(15~60분) 반응시킨다.3) 시간이 지난 뒤, 1)과 같은 조건에서 흡광도를 측정하고, 그 결과를 기입한다.4) 항산화력을 비교할 대조군은 1)~3)을 여러 농도에서 실시하고,radical scavenging rate(%, 계산은 (최초 흡광도 - 반응 후 흡광도) / 최고 흡광도 x 100 (%))가20~80% 이내인 농도를 4개 이상 찾아 항산화제 농도와 흡광도 사이의 standard curve를 그리고 추세선식(y=-ax+b 형태)을 구한다.5) 항산화력을 측정할 시료 역시 여러 농도로 희석하여 1)~3)을 실시하고, radical scavenging rate가 20~80% 이내인 농도를 찾아그 때의 흡광도를 4)에서 구한 추세선식에 대입하여 동일한 항산화력을 나타내는 항산화제의 농도를 구한다.6) 결과는 항산화제(주로 Trolox) equivalent antioxidant capacity / mL (또는 g) sample로 표기한다. ABTS assay 실험법1) 7.4mM의 ABTS + 2.6mM potasium persulfate 24시간동안 실온에서 암실 보관하여 랃칼 형성2) 실험 직전에 ABTS 용액을 732nm에서 흡광도가 0.700±0.030이 되도록phospate-buffered saline(pH 7.4)으로 희석해서 사용3) 추출물 50μL+ABTS 용액 950μL 실온,암실에서 10분4) 732nm에서 흡광도 측정