조직검사의 종류와 표본제작과정

[neonidas]

Histotechnology / 조직검사학

조직검사의 종류와 표본제작과정

1. 조직표본 제작과정

   고정 → 수세 → 탈수 → 투명 → 침투 → 포매 → 삭정 → 박절 → 염색 → 봉입

2. 검사재료의 관리

  ① 일반목적 : 10% formalin 유리병, Plastic bag에 넣어 밀봉

  ② 특수목적 : EM 고정액 - Glutaraldehyde

  ③ 독물학적 연구 : 동결(dry ice) 상태로 이송

  ④ 검체를 고정 없이 운반할 경우 : 냉동금지, 1日 이상 냉장금지

3. Anatopsy (부 검)

  ① 의학적 부검 : 병리해부, 계통해부

  ② 사법해부 : 형사소송법에 의해 실시

  ③ 행정해부 : 횡사 時

  ④ 부검원칙 : 자격 - 의대의 해부학, 병리학 교수 또는 해부병리 전문의

　　　　　　　     　　장기는 유족과의 협의 하에 표본으로 허용

조직검사재료의 절취와 고정

1. 생검 (Biopsy)

  ① 시험절제 검체 : 진단 or 질병 진행 과정의 변화 追施 목적

    ⅰ) 절제생검 - 병변 부위의 국소 조직편 절제

    ⅱ) 펀치생검 - 피부, 자궁경부, 소화관, 기관지

    ⅲ) 침생검 - 가는 침으로 찔러 지름 1~2mm, 길이 10~15mm의 소조직편 절취

    ⅳ) 소파생검 - Culet을 이용 조직을 떼어내는 방법  ex) 유산

    ⅴ) 천자흡입생검 - 22~23 gauge의 가는 침을 이용 미소조직을 절취

  ② 수술검체 : 환자 치료 목적으로 절개한 검체

      검사목적 : ⅰ) 수술 전 진단의 확인

                      ⅱ) 종양의 악성도 판정

                      ⅲ) 병변의 범위 확정

                      ⅳ) 완전절제의 성공여부 및 환자의 예후 판정

                      ⅴ) 치료방침의 정보제공

2. 병리조직 진단의 원칙

    육안적 소견 + 현미경적 소견을 종합하여 판정

3. 조직편의 두께 : 1 * 2 * 0.4 cm²

4. 각종 장기의 절취

  ① 위장 : 대만부를 절개 소만부에서 절취, 코르크로 고정

                swiss roll : 병소부위가 극히 적어 잘 보이지 않을 때 사용

  ② 자궁 : Y or T로 절개

  ③ 신장 : 사구체가 반드시 포함되어야 한다

  ④ 폐장 : 관류 고정

  ⑤ 갑상선 : 반드시 피막과 인접 정상의 실질조직이 포함되어야 한다

  ⑥ 골격근 : 겸자로 근 수축방지

5. 고정의 목적 : ⅰ) 자가융해 방지

                        ⅱ) 조직구성 성분의 융해 방지

                        ⅲ) 부패방지

                        ⅳ) 조직손상 방지

                        ⅴ) 염색의 매염작용

6. 고정액의 삼투압 : 고장액 - 조직이 가장 좋게 보존

                              등장액 - 0.85 ~ 0.9 % : 세포 팽창

                              저장액 : 세포 팽창

7. 고정에 의한 용적 변화 : 고정 후 포매 시 20~40% 정도의 용적 감소

8. 고정시간 : 고정액 침투 상태에 따라 색과 정도 다름

                    원조직 : 선홍색  /  고정후 조직 : 회백색

9. 고정액의 량 : 통상 조직편 체적의 50~100배 ( OsO₄의 경우 약 5배 )

10. 고정액의 온도 : 일반적으로 실온 (EM : 0~4℃)

11. Baker에 의한 고정제의 분류

응고형	비응고형
Mercuric chloride	Formaldehyde
Picric acid	Potassium dichromtic
Chromium trioxide	Acetic acid
Alcohol	Osmium tetroxide

12. 고정제의 종류 및 특성

  ①포름알데히드 (포르말린)

    ⅰ) 장점 : 조직편의 형태가 잘 보존되며, 구조파괴 or 염색성이 저하되지 않는다

                   특별한 색에 착색되지 않으며, 각종 염색법 or 도은법이 용이함

                   조직내 침전물 출현이 적다

                   동결절편 제작에 좋다

                   일반적인 고정액 : 10% formalin (pH 7.0 중성)

    ⅱ) 포르말린 중성화 : 탄산칼슘(CaCO₃)을 가하여 진탕하여 방치

    ⅲ) 포르말린 색소 제거법

          카다세위치법 : 70% 알콜 + 염화암모늄(NH₄Cl)

          베로카이법 : 80% 알콜 + 1% 수산화칼륨(KOH) 혼합액

  ② 글루타르알데하이드 : EM, LM 검사 겸용.  6% 多用

  ③알콜 : 거의 모든 단백질을 변화 없이 고정

              글리코겐, 점액, 철, 칼슘, 요산 등 다른 고정액에서 용출되기 쉬운 물질도 완전히 보존

              무수 알콜로 고정시 탈수 조작까지 완료

              혼합 고정액 : 카르노아(Carnoy)액

  ④ 염화 제 2 수은 : 세포내 성분 고정에 우수  /  염색체 고정엔 부적합

                              승홍 : HgCl₂→ 금속기구 사용 금지

                              승홍계 고정액 : 젠커, 헨리, 멕시모우, 수사, 샤우딘

    ⅰ) 승홍계 색소 제거 (옥도化)

         : 요오드액에 의해 침착물 제거 → 티오황산나트륨(Thiosulfite)으로 요오드 제거

  ⑤피크르산 : 고정과 동시 약하지만 탈회작용이 있음

                     브앙, 로스만, 겐드레, 드보스크 - 브라질

                     브앙 : Picric acid + 37~40% formalin + Glacial acid

  ⑥ 크롬산 및 크롬염 : 탄수화물 고정

  ⑦ 아세트산 - 장점 : 핵 or 염색체 보존에 적합

                    - 단점 : 지질, 탄수화물은 고정이 안됨 / 골지체, 사립체 파괴

  ⑧ 사산화오스뮴 - 고정시 단백질, 지질, 탄수화물이 염색 (Black)

