황우석 팀의 쥐어짜기로는 탈핵이 잘 되지 않는 이유

[죽순]

2007년에 다른 곳에 썼던 글입니다.

미리 이 글을 한번 읽어보시면 앞으로 제가 쓸 글을 이해하는 데에 도움이 될 것이라고 생각하여 퍼 왔습니다.

지금 와서 황우석의 쥐어짜기 특허가 등록될 가능성도 매우 낮지만 설혹 특허가 등록된다손 치더라도 누가 그 특허를 돈 내고 쓰겠습니까? 공짜로 그 특허 쓰라고 해도 쓰는 사람 아무도 없을 겁니다. 그 특허 사용해 주면 난자 하나당 천만원씩 연구비를 지급한다고 하면 혹시 돈에 눈이 어두운 사람들이 달려들기라도 하려나?

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황우석 팀의 쥐어짜기로는 탈핵이 잘 되지 않는 이유

   글쓴이 : 간장게장      날짜 : 07-11-18 00:21     조회 : 221  

 

황우석 팀의 쥐어짜기라는 탈핵 방식은 독창적인 것도 아니려니와 탈핵의 효율이 매우 낮은 방식입니다.

 

쥐어짜기 방식은 제1극체가 방출된 상태에서 spindle complex가 제1극체 주변에 있다고 치고, 제1극체 주변을 절개한 후 세포질을 15~30% 짜내는 방식입니다. 그러면 핵이 세포질과 함께 배출된다는 것이지요.

 

그런데 그 가정이 틀렸으니 제대로 탈핵이 될 수가 없는 것입니다.

 

 

박을순씨가 핵치환하여 만든 영장류 배아 중에서 줄기세포주가 형성된 것이 딱 두개입니다. 하나는 황우석 팀에서 만든 처녀생식 줄기세포 NT-1이고요. 다른 하나는 섀튼 팀에서 만든 4배체 원숭이 줄기세포죠. 그 이후에 섀튼 팀에서 또 만둘었는지는 모르겠습니다.

 

하여튼 이 두개의 줄기세포주의 공통점은 탈핵이 되지 않은 것으로부터 만들어진 것이라는 겁니다.

 

황우석 팀의 쥐어짜기 방식이 탈핵이 잘 되지 않는 경우가 많다는 것을 웅변으로 증명해 주는 예입니다.

 

지금 와서 황우석의 쥐어짜기 특허가 등록될 가능성도 매우 낮지만 설혹 특허가 등록된다손 치더라도 누가 그 특허를 돈 내고 쓰겠습니까? 공짜로 그 특허 쓰라고 해도 쓰는 사람 아무도 없을 겁니다. 그 특허 사용해 주면 난자 하나당 천만원씩 연구비를 지급한다고 하면 혹시 돈에 눈이 어두운 사람들이 달려들기라도 하려나?

 

 

이런 내용은 한두번 언급된 내용이 아니라서 모르는 사람이 없을 것입니다. 웬만한 황빠들도 다 아는 내용이죠. 그러나 아직도 쥐어짜기 특허를 언급하는 극소수 황빠가 있는 모양입니다. 그들을 위해 한번 더 이야기해 보겠습니다.

 

 

 

spindle과 제1극체의 위치관계를 논한 논문들은 워낙 많아서 다 언급할 수가 없을 지경입니다.

 

그러나 결론은 모두 일치합니다.

 

우선 제1극체 위치를 스핀들 위치를 찾는 지표로 사용하기 곤란하다는 것입니다. 상당히 많은 비율의 난자에서 스핀들이 제1극체로부터 멀리 떨어져 있다는 것이지요.

 

그리고 시험관에서 성숙시킨 난자와 몸 안에서 성숙된 난자를 비교하면, 스핀들이 제1극체로부터 떨어져 있는 비율이 몸 안에서 성숙된 난자의 경우에서 더 높다는 것입니다. 몸 안에서 성숙된 난자는 극체가 방출된 이후에 denudation을 하므로 그 영향으로 스핀들이 더 멀리 떨어지게 되는 것 같습니다. 반면에 denudation 후에 시험관 안에서 성숙시켜 극체를 방출시킨 난자의 경우에는 비교적 스핀들이 제1극체 부근에 있는 비율이 더 높다고 합니다.

 

 

이에 관련된 수많은 논문들 중에서 몇개만 골라 소개합니다.

 

 

 

1. The position of the metaphase II spindle cannot be predicted by the location of the first polar body in the human oocyte

 

( http://humrep.oxfordjournals.org/cgi/content/full/15/6/1372 )

 

 

Figure 1. A schematic illustration of how the MII spindle was `moved' relative to the cortex as if the oocyte was rotated on an axis going through the PB (top) and the centre of the oocyte. Illustration by H.Samuelsson.

 

제1극체의 위치와 스핀들의 위치를 각도가 얼마나 떨어져 있는가를 요런 방식으로 측정하였습니다.

