1. 염료가 빛깔을 잘 나타내게 하는데 관여하는 것은 ?
1) 발색단 2) 조색단 3) Azo 기 4) Nitro 기 5) Ethylene 기
<설명> 조직염색의 주요 목적은 무색의 조직성분들을 색깔로 분리 시켜 그들의 구조, 형태, 배열과 같은 물리적 변화상이나 화학적 성분에 변화상 까지 관찰할 수 있도록 하는데 있다. 염색에 사용되는 염료의 화학적 구조에는 착색하기위한 이중결합을 가진 원자단이 있는 데 이 원자단을 발색단 (Chromophore group)이라 하고, 이를 포함하는 방향족화합 물을 색원체(Chromogen)이라 한다. 그리고 발색단 자체는 조직이나 세포, 섬유성분과는 친화력이 크지 못하므로 이를 강화 시켜 주기 위한 원자단를 조색단 (Auxochromophore group)이라 하며 이들은 산이나 알카리와 결합하여 색소염(Salt)을 형성하여 염료의 가용성을 높여주고, 빛을 진하게 해준다. 다시말하면 염료의 염색성을 보다 강하게 해주는 원자단이다.
[답] 2.
2. 염료의 구조상 발색단에 속하지 않는 것은 ?
1) Azo 기 (-N=N-)
2) Carbonyl 기 (>C=O)
3) Thiocarbonyl 기 (>C=O)
4) Ethylene 기 (>C=C<)
5) Carboxyl기(COOH)
<설명> 발색단에는 Azo 기 (-N=N-), Carbonyl 기 (>C=O), Thiocarbonyl (>C=S), Ethylene 기 (>C=C<), Nitro 기(-N=O), Oxy-azo기(-N=N-) 등이 있다.
[답] 5.
3. 염료의 구조상 조색단에 속하지 않는 것은 ?
1) Amino 기(NH2)
2) Hydroxyl 기(OH)
3) Nitro 기(NO2)
4) Sulfon 산기( -SO3H)
5) Carboxyl기(COOH)
<설명> 조색단에 Amino 기(NH2), Hydroxyl 기(OH), Sulfon기 (-SO3H), Carboxyl기(COOH), 치환 Amino 기(-N(R)2 등이 있다.
[답] 3.
4. 산성염료의 한계는?
1) 조색단이 염기성 구성 분자인 것
2) 조색단이 산성 구성 분자 또는 음이온을 함유한 것
3) 조색단이 산성, 염기성 분자를 함유한 것
4) 조색단이 중성 구성 분자를 함유한 것
5) 조색단이 중성, 산성 구성 분자를 함유한 것
<설명> 산성염료는 발색단에 산의염(Acidic salt) 형태(OH, COOH, O3H에 NaOH를 가했을 때 유도된 Sodium<Na+>이 결합된 화합물)에 해당하는 조색단이 결합된 염료로 수용액에서 본래의 조색단에해당되는 원자단은 Negative로 대전한다. 염기성염료는 발색단에 염기의 염(Basic salt) 형태 (NH2, NHCH3, N(CH3)2, NH에 Acetic acid(CH3COOH)나 Hydrochloride(HCL)을 가했을 때 유도된 Chloride(Cl)가 결합된 화합물)에 해당하는 조색단이 결합된 염료로 수용액에서 본래의 조색단에 해당되는 원자단은 Positive로 대전한다. 중성염료는 산성염료와 염기성염료의 양성질을 똑같 이 가지고 균형을 유지하고 있는 염료이지만 염료에 따라서는 산성색소와 염기성색소가 결합하여 중성색소 용액이나 중성색조를 만들기도 한다.
[답] 2.
5. 산성 염료만으로 된 것은?
1) Anilin bule 와 Congo red
2) Methyl green 과 Methyl violet
3) Crystal violet 와 Cresyl violet
4) Methyl bule 과 Orange G
5) Picric acid 와 Acid fuchsin
<설명> 산성염료는 보통 세포질을 염색시키며 Acid fuchsin, Aniline blue, Biebrich scarlet R, Congo red, Eosin B, Eosin Y, Fast green FCF, Light green, SF yellowish, Metanil yellow, Metyl blue, Orange G., Phloxine B, Picric acid, Ponceau S. 등이 있다.
[답] 5.
6. 염기성 염료만으로 된 것은 ?
