♣심화병원성 5월 22-24일 ＜심화＞병원성미생물 교육 후기 ~

[정 밎]

교육 다녀온지 벌써 3주가 다되어가네요

아침일찍 기차타고 대전역으로, 대전역에서 지하철타고 종점인 반석역으로~

대중교통이용이 깔끔해서 좋았어요! 종점이니까 잠깐 자도 되고= =ㅋ

역에서 5분도 안되서 바로 건물을 찾고 올라가니

직원분께서 친절하게 안내를 해주셨어요! 출석부에 이름쓰고

교재받고 자리에서 기다리고 있자니 곧 시작했습니다

첫날 오전시간엔 이론과 실험방법 에 대한 설명을 듣고

다함께 정보원에서 준비해주신 식당에서 점심을 먹었어요

교육일정내의 점심값은 모두 연구원에서 제공해주셨습니다^q^

그럼 본격 실험시작!

우선 리스테리아 증균배지 Listeria Enrichment Broth 225ml 을 만들어 멸균을 시킨후에

시료(냉동만두) 25g을 멸균백에 담고 배지 225ml와 함께 스토마커로 균질화 합니다

그리고 이 상태로 30℃ 24시간 배양

LEB배지는 특이하게 멸균 후가 아니라 전에 서플리먼트를 첨가합니다

클로스트리디움 퍼프린젠스용으로

시료(냉동만두) 25g과 멸균생리식염수 225ml을 균질화 한 것을

Cooked Meat 1g과 증류수 10ml을 넣고 멸균이 완료된

배지의 아랫쪽에 1ml 접종합니다

클로스트리디움 퍼프린젠스의 실험방법은 항상 [시료 1ml를 배지의 아랫쪽에 접종한다] 라고 써있어서

무슨뜻인지 몰랐었는데 ㅋㅋ 이번교육에서 제대로 배워갑니다

35~37℃에서 18~24시간 배양합니다. 이건 혐기배양 아니에요:D

알맞게 배양하면 사진처럼 Cookde Meat배지가 위로 뜨고 그 아랫쪽에

불투명하게 균이 자란것을 확인할 수 있습니다

리스테리아 분리배양을 위한 Oxford 와 PALCAM배지를 만들고

바실러스 배양을 위한 생리식염수 (225ml)을 만들고 나서 첫날 실험교육은 끝이 났습니다 ㅎㅎ

Oxford와 PALCAM배지 멸균후에 서플리먼트를 첨가해주어야합니다

----2일째

둘째날은 바실러스와 퍼프린젠스의 확인시험용인 NA배지와

리스테리아 확인시험용 TSA배지(+0.6%Yeast Extract첨가)를 만드는 것과

어제 만든 후 멸균시켜놓은 Oxford배지와 PALCAM배지에

서플리먼트를 넣고 굳히는 과정부터 시작했습니다

PALCAM배지에 넣는 서플리먼트는 특이하게 알콜로 녹여줍니다

배지가 굳으면 전날 증균배양 해놓은 시료(LEB배지)를 백금이로 취해 스트래킹법으로 접종합니다

30℃ 24시간 배양해주세요

퍼프린젠스의 분리배양배지인 TSC배지는 정성실험과 정량실험의 실험방법이 다르기때문에

같은배지지만 따로 만들었습니다 정량실험은 Pour법으로, 정성실험은 백금이로 스트래킹합니다

전날 배양시켜놓은 Cooked Meat 배지의 배양이 제대로 안되서 표준균주 희석한 것으로

접종했습니다 ㅠㅠ 퍼프린젠스는 분리배양부터 35~37℃ 18~24시간 혐기자(jar)에서 혐기배양시킵니다

탈산소제를 넣고, 혐기indicator(jar벽쪽의 핑크색 테이프)를 붙이고 배양합니다

바실러스는 MYP배지를 멸균 후 Egg Yolk과 Polymyxin B를 넣어준 후

만들어둔 멸균생리식염수 225ml과 시료(냉동만두) 25g을 균질화하여 증균배양 과정없이

정성실험의 경우 스트래킹법으로

정량실험의 경우 5개 배지에 0.2ml씩 스프래딩 접종합니다.