 

 

Figure 2. MII risk zones. A schematic illustration of how we propose that the spermatozoon should be injected into the oocyte. The closer to the first PB (top), the greater the risk of MII-spindle damage (indicated by the red colour). Illustration by H.Samuelsson.

그래서 이렇게 네개의 zone으로 나눴습니다.

 

제1극체로부터 잰 스핀들의 위치가 zone1은 30도 이내, zone2는 30~60도, zone3는 60~90도, zone4는 90도를 넘어가는 경우입니다.

 

쥐어짜기 방식은 제1극체 위치를 12시 방향에 놓고 1시에서 11시에서 방향으로 째고 세포질을 15~30% 짜내는 방식이므로 스핀들이 zone1에 있다면 탈핵이 될 가능성이 높다고 볼 수 있겠습니다. zone2의 경우에는 탈핵이 되지 않을 가능성이 더 많겠지요.

 

zone3나 zone4의 경우에는 탈핵이 될 가능성이 거의 없다고 볼 수 있겠습니다. 탈핵이 될 정도로 세포질을 짜낸다면 거의 껍데기만 남겠지요.

 

 

관찰 결과가 다음과 같습니다.

 

 

Table I. Position of the MII spindle in relation to the first PB

Zonea	Degreesb	n	In-vitro matured MII		n	In-vivo matured MII
			% total	Cumulative %		% total	Cumulative %
1	0–29.9	25	58	58	20	37	37
2	30–59.9	15	35	93	17	32	69
3	60–89.9	3	7	100	13	24	93
4	>90	0	0	100	4	7	100
Total		43	100		54	100
aNote that zones 1–3 represent the animal pole and zone 4 the vegetal pole (see Figure 2).
bAssuming that the first polar body is positioned at zero degrees.

 

 

이 결과를 보면 시험관에서 성숙시킨 경우에는 58%가 zone1에 들어가지만 몸 안에서 성숙시킨 난자의 경우에는 zone1에 들어가는 것이 불과 37% 밖에는 되지 않습니다.

 

황우석 팀에서 사용한 난자는 물론 몸 안에서 잘 성숙된 것들만 골라서 사용항 것입니다. 황우석 팀은 시험관에서 난자를 성숙시키는 기술이 없으니 성숙된 난자로 골라 보내달라고 특별 부탁하여 좋은 등급의 난자를 황우석 팀에 보냈다고 하잖습니까?

 

zone1에 들어가는 난자가 37% 정도라면 황우석 팀에서 쥐어짜기 방식을 사용했을 경우 과연 탈핵이 된 것이 어느 정도나 될 것인지 대강 짐작이 갑니다. 당연히 탈핵이 안된 것이 더 많으리라고 볼 수 있을 것입니다.

 

 

It has been presumed that the MII spindle is positioned close to the PB, which is the main reason why sperm injections are generally pered at a 90° angle away from the PB.

 

However, we have shown in this study that: (i) the first PB does not accurately predict the position of the MII spindle in human oocytes and (ii) the distance between the PB and the MII spindle cannot be explained solely as being a result of lateral displacement during denudation before ICSI.

 

Why, then, is the MII spindle not positioned adjacent or very close to the first PB? The in-vivo group showed a significantly greater deviation of their MII spindles from the PB, than the in-vitro group. One of the reasons for this difference might be that the ICSI denudation procedure causes lateral displacement of the PB in relation to the spindle by affecting those polar bodies that lie directly above the MII spindle.

 

 

 

이런 현상은 최근의 데이타에 의하면 사람 뿐 아니라 다른 동물에서도 비슷한 경향이라고 합니다.

 

Recent data, based on hamster (Silva et al., 1999) and rhesus monkey oocytes (Hewitson et al., 1999), are in accordance with our observation on human oocytes that the PB does not always reside close to the spindle.

 

이 논문에는 다른 사람들의 연구 결과도 많이 언급되어 있습니다.

 

 

 

2. Relationship between meiotic spindle location with regard to the polar body position and oocyte developmental potential after ICSI

( http://humrep.oxfordjournals.org/cgi/content/full/18/6/1289 )

 

 

이 논문에서도 대략 비슷한 결과가 나왔습니다.

 

 

Figure 1. Schematic representation (upper) and representative micrographs (lower) of metaphase II oocytes showing different angles of deviation of the meiotic spindle, visualized using the Polscope system, with regard to the location of the first polar body (in the 6 o’clock position). These angles, measured between the line connecting the oocyte centre with the meiotic spindle and that connecting the oocyte centre with the first polar body are 0° in panel I, 6° in panel II, 85° in panel III, and 110° in panel IV. These images represent the four oocyte groups (spindle deviation angles of 0–5°, 6–45°, 46–90° and >90° respectively) that were compared as to the fertilization outcomes and the quality of embryos developing from normally fertilized oocytes. The range of the deviation angles characterizing each of the four groups is shown in the upper panel.