1) Sudan III와 Sudan IV
2) Azo carmine 과 Basic fuchsin
3) Congo red 와 Sudan black B
4) Cresyl violet 과 Crystal violet
5) Oil red O 와 Scarlet B
<설명> 염기성염료는 보통 핵을 염색시키며 Alcian blue, Azure C, Basic fuchsin, Bismarck brown, Carmine(carmine acid), Celestin blue B, Cresyl violet, Crystal violet, Gallocyanine, Janus green B, Luxol fast blue, Malachite green, Methyl violet, Methylene blue, Neutral red, Nile blue sulfate, Pyronine(weakly basic), Orcein, Safranine O, Thionine, Toluidine O 등이 있다.
[답] 4.
7. 다음 중 산성염료에 해당되는 것은 ?
1) Eosin Y 2) Giemsa 3) Methylen blue 4) Sudan Ⅲ 5) Methyl green
<설명> 문제 5번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
8. 다음 중 염기성염료에 해당되는 것은 ?
1) Giemsa 2) Eosin acid 3) Gentian violet 4) Eosin Y 5) Picric acid
<설명> 문제 6번 설명을 참고할 것.
[답] 3.
9. 다음중 중성염료에 해당되는 것은 ?
1) Orange G
2) Hematoxylin
3) Sudan black B
4) Congo red
5) Methylen blue
<설명> 산성과 염기성, 그리고 지용성 염료인 Oil red O, Sudan Ⅲ(Ⅳ) , Sudan black B , Nile blue A , Scarlet B 에 속하지 않는 대부분의 염료는 중성염료에 속한다. 문제 4번, 5번, 6번 설명을 함게 참고할 것.
[답] 2.
10. 다음 중 무극성염료에 해당되는 것은 ?
1) Methyl green
2) Methyl blue
3) Gentiana violet
4) Giemsa
5) Sudan Ⅲ(Ⅳ)
<설명> 지용성 염료인 Oil red O, Sudan Ⅲ(Ⅳ), Sudan black B, Nile blue A, Scarlet B 에 속하는 염료들은 그들의 용매보다도 지질성분에 더 잘 녹기 때문에 지용성염료라 하고 바로 이와같은 물이적 성질을 이용하여 조직내 지질성분을 검출하는데 사용되는 염료들이나, 기타 화학적 반응을 이용하여 조직성분을 검출하는 도은법과 같은데 사용되는 화학적인 시약들을 무극성염료라고 한다.
[답] 5.
11. 매염제란 무엇인가 ?
1) 염료나 염색에 대한 조직의 친화성을 저하시키는데 사용되는 단 한가지 물질
2) 염료나 염색에 대한 조직의 물리성을 증가시키는데 사용되는 단 한가지 물질
3) 염료나 염색에 대한 조직의 친화성을 저하시키는데 사용되는 어떤 물질
4) 염료나 염색에 대한 조직의 친화성을 증가시키는데 사용되는 어떤 물질
5) 염료나 염색에 대한 조직의 물리성을 저하시키는데 사용되는 어떤 물질
<설명> 조직염색에 있어 매염제란 화학적 반응에서 접촉반응제와 같다. 염료나 염색에 대한 조직의 친화성을 증가시켜 조직과 염색액 사이에 요철형에 의하여 염색이 이루어지도록 하는 물질을 말한다. 현색물질이란 염색반응에서 염료가 요철형으로 되거나 조직을 붙잡는 작용이 아니고 단지 조직에 대한 선택력을 증가시켜 주거나 염료의 염색력을 강하게 만들어 주는 물질을 말한다.
[답] 4.