                          - 장점 : 세포 미세구조관찰, EM, 지질 증명시 좋다

                          - 단점 : Hematoxylin 염색이 안됨   /   알콜과 접촉하면 불용성 침전물 생성

  ⑨ 아세톤 : 경화작용이 강해 이용빈도가 드믊

13. 고정제와 고정액의 종류

  ① formalin계

      : 10% formalin, Neutral buffered formalin(NBF), Formol-saline, Formol-calcium

  ② Alcohol계

      : Carnoy

  ③ HgCl₂(승홍)계

     : Zenker, Helly, Maximow, Heidenhain's susa, Schaudin

  ④ Picric acid계

     :  Bouin, Rossman, Gendre, Duboscq-Brazil

  ⑤ Chromic acid계

     : Muller, Regard, Orth

  ⑥ Osmium tetroxide계

     : Fleming, Champy

  ⑦ Karseling solution : 교육용, 연구용으로 장기간 보존을 요할 때

14. 포매 : 특수한 매질(포매제)을 사용하여 조직에 침투시켜, 조직편 전체를 일정한 모양으로 경화시키고 동시에 빈 공간을
               메워 조직이 큰 해가 없도록 하는 과정

15. 포매제의 종류 : 파라핀, 셀로이딘, 카-보왁스, 젤라틴, 합성수지 등

16. 포매제의 조건

  ① 조직내로 완전히 침투한 후에 액체에서 고체상태로 쉽게 전환될 수 있어야 한다

  ② 액체상태에서 쉽게 세포 또는 세포소기관내로 침투될 수 있어야 한다

  ③ 고형화 하는 동안 부피의 변화가 없어야 한다

  ④ 박절시 균질성, 강도, 유연성 및 탄력성이 유지되어야 한다

  ⑤ 염색전 제거가 쉬워야 하며, 염색액의 변질을 일으키지 말아야 한다

  ⑥ 저렴해야 한다

17. 포매제의 특징

  ① 파라핀 포매 - 소요시간 단축, 간단, 얇게 박절, 연속절편가능, 염색조작 간편, 다방면 염색가능, 장기간 보관

                        - 유기용매 사용, 지방의 용해 발생, 심한 수축과 경화, 큰 표본을 만들 수 없다

  ② 셀로이딘 포매 - 수축과 경화가 없다. 큰 검사재료의 포매 가능

                           - 포매 시간이 길다. 얇은 박절이 不, 염색응용범위가 적다

  ③ 카-보 왁스 포매 - 고정 후 수세한 조직에 그대로 침투가 가능, 수용성이기 때문에 지방검출이 좋다

  ④ 젤라틴 포매 - 동결절편(O.C.T compound) 작성시 보조수단으로 사용.

  ⑤ 합성수지 포매 - EM용, 강도가 가장 강함 (에폭시, 메타크릴)

18. 수세 - 고정액의 제거

     : 흐르는 수돗물에 조직편을 넣어 수시간 수세를 행하는 것이 통례 (12hr)

  ① formalin계, chromic acid계, osmium tetroxide계 : 수세

  ② picric acid계 : 70~80% 알콜로 세척

  ③ 무수알콜, Carnoy액 : 직접 무수알콜로 세척

19. 탈수 - 탈수제 : 알콜, 에탄올  / 저농도 → 고농도

    ⊙ 50%알콜→60%→70%→80%→90%→95%→무수알콜Ⅰ→무수알콜Ⅱ

        무수알콜Ⅱ에 물의 함유여부 확인을 위한 Indicator → 무수황산동

      ⇒ 알콜에 함유된 물은 점차 무수황산동과 결합 → 청색결정으로 변한다

    ⊙ 무수알콜의 검정 - 벤젠 or 크실렌에 알콜을 몇 방울 떨어뜨림 → 뿌옇게 변함

                                 - 탄화칼슘을 가함 → 아세틸렌가스에 의해 독특한 냄새가 나며 수산화칼슘에 의해 액이 혼탁해 짐

20. 알콜 이외의 탈수제

     : 변성알콜, 메탄올, 이소프로필알콜, 셀로솔브, 트리에틸인산, 디메틸옥시테트라글리콜, 디옥산, n-부틸 알콜

21. 투명의 목적

     : 탈수제와 침투제가 서로 혼합될 수 없는 경우 거치는 중간 단계로서, 탈수제를 제거하는 과정

22. 투명제의 종류

  ① Xylene : 가장 흔히 사용

  ② Toluene : xylene에 비해 조직 경화가 적게 발생

  ③ Benzene : 우수하나 발암물질로 사용중지

  ④ Chloroform : 부피가 큰 조직의 투명에 효과적

  ⑤ Cedarwood oil : 단단한 조직의 투명에 좋다

  ⑥ Dioxane

  ⑦ n-butyl alcohol

23. 파라핀 침투

     - 연질 파라핀 융점 : 45~52℃ / 연성조직(간, 근육, 장기), 겨울

     - 경질 파라핀 융점 : 56~58℃ / 경성조직(자궁), 여름 → 포매時 사용

  ① 수동침투 - 항온기의 온도는 약 58~60℃로 조절

                    - 4~6h : 뇌, 피부, 치밀골

                    - 3h 이내 : 혈액, 심한 출혈조직, 근육, 섬유성 결합조직

  ② 자동침투 - 자동침투기 - ⅰ)온도유지기능 ⅱ)이동기능 ⅲ)진공유지기능 ⅳ)교반기능

                    - 16시간 진행표를 多用

  ③ 진공침투 - 감압(reduced pressure)하에서 파라핀을 침투

24. 파라핀 포매

    ⊙ 조직포매센타 - 파라핀을 녹이는 파라핀 분주기(wax dispenser)

                            - 조직의 포매를 위한 가온판(heated plateform)

                            - 파라핀을 식히는 냉각판(cooled plateform)

    ⊙ L형 철제 포매틀 이외에 사용하는 것

     - Base mold

     - Embedding ring - Embedding cassette → 박절時 대목 역할

                                 - Embedding cassette cover

25. 셀로이딘 포매

    ⊙ 용매 : eter + 무수알콜 → 2%, 4%, 8%로 만듦

    ⊙ 투명제 : eter 알콜동량혼합액 (∵셀로이딘 경화時 chloroform 증기에 노출시켜야 하기 때문)

26. 카-보 왁스 포매

     : 고정 후의 조직을 수세하여 탈수하는 것이 아니고 직접 카-보 왁스에 넣어 포매 한다

27. 젤라틴 포매

     : 동결절편時 사용하나 최근에는 OCT콤파운드를 사용한다

28. 합성수지 포매 : EM용

  ① 에폭시수지 - 에폰(epon), 아랄타이트(araldite) 〈주로 epon812 사용〉

  ② 메틸메타크릴레이트

  ③ 글리콜 메타크릴레이트(GMA)

29. 박절기

회전형 박절기(Rotary type)	활주형 박절기(Slide type)
Block이 작을 경우	Block이 클 경우
연속절편 제작에 아주 적합	연속절편 제작이 곤란함
칼날 고정, block이 이동	칼날이 움직이며 block이 이동
대량의 절편이 가능	낱장의 절편 필요시 使用