요런 식으로 I, II, III, IV 네 그룹으로 나눴는데요. 먼저번 논문과는 zone을 나누는 각도가 좀 다릅니다.

 

I : 0–5°

II : 6–45°

III : 46–90°

IV : >90°

 

관측 결과는 다음과 같습니다.

 

 

Table I. Relationship between the angle of spindle deviation with regard to the first polar body at the time of ICSI and the percentages of in-vivo-matured metaphase II oocytes developing 1, 2 and >2 pronuclei (PN)

Deviation angle	Oocytes (%)
	n	1PN	2PN	>2PN
0–5°	254	12 (4.7)	188 (74.0)a	8 (3.1)e
6–45°	104	6 (5.8)	78 (75.0)b	4 (3.8)f
46–90°	102	2 (2.0)	84 (82.3)c	2 (2.0)g
>90°	24	2 (8.3)	12 (50.0)d	4 (16.7)h

a versus d, P < 0.005.

b versus d, P < 0.005.

c versus d, P < 0.01.

e versus h, P < 0.01.

f versus h, P < 0.05.

g versus h, P < 0.01.

 

I 그룹에 속하는 것이 254개로 52.5%로 나왔습니다.

 

II , III, IV 그룹에 속하는 것은 각각 21.5%, 21.1%, 4.9%

 

III그룹과 IV 그룹에 속하는 것들은 제1극체와 스핀들의 각도가 45도를 넘는 것들이니 쥐어짜기로 탈핵될 가능성이 거의 없는 것입니다. 이것을 합하면 26%

 

II 그룹에 속하는 것이 문제인데, 쥐어짜기로 탈핵되는 것과 탈핵되지 않는 것이 대략 반반 정도가 되지 않을까 짐작됩니다. 즉 II 그룹에 속하는 21.5% 중에서 반 정도는 탈핵이 되지 않을 것이라는 것이지요.

 

이 결과로도 대략 36% 정도의 난자에서는 쥐어짜기로는 탈핵이 되지 않을 것임을 짐작할 수 있습니다.

 

먼저번 논문에 나온 결과와는 좀 차이가 있긴 합니다. denudation 방법에서 차이가 좀 있었는지, 극체가 배출된 후 스핀들 위치를 관측한 시간이 달라서 그랬는지 뭔가 이유가 있겠지요.

 

 

더 많은 논문을 소개하려 했으나 쓸데없이 기럭지만 길어질 것 같군요.

 

 

간단히 링크만 걸겠습니다.

 

 

Spindle Observation in Living Mammalian Oocytes with the Polarization Microscope and Its Practical Use

( http://www.liebertonline.com/doi/abs/10.1089/15362300260339557 )

 

A new orientation-independent polarized light microscope, the LC Polscope, was used to examine the bi-refringent spindles in living mammalian oocytes.

 

It was found that spindles could be imaged with the Polscope in living oocytes in all mammals so far examined, including hamster, mouse, cattle, human, and rat. The first polar body did not accurately predict the spindle location in most metaphase II oocytes

 

 

 

 

그만해야겠네요.

 

 

Selected Annotated References Using CRi PolScope Technology

Oosight_Ref_05/18/07 1 of 5

OosightTM Imaging System:

 

http://www.cri-inc.com/files/Oosight%20References.pdf

 

 

모자라다면 요기에 주루룩 나열된 레퍼런스들을 좍 다 훑어 보시면 될 듯.

 

 

이번에 원숭이 체세포복제 줄기세포를 만든 팀에서 사용한 Oosight Imaging System이란 것이 PolScope를 사용하는 것인 모양입니다. PolScope와 이미징 소프트웨어, 테크닉 등을 포함하여 이름을 멋들어지게 붙여 놓은 것인 듯.

 

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p.s.

Selected Annotated References Using CRi PolScope Technology

이 문서의 링크가 바뀌었군요. 새로운 링크

http://www.midatlanticdiagnostics.com/documentation/pdf/oosight/PS_Refs_082506.pdf

Oosight system에 대해서는 아래 링크를 보세요.

Non-invasive Enucleation in SCNT

http://www.cri-inc.com/applications/noeis.asp

안에 탈핵하는 동영상도 있습니다.

[카피카피]

스크랩 하나 해 갑니다

[Mr.kim]

설명 잘 들었습니다.
쥐어짜기로 난자의 탈핵 가능성은 '갈수록 태산이다' 이거군여. ㅋ

[죽순]

누가 개 고양이 복제가 안된다고 했나?
실패율이 높다는 것이 무엇을 의미하는 것인지는 글에 다 적어 놓았는데...

궁시렁거리지만 말고 실질적인 행동에 대한 안을 한번 내 보시지요.

[죽순]

그럼 궁시렁대지 말고 직접 해 보든지

[신지은]

잘 모르는 분야에 대해 이렇게 자세히 알려쥬시느라 수고가 많으십니다. 고맙습니다.

[신지은]

쥬시느라(\/)
주시느라(0)
폰이라 수정이 안됩니다,ㅋㅎ