12. Hematoxylin용액 제조시 매염제는 어느 것인가 ?
1) Mercuric oxide
2) Hematoxylin crystalm
3) Lithium carbonate
4) Ammonium 이나 Potassium alum
5) Calcium carbonate
<설명> Hematoxylin용액 속에는 반드시 매염제와 산화제가 함께 들어 있다. 그 이유는 원래 인체 조직은 각종 염료들과 친화력이 없어 잘 염색 되지 않기 때문에 매염제를 사용해야 하고, 산화제의 경우는 Hematoxylin 그 자체로는 조직에 대한 염색력이 거의 없고 Hematoxylin의 산화시 생성된 Hematein이 되었을 때 비로서 염색력을 갖게된다. 공기나 일광에 노출시키는 자연산화는 3-4개월의 긴 시간이 요구되므로 강한 산화력을 가진 화학제들을 많이 사용하고 있다. Hematoxylin용액 제조시 사용되는 매염제에는 Ferric ammonium alum, Ferric chloride, Common alum, Phosphomolybdic acid, Phosphotungsticacid, Iron, Cupper, Chromium, Aluminum, Tungsten salt 등이 있다. 그리고 산화제에는 Potassium permanganate, Sodium iodate, Mercuric oxide, Chloramine T., Hydrogen peroxide, Barium peroxide, Sodium perborate 등이 있다. 염료와 매염제가 결합한 형태를 "Lake"라 부르며 이 Lake는 매염제의 종류에 따라 Hematoxylin의 색이 다르게 나타난다. 그 예로 Ammonium alum은 밝은 청색, Potassium alum은 자색, Chrome alum은 회색 내지 청색, Iron alum은 흑색을 나타낸다. Hematein lake는 전체분자가 양 전하를 띠고 있어서 흔히 염기성 염료 또는 양 이온성 염료라 하며, DNA의 인산기와 결합되므로서 핵을 염색한다. 가장 많이 사용되는 Hematein의 매염제로는 Alum과 Iron이 있다.
[답] 4.
13. Hematoxylin 용액 제조시 매염제로 쓸 수 없는 것은 ?
1) Ferric chloride
2) Alum
3) Phosphotungstic acid
4) Iodine
5) Mercuric oxide
<설명> 문제 12번 설명을 참고할 것.
[답] 5.
14. Hematoxylin 용액에서 Alum의 작용은?
1) 세균염색을 염색한다
2) 다른 물질이 첨가될 때 pH를 유지해 준다
3) 매염제이다
4) 탈수제이다
5) 현색물질이다
<설명> 문제 12번 설명을 참고할 것.
[답] 3.
15. 숙성된 Alum hematoxylin 용액 중에 가장 강력한 염색 성분은 ?
1) Hematein
2) Hemofuchsin
3) Hemosiderin
4) Lipoid
5) Hematoxylin
<설명> 문제 12번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
16. Alum hematoxylin 용액에 Mercuric oxide를 넣는 목적은 무엇인가 ?
1) Hematoxylin을 산화하기 위해
2) 조직에 지방을 녹이기 위해
3) 좋은 결과를 얻기 위해
4) 더 얇은 조직절편을 만들기 위해
5) Hematoxylin을 환원시키기 위헤
<설명> Harris의 Hematoxylin 용액을 만드는 방법은 먼저 95% Ethanol에 Hematoxylin을 녹이고, 따로 Potassium alum을 증류수에 가온교반시켜 녹여 두 용액을 섞는다. 가열하여 끓기 시작하면 가열을 멈춘 후 Mercuric oxide를 조금씩 가하면서 흔들어 준다. 이 때 한 번에 너무 많이 첨가하면 폭발 위험이 있으므로 조심하여야 한다.
[답] 3.
20. Harris의 Hematoxylin 용액을 만들 때 가장 주의 할 점은 ?
1) Hematoxylin의 양을 정확히 한다.
2) 끓인 후 Mercuric oxide(HgO2)를 조금씩 넣는다.
3) 1주일 쯤 숙성시켜 쓴다.
4) 매번 여과해서 쓴다.
5) 명반을 조심스럽게 섞도록 한다.
<설명> 문제 19번 설명을 참고할 것
[답] 2.
21. Harris의 Hematoxylin 용액은 조직 중에 무엇을 염색하는가 ?
1) 핵 2) 세포질 3) 교원질 4) 신경섬유 5) 수초
<설명> Harris의 Hematoxylin 용액은 조직 중에 음(Negative)으로 대전하는 핵을 청색으로 염색시킨다.
[답] 1.
<설명> Mayer의 Hematoxylin 용액의 매염제는 Harris의 Hematoxylin용액의 매염제와 동일한 Ammonium 이나 Potassium alum(NH4 또는 K alum)이나 산화제는 각각 Sodium iodate와 Mercuric oxide이다.
[답] 5.
<설명> 문제 22번 설명을 참고할 것. Mayer의 Hematoxylin-Eosin 염색법이든 Harris의 Hematoxylin-Eosin 염색법이든 매염제는 동일한 Ammonium 이나 Potassium alum(NH4 또는 K alum)이다.