30. 박절용 칼

  ① 쐐기형 : 현재 가장 많이 사용

  ② 평면.오목형 : 셀로이딘 블록의 박절 時

  ③ 양면.오목형 : 파라핀 블록의 박절 時

  ④ 끌형 : 비탈회 골조직 時

31. 칼의 연마정도를 판정하는 기준

     : 약 60~100배의 저배율에서 곧은 일직선으로 나타나면 양호

32. 칼의 연마

     - 숫돌갈기, 자동연마기, 혁지갈기

33. 칼의 기울기

     : 틈의 각은 보통 5~10°사이가 적당하나, 자궁이나 골조직과 같이 딱딱한 것은 약 15°정도에서 더 박절이 잘 된다

34. 절편의 접착제

  ① 당        ② 전분        ③ 젤라틴         ④ 난백알부민 - 계란 흰자 → 50:50 + Thymol

                                       　　　　　　　　　　　　　　- Glyceroll

35. 절편의 부착 : 절편은 파라핀의 융점보다 5~10℃ 낮은 물 표면 위에서 주름을 편다.

                          부유온수조의 온도 : 45~50℃

36. 동결절편의 목적

  ① 신속한 진단을 하여야 할 경우

  ② 조직내에서 지질을 증명해야 할 경우

  ③ 효소조직화학적 검사

  ④ 형광항체법 실시

  ⑤ 중추신경계 구성성분의 염색

  ⑥ 건과 같이 파라핀 박절이 어렵고, 평평하게 펴지지 않는 조직일 때

  ⑦ 자기방사법을 사용할 경우

37. 동결절편의 한계

  ① 저온에서 오래 방치 時 동결에 의한 인공산물 발생

  ② 영구 표본 작성을 위해선 다시 파라핀 절편 제작이 필요

  ③ 얇은 절편(1~3㎛)의 리본 생산이 어려워, 해상력이 떨어짐

38. 동결절편 제작

     : OCT compound로 포매하여 조직을 disc에 병소부위가 상향되게 하여 동결(OCT compound가 고정 역할)

39. 동결제의 종류

  ① 고체이산화탄소, 액체이산화탄소 (-70℃)

     : 동결속도가 가장 느리지만 비교적 안정한 것 중 하나

  ② 액체질소 (-196℃)

     : 현재 사용 중인 동결제중 동결속도가 가장 빠르며 얼음결정에 의한 인공산물이 없다

  ③ 에어로졸 스프레이 (약 -50℃)

40. 전자현미경시료의 고정 (냉장온도에서 실행-탈수까지)

    ⊙ 전고정제 - Glutaraldehyde

                         Formaldehyde

                         Paraformaldehyde + Glutaraldehyde (50:50)

    ⊙ 후고정제 - Osmium tetroxide

                         Potassium formanganade

41. EM용 절편의 두께에 따른 간섭색

     : 회색과 은색만을 사용 (90nm 이하)

42. 조직구성 성분을 감별하기 위한 조직학적 방법

  ① 콘트라스트 : 위상차 or 편광현미경을 이용하여 볼 수 있는 것

  ② 색상을 변화시켜 봄

     : 염료에 의해 염색된 조직은 조직을 통과하는 빛의 파장을 변화시켜 색을 나타냄

43. 염색방법의 분류

  ① 생체염색 : 세포에 그다지 강한 변화를 주지 않으면서 특정 염료로 염색하는 것

  ② 선택적인 용해성에 의한 염색

     : 조직성분에 녹는 염료를 통상 용해성염료라 부르며, 대부분은 중성지방이나 지용제에 극히 쉽게 용해되고 물에
       용해되지 않는 성질을 갖고 있어서 지용성 염료라 부른다

       ex) 수단염료 (sudan black B, oil red O)

  ③ 화학적 정색반응에 의한 염색

     - PAS, Feulgen 반응 ⇒ 쉬프(Schiff)시약 + 알데히드기 → 적색염료로 전환

     - Perls 반응 ⇒ Potassium ferrocyanide + Fe³―――→ Prussian blue

  ④ 금속침투법

     : 일부 금속화합물은 특정 조직성분과 반응하면 불투명한 흑색 침전물의 금속으로 환원되는 성질을 이용 ex) 도은법

  ⑤ 염료에 의한 염색

    ⊙ 천연염료 : 인디고, 코치니일, 카르민, 올세인, 헤마톡실린

      - hematoxylin : 자체로는 염색능이 없기 때문에 자연 산화 또는 화학적인 산화에 의해 헤마테인(hematein)으로
　　　　　　　　　　전환시켜야 비로서 염료로의 기능을 가지며, 염색시 매염제가 필요

    ⊙ 합성염료 - 1865년 영국의 퍼킨(W.H. Perkin)이 아진(azin)계의 염료발견

                      - 아닐린 염료 → 코울타르 염료로 불림

44. 염료의 화학구조

      염료 = 벤젠 + 발색단 + 조색단 + 변색제    /   벤젠 + 발색단 = 색원체

  ① 발색단(chromophore) : 불포화 결합을 가진 특정 원자단

      - 퀴노이드고리, 아조커풀링, 니트로기

  ② 조색단(auxochrome) : 양이온성(염기성) 또는 음이온성(산성) 성질을 띠고 있어서, 염료분자의 염색능을 결정한다

      - 염기성조색단 : 아미노기

      - 산성조색단 : 슬폰산기, 카르복실기, 히드록시기

  ③ 변색제(modifier) : 색의 농담을 변화시킴으로 이 기를 간직하는 염료는 색상이 짙게 나타남

      - 메틸기, 에틸기

  ④ 염료 : 발색단에 의해 색이 나타나며, 조색단에 의해 이온화하고, 최종 색상은 변색제에 의해 변화하거나 짙어지는
                유기화합물

45. 염기성, 산성, 중성 염료

  ① 염기성 염료 - 염료이온 + 무색의 염소이온

                        - Methyl blue, Methylen green, Gentian violet, Thioine, Toluidin blue

  ② 산성염료 - 염료이온 + 무색의 나트륨이온

                    - Eosin Y, Erythrosin, Picric acid, Orange G, Acid fuchsin

  ③ 중성염료 - 물에는 잘 녹지 않지만 Alcohol에는 잘 용해 됨

                    - Giemsa, Eosin acid, Methylen blue

46. 변색성 염색

     : 원래 염료가 지닌 고유의 색깔과는 다르게 발색되어 그 주변에 염색된 다른 성분과 구별되는 현상

    ⊙ Toluidine blue 등의 티아진계 염료와 Crystal violet 등의 트리아릴메탄계 염료가 사용

    ⊙ 비만세포 과립, 연골의 기질, 결합조직, 상피성 점액, 유전분 등

    ⊙ 변색성 염색을 완료한 표본을 천연 또는 합성수지로 봉입 하면 정색성으로 전환할 수 있으므로 반드시
        수용성 봉입제를 사용해야 한다