30℃ 24시간 배양. 명확하지 않을경우 더 배양합니다

다음은 확인시험용 N.A.배지에 바실러스와 클로스트리디움 퍼프린젠스를 접종했습니다

원래는 오늘 분리배양용에 접종한것을 내일 확인시험하는게 맞지만 교육은 3일뿐이니까

미리 준비된 균주로 확인시험까지 진행합니다, 확인시험은 모두 스트래킹법으로,

바실러스는 30℃ 18~24시간 / 클로스트리디움 퍼프린젠스는 35~37℃ 18~24시간

리스테리아 확인시험은 TSAgar에 합니다, 스트래킹법으로 30℃, 24~48시간 배양합니다

분리배양, 확인시험용 접종이 끝나면 API키트로도 확인시험을 합니다

물론 직접 배양시킨걸로 할 수 없으니 미리 준비된 균주로 하는거지만요 ㅎㅎ

바실러스 API 50CH / API 20E -36℃ 24시간

리스테리아 API Listeria - 36℃, 24시간

클로스트리디움 퍼프린젠스 API 20A - 36℃ 24시간(혐기적배양)

를 사용합니다

API 키트는 실제로 본것도 처음이고 사용한것도 처음이었습니다 ㅎㅎ 좋은 경험이 되었어요

Sterile saline 1ml(A)에 탁해질때까지 균주(콜로니)를 접종, 잘 교반시켜준 후에

API 생리식염수 5ml(B)에 각 균주별로 지정된 탁도 (ex/ 바실러스 50CH - 2 McF)가 될때까지

(A)를 한방울한방울 넣어가며 맞춥니다

탁도가 일치한다면 (B)의 용액을 스트립에 기포가 생기지않도록 요령있게 채워줍니다

스트립마다 얼마나 채워야하고 오일로 코팅해줘야하는 등 다르므로 메뉴얼을 숙지해야합니다

키트 트레이에 있는 자잘한 홈에는 용액이 마르지 않도록 증류수로 채워주세요

2일째는 생소한 시험도 해보고 3가지 실험을 동시에 진행하다보니 정신없이 지나갔어요 ㅋㅋ

----3일째

3일째는 별도의 실험없이 결과확인과정이 대부분입니다ㅎㅎ

바실러스의 그람염색사진이에요. 양성간균 중간에 바실러스의 포자가 형성되어있는게 확인 가능합니다

대장균으로 음성균도 확인해봤습니다

MYP배지에 자란 바실러스

정량실험의 경우 배지 5개에 각각 0.2ml씩 스프래딩법으로 접종한 것의

확인동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한 것을 결과로 냅니다.

PALCAM배지(검은색 침전물의 gray-green으로 확인) 과

Oxford배지(직경 1mm의 검은집락으로 확인)에 자란 리스테리아

N.A.배지에 접종한 바실러스와 TSAgar에 접종한 리스테리아 ㅎㅎ 확인시험배지에요

바실러스는 엄청 잘 자라는 균이라 단일콜로니 형성하기가 힘들어요 ㅠㅜ

클로스트리디움 퍼프린젠스의 정량실험결과입니다

정성실험으로 스트래킹한 배지에선 나타나지 않았습니다 ㅠㅜ

불투명한 환을 가지는 황회색 집락.. 이라고하는데 언뜻보면 검은색에 가깝네요

다음으로 API키트판독입니다

추가적으로 지시약을 넣어야 하는것도있고

시간에따라 변색되는 것도 있으므로 스피드를 요합니다 ㅎㅎ

바실러스 API 50CH / API 20E 입니다

API 홈페이지에 각각 양/음성 기준이 있고 각각의 패널에 결과를 입력해서

최종판독을 할 수 있습니다

결과를 입력하면 ex) A균일 확률 ~%, B균일 확률 ~% 이런식으로 나옵니다

리스테리아 API Listeria

클로스트리디움 퍼프린젠스 API 20A

셋다 정확하게는 안나왔지만..ㅎㅎ 다음에 기회가 된다면 그땐 정확하게 할 수 있기를!!

다른 식품업에서 오신 분들과 같은 수업을 듣고 같은 실험을 하고있다는게

조금은 신선한 느낌이었습니다 ㅎㅎ 내가 모르는 다른 세상이 이제서야 눈에 들어왔다고 해야하나 ㅋㅋ

실제로는 처음보는 균도 있고, 현미경도 오랜만에 만지고 생소한 실험법도 있고

학부생시절로 돌아간 듯한 3일이었습니다 ㅎㅎㅎ

식사도 같이하고 수업 외 시간에 대전 시내에 나가 구경도 하고, 연락처도 교환하고..

또 만날 수 있었으면 좋겠습니다^q^..제 연락 받아주세요 언니들♡

이상, 5월 22~24일 심화 병원성미생물 교육과정에 참가했던

연구원 정밎이었습니다:D

[머큐리v]

와 좋은자료 감사합니다

[안전지기_윤아영]

즐거운 교육이셨던 거 같네요~~~ 사진으로도 열공모드였던 느낌이 팍팍! 듭니다^-^ 후기 감사합니다~~