[답] 2.
26. 일반 염색법 중 약산을 사용하는 염색법은 ?
1) Harris의 염색법
2) Mayer의 염색법
3) Ehrlich의 염색법
4) Bohner의 염색법
5) Weigert의 염색법
<설명> 일반 염색법 중 Harris의 Hematoxylin-Eosin 염색법은 Hematoxylin 용액에 조직을 과 염색 시킨 후 약산 즉 1 % HCL- Alcohol을 사용하여 핵에 염색된 색만 남기고 세포질과 여타 조직성분에 염색된 색을 제거하므로서 핵과 세포질이 각각 청색 과 무색으로 분리될 수 있도록 한다. 이때 사용된 1 % HCl-alcohol을 탈색제 또는 감별제라고 하고 무색의 세포질은 다시 적색의 Eosin으로 대조염색을 하여 적색이 되도록 만들어 핵과 세포질의 분리가 분명하도록한 염색법이다. 이와같은 방식에의한 염색을 퇴행성염색 (Reprogressivestaining)이라한다. Mayer의 Hematoxylin-Eosin 염색법은 Hematoxylin 용액에 조직을 과 염색시킨 후 수세 즉시 물로서 핵과 세포질이 각각 청색 과 무색으로 분리될 수 있도록 한 후 Harris의 Hematoxylin-Eosin 염색법과 같은 방식으로 세포질에 대조염색을 하여 적색이 되도록 만들어 핵과 세포질의 분리가 분명하도록한 염색법이며 이와같은 방식에 의한 염색은 진행성염색(Progressive staining)이라 한다.
[답] 1.
27. 과 염색 시킨 후 탈색 시켜 조직성분을 감별 시키는 염색방법은 ?
1) 퇴행성염색법 (Reprogressive staining)
2) 변색성염색법 (Metachromatic staining)
3) 정염색법 (Orthochromatic staining)
4) 진행성염색법 (Progressive staining)
5) 혈철소염색법 (Hemorosidrein staining)
<설명> 문제 26번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
28. 변색성염색(Metachromasia)이란 ?
1) Protoporpyrin의 Iron 복합체를 말한다
2) 염료의 색깔이 조건에 따라 다른 색으로 염색된는 것을 말한다
3) 세포 근원, 구조, 기능에 대한 과학적 연구를 말한다
4) 일반적으로 현미경 상의 조직검사를 말한다.
5) 조직이 본래의 기능과 다른 쪽으로 분화되는 것을 말한다
<설명> 변색성염색(Metachromasia)이란 색상의 변화로 염료의 색깔이 조건 즉 염색액의 pH(물리적인 조건)나 조직성분의 화학성질(화학적인 조건)에 따라 다른 색으로 염색된는 것을 말한다. 변색성에 관한 기전은 명확하지는 않지만 믿을만한 것은 변색성물질(Metachromatic substances)에 속하는 연골기 질, 산성점액질 등에는 Sulfated mucopolysaccharide 성분을 함유하고 있어 모두 음(Negative chrage)으로 하전하게 되고 또한 이들의 표면에는 많은 양의 염료가 결합할 수 있는 반응 부위를 갖고 있어 여기에 염기성 염료가 결합하면 중합화를 촉진시켜 사용된 염료의 본래 흡수 스펙트럼(Spectrum) 과는 다른 흡수 스펙트럼을 나타내므로서 다른 색이 발생하는 것으로 보는 견해다. 변색성을 유발시키는 조직성분을 향색소 또는 변색성물질(Chromophore or Metachromatic substances)이라 하며 여기에는 연골기질, 점액, 비만세포, 아미로이드물질 등이 있으며, 변색성염료에는 Toluidine blue, Thionin, Azure A. B. C., Methylene blue, Crystal violet, Safranine, 등이 있다. 한 조직이 본래의 기능과 다른 쪽으로 분화되는 것은 화생( Metaplasia )이라 한다.
[답] 2.
29. 퇴행성 Hematoxylin-Eosin 염색에서 가장 중요한 것은 ?