47. 진행성과 퇴행성 염색

  ① 진행성 염색 (Progressive staining)

     : 조직의 여러구성 성분이 어떤 정해진 순서에 따라 차례로 염색하는 것으로, 염색 진행과정의 여러 시점에서 현미경
       관찰을 통하여 목적하는 성분이 선택적으로 염색되었을 때 염색을 정지시켜 수세하는 방법 → Mayer의 H.E stain

  ② 퇴행성 염색 (Regressive staining)

     : 일단 조직 전체를 과염시킨 다음 목적하는 부분만을 남기고 그 외의 부분을 탈색하는 방법

48. 탈색 (or 분별)

     : 목적하는 부분을 제외한 과염 부분으로부터 염료를 제거하는 것

       물, Alcohol, Acid, 산화제, 매염제, 염료, 완충액 등 사용

49. 염료의 표준화

      - 명칭의 혼란을 피하려고 영국에서 1924년 SDC를 발족

      - 염료색인(Color Index)제도를 사용. 현재 미국의 ATCC와 공동제작

      - 모든 염료는 염료색인 번호(color index number : C.I. NO)로 정확히 확인, 동정

50. 염색의 전처리

  ① 파라핀 절편 - 파라핀을 유기용매(크실렌, 벤젠)로 제거 → 탈파라핀 과정

  ② 셀로이딘 절편 - 무수알콜에 통과하여 에테르, 알콜에 넣어 완전히 셀로이딘을 제거

51. 봉입

  ① 목적 : ⅰ)퇴색방지  ⅱ)부패방지  ⅲ)손상방지  ⅳ)이물질 혼입방지

  ② 점도가 높은 액을 절편에 바르고 coverglass로 덮어 밀폐하는 과정

  ③ - 수용성 봉입제 - 글리세린, 고무시럽, 젤라틴, 레블로스시럽

      - 수지성 및 유성 봉입제 - Canada balsam, 세다오일 등

  ④ 봉함 : 봉입 후 coverglass의 둘레를 더 특수한 물질로 밀봉하는 것

52. 퇴색의 원인

  ① 고정액을 충분히 닦아내지 않았을 때

  ② 봉입제가 산이나 알칼리성으로 변했을 때

  ③ Slide, Cover glass가 불량할 때

    ⊙도은법 표본은 통상 반영구적 보존 가능

53. 헤마톡실린 염색의 사용

매염제	산화제	예	응용
Alum	Sodium iodate	Mayer	핵 염색에 사용(진행성)
Alum	Mercuric oxide	Harris	핵 염색에 사용(퇴행성)
Iron	Natural	Weigert	산성염료의 대조염색에 사용
Iron	Natural	Verhoff	탄력섬유
Tungsten	Natural or potassium	Mallory
	Permangante	PTAH	섬유소.횡문근.신경교질섬유

54. Harris의 hematoxylin 조성

    ⊙ Hematoxylin + 95% Alcohol + Potassium alum + 산화제 2 수은(Mercuric oxide) + 빙초산

        빙초산 → 핵염색을 뚜렷하게 하기 위해 사용

55. Hematoxylin-Eosin 중 염색 (H E stain)

  ① 파라핀 제거 (탈파라핀) - Xylene

  ② 함수 - 100% Alcohol → 70% Alcohol

  ③ Zenker 고정액 사용 時 - 옥도化

  ④ 핵 염색 - hematoxylin

  ⑤ 탈색 - 1% HCl Alcohol

  ⑥ 중화 - Ammonia water

  ⑦ 세포질 염색 - Eosin

  ⑧ 탈수 - 95% Alcohol → 100% Alcohol

  ⑨ 투명 - Carboxylene → Xylene

  ⑩ 봉입

56. H E stain 결과

      - 세포핵 및 연골 → 청색

      - 다른 조직성분 → 약간씩 짙기가 다른 분홍색으로 염색

결  합  조  직

 (1) 교원섬유 염색 - Collagen fiber stain

    ⊙ 특수염색을 필요로 하는 경우

     ⅰ) 간경변증, 신장의 여러 질환 등에서 볼 수 있는 교원섬유의 증식과 같은 섬유성 변화의 염색 時

     ⅱ) 신경 - 근질환에서의 조직변화 감별

     ⅲ) 섬유육종과 평활근 육종의 감별

  ① Van Gieson 염색

     ⅰ) 조직표본 : 어느 고정액을 사용해도 좋은 결과를 나타냄

     ⅱ) van Gieson 액의 제조

         : 피크르산 포화수용액 + 1% acid fuchsin ⇒ 주시약

     ⅲ) 염색과정 - Weigert Iron hematoxylin

                        - van Gieson액에 2~5'

                        - 95% Alcohol부터 신속히 탈수

     ⅳ) 결과 - 세포핵 : 흑갈색~흑색

                  - 교원섬유 : 적색

                  - 근육, 세포질, 적혈구, 섬유소 : 황색

  ② Masson trichrome 염색

     ⅰ) 조직표본 : Bouin, Zenker, Helly액이 특히 우수

     ⅱ) 염색과정 - Bouin액에 다시 고정

                        - Weigert 철헤마톡실린 / Biebrich scarlet - acid fuchsin

                        - aniline blue액 or 2% light green

     ⅲ) 결과 - 교원섬유, 점액 : 청색

                  - 세포질, 근육, 케라틴 : 적색

                  - 세포핵 : 흑갈색

  ③ Heidenhain 의 'AZAN'염색

     ⅰ) 결과 - 세포핵, 적혈구, 섬유소 : 적색

                  - 근육 : 황색

                  - 교원섬유, 세망섬유 : 청색

 (2) 탄력섬유 염색

    ⊙ 특수염색을 필요로 하는 경우

    ⊙ 혈관질환, 신장질환, 비정상 심판막

  ① Verhoeff의 염색

     ⅰ) 염색액의 제조 : 10% ferric chloride 수용액이 매염작용

     ⅱ) 염색과정 : 2% ferric chloride 수용액이 탈색제로 이용

     ⅲ) 결과 - 탄력섬유 : 흑색

                  - 세포핵 : 흑갈색

                  - 교원섬유 : 적색

                  - 근육 : 황색

  ② Weigert의 resorcin fuchsin 염색 ⇒ 흑청색

  ③ Modified Taenzer - Unna orcein 염색 ⇒ 흑갈색

  ④ Gomori의 aldehyde fuchsin 염색 ⇒ 짙은 자색

 (3) 세망섬유 염색

    ⊙ 도은법을 행해야 할 경우

     ⅰ) 간침생검 조직에서의 간경변성 변화

     ⅱ) 림프세망세포 종양 (lymphoreticular neoplasm)

     ⅲ) 기타 종양

  ① Gordon과 Sweets의 염색 ⇒ 흑색

  ② Gomori stain - 도은법

     ⅰ) 탈파라핀, 함수, 수세

     ⅱ) 1% Potassium permanganate 수용액에 1~2' 산화

     ⅲ) 수돗물에 헹구고, 3% Potassium metabisulfite 수용액에 표백 후 수세

     ⅳ) 2% Iron alum 수용액에 1' 증감

     ⅴ) 수돗물에 잘 수세하여 증류수에 2회 헹굼

     ⅵ) 암모니아성은액에 1분간 침투, 증류수에 가볍게 헹굼

     ⅶ) 10% 포르말린에 3분간 환원, 수돗물로 잘 수세

     ⅷ) 0.2% gold chloride 수용액에 10' 조색

     ⅸ) 증류수에 헹구고, 3% Potassium bisulfite 수용액에 1' 처리

     ⅹ) 증류수에 헹구고, 2.5% sodium thiosulfate(hypo) 수용액에 2~5' 정착

      xi) 수돗물에 수세

     xii) 탈수, 투명, 봉입

     결과 - 세망섬유 : 흑색

            - 세포핵 : 회색

            - 교원섬유 : 짙은 회색~자색

 (4) 기저막 염색

      신사구체 질환(glomerular disease)진단에 사용

      Periodic acid - methenamine silver (PAM) 염색 ⇒ 흑색

 (5) 섬유소 염색

      Martius - Scarlet - Blue (MSB) 염색 ⇒ 초기 : 황색, 후기 : 청색

 (6) 골격근 염색

      의의 - 횡문근육종과 다른 육종의 감별

              - 근이영양증의 진단

              - 중심핵 질환과 네마린 근염의 진단

  ① Phosphotungstic Acid - Hematoxylin (PTAH) 염색

     ⅰ) 조직표본 : 고정액은 Zenker액이 가장 좋은 결과를 보여줌

     ⅱ) 염색과정 - 포르말린에 고정된 절편은 56℃의 Zenker액에 옮겨 3hr 후고정

                        - 아메바 염색에 good !!

     ⅲ) 결과 - 근육의 횡문, 세포핵, 미토콘드리아, 뇌의 성상세포 : 청색 (정염색)

                  - 교원섬유 : 주황색 (변색성염색)

  ② Modified Gomori trichrome 염색

     ⅰ) 조직표본 : 동결절편 이용

     ⅱ) 결과 - 근육, 결합조직 : 녹색

                  - 미토콘드리아, 수초 : 적색

                  - 세포핵 : 자색

골조직의 표본제작 및 탈회

1. 골 조직표본의 목적 - 종양(탈회 o)

                                - 골다공증 (탈회 x) - 비탈회 조직표본

2. 생검검체 (Biopsy specimen)

   : 대사성골질환(골다공증)의 진단에는 칼슘이 침착된 골조직과 골양질 사이의 상호 관련성을 검사하기 때문에 비탈회상태의
　  절편을 작성하는 것이 필수  (장골능 - iliac crest)

3. 탈회

     조직내의 칼슘을 산(acid)과 반응시켜 용해성 칼슘의 형태로 전환하여 제거하는 방법

  ① 통상 고정액에 의한 탈회 (태생 시 조직이나 작은 조직편에 한함)

      - Bouin, Muller, Flemming, Susa 액 사용시 고정과 동시에 탈회

  ② 탈회 전처리 (고정)

      고정 → 수세 → 탈지 → 탈회 → 중화

  ③ 탈회제

     ⅰ) 산성 탈회법                        ⅱ) 전해질 탈회법

     ⅲ) 이온교환수지 탈회법           ⅳ) 방사선 탈회법

    ⊙ 산 탈회제

      - 질산(nitric acid. HNO₃) : 5~7.5%의 질산이 사용

      - 질산 프로로글루신(phloroglucin) 액

      - 삼염화초산(trichloroacetic acid) : 치아 탈회 時 使用

  ④ 탈회완료의 식별

      - 칼로 조직편의 말단을 잘라보던가 침으로 찔러서 저항이 없으면 완료된 것으로 판정

      -  아르니움(SS Arnium)의 수산칼슘법을 사용하여 탈회의 완료를 판정

      탈회액 5ml + 메칠레드 2drop + 강 암모니아수 + 수산암모늄 포화수용액 2ml → 1hr 방치

      ⇒ 수산칼슘의 흰색 침전물이 생김

4. 연마표본

      비탈회 골조직의 포매에는 합성수지 사용

신 경 조 직

1. 신경세포

 (1) 니슬소체

      - 세포체내에 있어서는 일정한 형태, 크기, 밀도, 배열은 보이며, 신경세포의 핵주위 및 수상돌기 기시부에 출현

      - 염색에 있어서는 호염기성이고, 알칼리에 용해되며, 에테르, 알콜, 클로로포름엔 녹지 않음

      - 피로닌(pyronin)에 염색되지만, 포일겐(Feulgen)반응은 음성이다

  ⅰ) 니슬소체의 고정과 염색

     ① 고정 : 무수알콜, 카르노아액, 알콜 - 포르말린액 등이 주로 사용 (Alcohol계열)

     ② 염색(염기성 염료) : 메틸렌 블루, 톨루이딘 블루, 티오닌, 크레실 에히트바이올렛 등이 사용

  ⅱ) 신경원섬유 염색 (뽀디안(Bodian)의 도은법)

  ⅲ) 수초염색 :  Weigert법,  Pal-Weigert법,   Kluver-Barrera법

2. 염색 및 결과

 (1) 니슬소체 염색 (Toluidin or thiomin 염색)

  ⅰ) 표본 : 신선한 조직을 1㎤이하로 절취하여 95~100% alcohol에 넣은 후 24hr이 지난 다음에 신선한 alcohol에
                 옮겨 4~5日 고정한다

  ⅱ) 결과 : 니슬소체, 신경세포의 핵막 핵소체 - 청색 or 청자색

 (2) 신경원섬유 염색

  ⅰ) Cajal의 조직편 도은법

  ⅱ) BiolchowskyㆍGros - Schultze 동결절편 도은법

 (3) 성상교세포 염색

  ⅰ) Cajal법

 (4) 신경교섬유 염색

  ⅰ) Holzer법

핵    산

I . 병리조직학적 의의

    ⊙ 포일겐( Feulgen)반응이 DNA만을 염색하는데 비해 methyl green - pyronin(MG-P)염색은 DNA와 RNA 양자를
        모두 증명할 수 있는 방법