1) 과잉의 Aluminum 염으로 Hematoxylin의 제거
2) Hematoxylin 염색 후에 Acid alcohol에 의한 조직감별
3) Hematoxylin 염색 후에 Absolute alcohol로의 세척
4) Hematoxylin 염색 후에 물로의 세척
5) Hematoxylin 염색 전에 Acid alcohol에 의한 조직감별
<설명> 문제 26번 설명을 참고할 것. 퇴행성 Hematoxylin-Eosin염색에서 가장 중요한 것은 Hematoxylin염색 후에 Acid alcohol(1 % HCL- Alcohol)에 의한 조직감별이다. 일반적으로 퇴행성 염색방식이 염색결과는 깨끗한 반면 탈색시 세심한 주의를 요한다. 자칫하면 과 탈색될 우려가 크기 때 문이다. 그러나 진행성 Hematoxylin-Eosin염색은 퇴행성 염색 방식의 결과와는 반대이다.
[답] 2.
30. Harris의 Hematoxylin 용액에 염색하여 약산에 감별한 후 빠르게 수도물에 헹구는 이유는 ?
1) 촉매촉진을 위해
2) 탈색방지를 위해
3) 촉매방지를 위해
4) 탈색진행을 위해
5) 중화를 위해
<설명> 문제 26번, 29번 설명을 참고할 것. Harris hematoxylin용액에 과염색하여 1 % HCL- Alcohol에 감별한 후 빠르게 수도물에 헹구는 것은 조직에 남은 1 % HCL- Alcohol에 의한 과 탈색방지를 위해서다.
[답] 2.
31. Harris의 Hematoxylin 염색에서 산이 작용하는 중요한 효과는 ?
1) 과 산화 방지
2) 성숙의 방지
3) 염색성의 양호
4) 과 염색의 방지
5) 과 탈색의 방지
<설명> 일반적으로 조직성분과 염료들은 물리적인 방식, 화학적인 방식, 물리화학적인 방식으로 결합하여 색상을 나타내게 된다. 물리적인 방식이란 조직이 느슨하거나 거칠면 주로 염료용액에 녹아 있는 염료입자 가운데 보다 굵은입자를 선택하고, 반면 조직이 조밀하고 섬세하면 보다 작은 염료입자를 선택하여 조직성분를 분리 관찰하도록 하는 방법이다. 또 다른 하나는 조직성분이 정전기적으로 음으로 대전하면 양으로 대전하는 염기성 염료와 결합하고, 조직성분이 정전기적으로 양으로 대전하면 음으로 대전하는 산성 염료와 결합한다. 이런 원리를 이용하여 염색하는 것을 말한다. 화학적인 방식이란 조직성분과 염료분자 간에 수소결합, 매염결합, 게발(Chelate)결합, 중합결합 등 화학적반응을 통해 염색톡록하는 것이다. 물리화학적인 방식이란 앞서 언급한 두 방법이 다 동원되는 경우로 대부분의 염색은 이방식을 이용하여 염색하고 있다.
Hematoxylin & Eosin 염색의 원리는 매염결합과 정기적인 결합에 의한 것으로 조직성분 중 핵은 정전기적으로 음으로 대전하고 세포질은 양으로 대전한다. Hematoxylin 염색액은 양으로 대전하고 Eosin 염색액은 음으로 대전한다. 따라서 핵은 Hematoxylin 염색액과 결합되고, 세포질은 Eosin염색액과 결합되어 핵은 청새으로 세포질은 적색으로 분리 염색토록한 것이 Hematoxylin & Eosin 염색이다.
Harris의 Hematoxylin & Eosin 염색에서 산인 HCL은 탈색제인 1 % HCL- Alcohol을 만들 때 사용되는 것으로 정전기적으로 음으로 대전한다. Hematoxylin으로 염색시킨 후 1% HCL-Alcohol로 처리하면 결국 HCL은 음으로 대전하는 핵의 대전성을 높여주는 결과과 되어 Hematoxylin과 핵이 보다 견고하게 결합토록 하여 핵의 염색성을 양호하게 한다.
[답] 3.