Ⅱ. 핵산의 증명

 (1) 포일겐 반응 (DNA만 염색)

     원리 : 핵산을 1N HCl로 60℃에서 가수분해하면 DNA의 디옥시리보스(deoxyribose)와 결합되어 있던 퓨린 염기가
               분리되면서 알데히드기가 형성된다.
               이 알데히드기에 Schiff시약이 반응하여 원래의 염기성 푹신(basic fuchsin)과는 다른 장파장의 포일겐 염료
               복합체를 만드는 반응

     결과 - DNA - 적자색

            - 세포질 - 녹색 (∵ 1% light green으로 대조 염색)

 (2) MG-P (Methyl Green-Pyronin) 염색 (핵산의 일반염색)

      장점 : 형질세포의 핵염색질은 응축되어 규칙적으로 핵막에 인접하여 배열되어 청록색의 마차바퀴 모양으로 나타나며,
                RNA가 존재하는 핵소체와 리보솜이 달라붙어 있는 조면소포체가 적색으로 염색

      결과 - DNA - 녹색 or 청녹색

             - RNA - 짙은 적색

             - Plasma cell - 짙은 적색

탄  수  화  물

Ⅰ. 조직내 탄수화물의 분류

  ⅰ) glycigen : 단순다당류 : 부갑상선세포에 존재

  ⅱ) 중성 mucin : 위점막에서 분비 : 갑상선의 Colloid에 존재

  ⅲ) 산성 mucin : 장에서 분비

  ⅳ) muco protein : 기저막에 존재 : 탄수화물 함량 4% ↑

  ⅴ) glyco protein : 다당류 + 단백질 : 탄수화물 함량 4% ↓

  ⅵ) glyco lipid

Ⅱ. 병리조직학적 의의

      하부위장관계에서 분비되는 점액은 상부위장관계와 달리 O-acetylatedsialic acid를 함유

Ⅲ. 탄수화물의 보존과 고정

  ⅰ) 고정제 : 무수알콜, Formol-calcium, Duboscq-Brazil, Gendre, Bouin 등

  ⅱ) 조직편의 두께 : 고정할 조직은 2.0mm를 초과하지 않는 것

  ⅲ) 고정온도 : 0~4℃에서 고정

Ⅳ. Glycogen 과 Mucin의 염색특성

   PAS (Periodic acid - Schiff)반응과 염기성염료(alcian blue, azure A, thionine)를 사용하는 방법

  ⅰ) Glycogen증명 : 베스트카르민(Best carmine)과 Iodine 염색

  ⅱ) Mucin증명 : 무시카르민(Mucicarmine) 염색

Ⅴ. 염색법

 (1) PAS 반응

  원리 : 조직에 존재하는 다당류는 과요오드산(periodic acid)으로 산화시켜 알데히드를 유리해내는 과정과 이 알데히드를
            Schiff시약으로 증명하는 2 단계 반응

  용도 : 당단백질 또는 중성당을 함유한 점액물질의 국재에 있어서 진가 발휘

  염색액 : Schiff시약 (basic fuchsin + 1N HCl + sodium metabisulfite + 활성탄)

  방법 - ⅰ) 1% Periodic acid 수용액에 5' 산화 → Aldehyde기 유리

         - ⅱ) Schiff시약에 10' 반응

         - ⅲ) Harris hematoxylin에 핵염색

  결과 - PAS양성 물질 - 적자색

         - 핵 - 청색

  Schiff시약 검정 : 증발접시에 놓고 formalin을 가했을 때 연분홍색으로 변함

 (2) Diastase - PAS 반응

  Diastase : glycogen 가수분해 효소

  결과 - 소화액 처리 절편 - 음성

         - 증류수 처리 절편 - 적자색

지   질

Ⅰ. 지질의 분류

 (1) 단순지질

  ① 중성지방(Neutral fat) - 인체에서 가장 풍부. 저장지질의 90% 이상

  ② 왁스(Wax)

 (2) 복합지질

  ① 인지질(Phospholipid)

  ② 스핑고지질(Sphingolipid)

 (3) 유도지질

  ① 지방산(Fatty acid)

  ② 스테롤(Sterol)

Ⅱ. 지질의 고정과 보존

  - 모든 지질을 잘 보존하기 위해서는 반드시 동결절편 제작

  - 일반적으로 대부분의 지질보존에는 현재까지 포르몰 칼슘(formol-calcium) 용액 사용

Ⅲ. 염색 및 결과

 ⊙지질염색

  ① Sudan black B

    ⅰ) nuclear fast red액으로 1' 대조염색

    ⅱ) glycerin jelly로 봉입

    ⅲ) 지질 - 흑색

         세포핵 - 적색

  ② Oil red O

    ⅰ) Harris hematoxylin액으로 핵염색

    ⅱ) glycerin jelly로 봉입

    ⅲ) Triglyceride, fatty acid, cholesterol ester - 적색

          Phospholipid, cerebroside - 연한 분홍색

          세포핵 - 청색

 ⊙ 중성mucin 과 산성mucin 감별 염색

  ① Nile blue

    ⅰ) gylcerin jelly로 봉입

    ⅱ) 중성지질 - 적색

         산성지질 - 청색

 ⊙ 불포화 지질 염색

  ① Osmium tetroxide로 고정과 동시 지방염색

      불포화 지질 - 흑색

유  전  분

유전분 : 인체의 여러조직에 무형의 호산성 물질로서 세포외에 출현하는 병적 침착물을 가리키는 관용명이며,
             유전분의 전체 함량중 95% 이상이 단백질로 이루어진 당단백질 임

Ⅰ. 유전분의 분류

 (1) 임상적 분류

  ① 원발성 유전분증 : 선행질환이 없이 출현하는 유전분증

  ② 속발성 유전분증 : 선행질환의 합병증으로 나타나는 유전분증

  ③ 가족성 유전분증 : 이스라엘의 포루투칼계 유대인에서 발견

  ④ 국소성 유전분증 : 기관특이성 유전분이 흔히 출현 - 알쯔하이머병

Ⅱ. 유전분의 특성 및 염색법

 ⊙ Congo red, Thioflavin T, Methyl violet, Cristal violet 등이 사용

  ① Congo red

      동결절편이 좋다

      Mayer hematoxylin으로 핵 염색

      - 유전분, 탄력섬유, 호산구과립 - 적색

      - 세포핵 - 청색

  ② Methyl violet (변색성 염색)

      0.25% methyl violet으로 염색

      glycerin jelly로 봉입 (변색성 염색이기 때문)

      - 유전분 - 분홍색~적색

      - 세포핵, 배경조직 - 청색

생  체  색  소

 (1) 혈철소 ( Hemosiderin)

      염색 가능한 철은 정상적으로 골수에서 출현하며, 비장에서도 소량이 존재

  ① Perls의 프루시안블루(Prussian blue)반응 ⇒ 3가 철 증명

    ⅰ) 원리 : 3가 철을 유리해 낸 다음, 유리된 철에 페로시안화 칼륨을 반응시켜 불용성의 청색 화합물인 페로시안화 제 2철.
　　　　　　 즉, 프루시안블루가 형성되는 것을 보는 정색반응

    ⅱ) 방법 - 2% Potassium ferrocyanide 수용액에 2% 염산 수용액을 동량 혼합하여 반응

                 - 1% Neutral red 수용액에 대조염색

    ⅲ) 혈철소 - 청색

         세포핵 - 적색

  ② 터언불블루 (Turn bull blue) 반응 ⇒ 2가 철 증명

    ⅰ) 방법 : Prussian blue 반응과 동일

    ⅱ) 결과 - 2가 철염(ferrous salt) - 청색

                 - 세포핵 - 적색

 (2) 포르말린 색소와 말라리아 색소

      - 포르말린 색소 : 이 색소의 형성을 방지하려면 포르말린을 pH 6.0으로 해야한다. 즉, 중성 포르말린 사용

      - 말라리아 색소 : 조직화학적 성질이 포르말린과 유사

 (3) 멜라닌 (Melanin)

      표피의 기저층에 있는 멜라닌 세포에서 형성되며, 세포 밖으로 유리된 색소는 진피 상부에 있는 멜라닌 탐식세포에 탐식

  ① 도파-산화효소(DOPA-oxidase) 반응 : 무 멜라닌성 흑색종 진단에 사용

  ② Fontana-Masson 법 : 10% silver nitrate 사용

      - 멜라닌, 은친화성물질, 크롬친화성물질 - 흑색

      - 세포핵 - 적색

무  기  물  질

Ⅰ. 칼슘 (Calcium)

      정상적인 골, 치아의 구성성분이지만 때로 동맥탄력판, 결핵병소, 초자연골, 림프절, 신장의 간질조직 등에 비정상적인
　　침착을 일으킴

  ① 폰 코사 (Von Kossa)법 - 호은성 이용

      5% silver nitrate에 반응시킨 후 현색작용 (자외선 or 직사광선에 노출)

Ⅱ. 구리 (Copper)

  ① 루베안산 (Rubeanic acid) 법

      결과 : 구리 - 짙은 녹색   (코발트-황갈색,   니켈-청색)

Ⅲ. 현미회화법 (Microincineration)

  ⊙ 조직을 고열로 처리하여 모든 유기물을 회화하여, 유기물의 존재에 의해 생기는 일체의 장해를 제거하고 남아있는
      무기물을 검출하는 방법이며 회상법(Spodography)이라고 부른다

미   생   물

Ⅰ. 세균 (Bacteria)

 (1) 세균 염색법

  ① 그람 (Gram) 염색

  ② 항산성 염색

      탈색과정이 끝나면 항산성간균만 카볼푹신(carbol fucshin)을 보유한 채로 남아있고, 기타 성분에서는 Carbol fucshin이
　　제거된다

    ⅰ) Ziehl-Neelsen 법

    ⅱ) Auramine-Rhodamine 형광염색법

  ③ 스피로헤타 염색

      일반적으로 스피로헤타 검출법으로는 호은성을 이용한 도은법 사용

    ⅰ) Levaditi 법 : 조직편 자체를 그대로 질산은액에 침적하여 도은시킴

    ⅱ) Warthin-Starry 법 : Helicobacter pylori 검출에 사용

Ⅱ. 진균 (Fungi)

 (1) 진균 염색법

  ① GMS (Grocott-Gomori's Methenamine Silver) 염색

      진균 세포벽의 주성분인 다당류를 크롬산으로 산화하여 알데히드기를 유리시킨 다음, 이 알데히드기를 이용하여
      메테나민-은(methenamine-silver)를 흑색으로 환원시켜 검출

  ② Gridley 법 : PAS의 변법

Ⅲ. 바이러스 (Virus)

 (1) 바이러스성 봉입체의 종류

     - 세포질에서만 발견 : 천연두의 Guanieri소체, 광견병의 Negri소체, HBsAg

     - 핵에서만 출현 : 단순포진, 수두, 대상포진바이러스

     - 핵과 세포질에서 모두 출현 : CMV, 홍역, 황열바이러스

 (2) 바이러스성 봉입체의 염색법

  ① Orcein법 : HBsAg 검출에 이용

  ② Parson법, Schleifstein법 : Negri소체 염색에 이용

Ⅳ. 리케치아 (Rickettsia)와 클라미디아 (Chlamydia)

      Giemsa염색이 주로 사용되며, 때로 Macchiavello염색도 이용

Ⅴ. 원충 (Protozoa)

  ① Entamoeba histolytica : hematoxylin, PAS, PTAH, Best carmine 염색

  ② Malaria : H.E stain에서 흑청색, Giemsa, Feulgen 염색

  ③ Pneumocystis carinii : GMS, toluidin blue 염색

특수조직 및 세포

I. 하수체 (Hypophysis or Pituitary gland)

  ① 신경하수체 (Neurohypophysis)

     ⅰ) Oxytocin : 자궁의 평활근 수축 촉진

     ⅱ) 항이뇨호르몬(ADH) : 수분 재흡수

  ② 선하수체 (Adenohypophysis)

     ⅰ) 성장호르몬(GH) : 인체, 특히 장골성장을 자극

     ⅱ) Thyrotropin(TSH) : 갑상선 호르몬의 생성을 자극

     ⅲ) Aderenocoticotropin(ACTH) : 부신피질세포에서 glucocorticoid생성을 자극

     ⅳ) 여포아호르몬(FSH) : 여성에서는 아포 성장, 남성에서는 정자형성 자극

     ⅴ) 황체아호르몬(LH) : 배란, 황체 형성에 필수적이며,  스테로이드호르몬 생성을 촉진

     ⅵ) Prolatin(PR) : 유선 발달과 수유를 촉진 - 임신 말기에 분비

     ⅶ) Lipotropic hormone(LPH) : 사람에게선 기능이 미확인

  ③ 하수체의 염새법

      PAS-Orange G 염색

II. 췌장 (Pancreas)

      외분비선과 내분비선의 혼합선으로 소화효소와 펩티드호르몬 분비

      Aldehyde fuchsin 염색반응 - α-cell(glucagon) : 황색

                                               - β-cell(insulin) : 자색

                                               - δ-cell(somatostatin) : 녹색

III. 파네트세포 (Paneth cell)

      소장의 리버쿤음와(crypts of lieberkuhn)의 기저부에 위치

      호산성과립은 아르기닌이 풍부한 단백질과 다당류를 함유하며 Peptidase와 Lysozyme을 가지고 있음

IV. 비만세포 (Mast cell)

      Toluidin blue or Methlyen blue 등의 청색 염기성염료에 자색으로 염색되는 변색성(metachromasia)

 V. 방사구체세포 (Juxtaglomerular cell)

      수입세동맥의 겉부분을 이루는 세포

 VI. 러셀소체 (Russell body)

      형질세포의 세포질에 출현하는 둥근 소체로서 체액성면역에 관여 함

VII. 알코올성 초자체 (Alcoholic hyaline)

      미토콘드리아의 변성에 의해 형성된 큰 덩어리 (megamitochondria)

면  역  조  직  화  학

Ⅰ. 면역조직화학

  ① 표지항체법 : 미리 마커를 표지시켜 사용

  ② 비표지항체법 : 항체에 마커를 결합시키는 방법

  ③ 충족조건 - 항원성이 있어야하며, 그것에 반응하는 특이항체를 제작

                    - 면역조직화학적 감도이상 포함되어있어야 함

Ⅱ. 항혈청

      역가, 특이성, 친화성이 충족되어야 함

Ⅲ. 면역조직화학적 염색법

 (1) 반응법의 종류

  ① 직접법 : 항원에 대한 항체에 마커를 표지하여 사용

  ② 간접법 : Ag + Ab₁시켜 PBS로 세척하고 Ab₂를 작용시켜 사용

  ③ 항원표지법 : Ag를 마커로 사용하여 Ig를 검출시키는 방법

 (2) 검체의 처리

    - 가능한 한 신선한 조직으로 4℃ 전후에서 고정 - paraffin절편은 실온

    - 면역염색에 들어가기에 앞서 조직절편을 trypsin등의 단백분해효소를 사용하여 가볍게 처리해주면 염색성이 좋아진다

Ⅳ. 형광항체법 (kidney에 사용)

 (1) 형광염료 - Flurescein isothiocyanate (FITC)

                    - Tetramethylrhodamine isothiocyanate (RITC)

Ⅴ. 효소항체법 (kidney를 제외한 모든 조직에 사용)

 (1) 간접법

    ⊙ 조직내 내인성 과산화효소의 저지

     : 관찰하기 원하는 Ag의 국재부위는 최종적으로 서양와사비과산화효소의 발색반응에 의해 관찰하나 조직내 내인성
       과산화효소가 존재하면 식별이 곤란하므로 저지

    ⊙ 3.3'-diaminobenzidine 4 HCl (DAB)를 가장 흔히 사용 - 갈색

    ⊙ 핵염색으로 methyl green과 hematoxylin를 사용하며, 봉입은 합성수지를 사용

 (2) 염색 kit에 의한 염색법

  ① PAP (Peroxidase-Antiperoxidase) 법

      Peroxidase와 Antiperoxidase의 가용성 복합체를 반응시킨 것

  ② ABC (Avidin-Biotin Complex) 법

      아비딘(1) : 비오틴(4)의 강한 결합을 이용

염   색   체    검   사

 ⊙ 염색체의 구조적 차이를 핵형(karyotype)이라 하고, 그 구조를 분석하는 방법을 핵형분석(karyotyping)

Ⅰ. 핵형분석법

  ① Karyotyping에 사용하는 WBC 배양과정

    ⅰ) 소량의 혈액을 채취하여 PHA에 의해 분열을 촉진

    ⅱ) 배양액에 백혈구를 넣고 3日간 복제와 분열의 기회를 준다

    ⅲ) Colchicine처리를 하여 분열중기에서 중지

    ⅳ) 저장액으로 세포를 팽창시켜 중기염색체를 분산시켜 고정하여 표본 작성

Ⅱ. 분염법

 (1) Q-분염법 (Q-banding)

  ① Quinacrine에 의해 염색되기 때문에 Q-띠라 부름

  ② DNA 염기대 중 adenine : tymine(AT)대에 염료가 강하게 결합. AT대가 풍부

  ③ 성염색체 이상이나 백혈병의 염색체분석에 많이 이용되나 절단점의 동정은 G-분열법이 우수

 (2) G-분열법 (G-banding)

  ①Giemsa염색에 의해 염색

  ② 전좌(轉座)등, 구조이상에서의 절단점의 띠 동정에 필수적

 (3) R-분염법 (R-banding)

 ① 분염모양(pattern)이 Q-banding 및 G-banding과 반대

 (4) C-분염법 (C-banding)

 ① 이질염색질(heterochromatin)이나 동원체 부분만 염색

 (5) N-분염법 (N-banding)

 ① 핵소체 형성부위 (neucleolus organizer regions. NORs) 만 염색

Ⅳ. 성염색질소체 검사

 (1) 채취 및 방법

      가장 흔히 사용하는 것으로는 구강 또는 질 점막의 상피세포, 혈액도말표본, 피부생검조직

  ① 검체의 채취 (채취 즉시 고정)

    ⅰ) 세포가 건조되면 성염색질소체가 염색이 잘 안됨

    ⅱ) 세포가 변성되면 염색체가 뭉쳐 핵막부근으로 이동하게되어 Barr body와 혼동

    ⅲ) 적어도 4장 이상 도말

  ② 염색 - 2장 : Pap stain하여 영구 보존

              - 2장 : Orcein or Crecyl echt violet stain

 (2) 호중구의 Barr body 형태

      호중구에서는 drum stick의 출현률은 상피세포에서의 barr body 출현률에 비해 낮다

 (3) Y-염색질 소체의 증명

      염색체를 Quinacrine mustard로 염색

Ⅴ. 염색체 이상

 (1) 수적 이상 : 비분리현상 (nondisjunction)으로 인해 생김

 (2) 구조적 이상 : 전좌, 결실, 역위, 고리염색체, 등완염색체

유 전 자 공 학 적  검 사

 ⊙ 인사이투(in situ)하이브리다이제이션

  ① 고정된 세포내에서 목적으로 하는 DNA를 직접 측정하는 방법

  ② STD에 있어서 중요한 검사법으로 세포, 생검조직, 병변부위의 면봉채취 검체를 사용

 ⊙ PCR (Polymerase Chain Reaction)

    DNA상 특정한 부분을 primer와 DNA polymerase를 이용하여 수십만 배에서 백만 배에 이르는 양만큼 증폭하는 기술

  ① double strand DNA의 single strand에로의 Denaturation

  ② 합성 primer의 single strand에로의 Annealing

  ③ DNA polymerase에 의한 primer의 Extension

출처 : http://www.mediver.com/