32. Acid alcohol을 만들 때 사용되는 산은?
1) 염산 2) Oxalic acid 3) Picric acid 4) 질산 5) Acetic acid
<설명> 문제 26번, 29번, 30번, 31번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
33. Harris의 Hematoxylin 용액에 염색한 후 Acid-Alcohol로 처리하는 이유는 ?
1) 세포질의 Hematoxylin을 제거하기 위해
2) 핵의 염색을 증진시키기 위해
3) 여분의 색소를 제거하기 위해
4) 염색을 더욱 선명하게 하기 위해
5) 세포질의 색을 선명하게 하기 위해
<설명> 문제 26번, 29번, 30번, 31번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
34. Hematoxylin용액에 의한 핵 염색에서 HCL- Alcohol에 의한 감별을 필요로 하지 않는 것은 ?
1) Mayer의 Hematoxylin 용액
2) Harris의 Hematoxylin 용액
3) Delafiled의 Hematoxylin 용액
4) Iron-hematoxylin 용액
5) PTAH 용액
<설명> 문제 26번, 31번 설명을 참고 할 것. Delafiled의 Hematoxylin 용액, Iron-Hematoxylin 용액, PTAH 용액들은 진행성에 의한 핵 염색용액은 아니다.
[답] 1.
35. Hematoxylin-Eosin 염색 과정에서 핵을 변색시키는 두 가지 시약은 ?
ⓐ Xylol ⓑ Eosin ⓒ Acid alcohol ⓓ Ammonia water ⓔ Phenol
1) ⓐ,ⓑ 2) ⓑ,ⓒ 3) ⓒ,ⓓ 4) ⓓ,ⓔ 5) ⓑ,ⓔ
<설명> Hematoxylin-Eosin염색 과정에서 핵을 변색시키는 두 가지 시약은 Acid alcohol 과 Ammonia water로 Acid alcohol은 핵과 Hematoxylin의 결합을 견고하게 하고, Ammonia water는 핵의 청색을 보다 진하게 만들어 주는 역할을 한다.
[답] 3.
37. 핵 염색에 적당한 염색액의 액성은?
1) 염기성 2) 산성 3) 중성 4) 등장액 5) 고장액
<설명> 문제 29번, 31번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
38. 핵을 숙성(발색)시키는 과정에서 강 Ammonia 수를 사용하면 ?
1) 파랗게 염색된다
2) 핵이 너무 파랗게 염색된다
3) 조직이 수축되어 떨어진다
4) 대조염색이 꼭 필요하다
5) 수도물보다 좋다.
<설명> 핵을 발색시키는 과정에서 강 Ammonia 수를 사용하면 지나치게 발색되어 핵이 너무 파랗게 염색된다
[답] 2.
39. 염색한 절편을 탈수한 후 어디에 투명하나 ?
1) Ether 2) Xylol 3) Ether-Alcohol 4) Balsam 5) Chloroform
<설명> 문제 24번설명을 참고할 것. 염색한 절편을 탈수한 후 Xylol에 투명해야 한다.
[답] 2.
40. 염색 후의 혼탁은 무엇에 기인하는가 ?
1) 충분한 탈수와 Ammonia수의 불충분한 제거 때문에
2) Alcohol에 너무 오래 두었기 때문에
3) 불충분한 탈수와 Ammonia수의 불충분한 제거 때문에
4) xylol에 너무 오래 두었기 때문에
5) 탈수와 탈색이 과했기 때문에
<설명> 염색 후의 혼탁은 투명이 잘 되지 않기 때문이라 볼 수 있다. 이와같은 불충분한 투명의 원인은 바로 불충분한 탈수와 Ammonia수의 불충분한 제거 때문이라 하겠다.
[답] 3.
41. 염색한 후 탈수가 불충분하면 어떤 현상이 나타나겠는가 ?
1) 염색이 얼룩진다
2) 투명화가 되지 않아 보기가 힘들다
3) 변색되기 쉽다
4) 공 포가 생긴다
5) Cover glass가 떨어진다
<설명> Eosin은 산성염료로 정전기적으로 음으로 대전하고 세포질내 단백질은 양으로 대전하기 때문에 서로 정전기적으로 결합할 수 있다. 이 때 빙초산(CH3COOH)로 Eosin 용액의 pH를 3 정도가 되도록 조절하여야 세포질과 잘 결합할 수 있는 등전점을 이룰 수가 있게 된다. 따라서 빙초산은 일종의 대조염색을 위한 매염제로 봐야할 것이다.
[답] 2.
43. Eosin 용액은 pH가 3 보다 알칼리인 경우 효과가 저하된다. 이 때 염색력을 회복시키기 위해 첨가하는 것은 ?
1) HCL 2) H2SO4 3) H2O2 4) CH3COOH 5) Alum
<설명> 문제 42번 설명을 참고할 것.
[답] 4.
44. 고정 불량으로 핵 염색이 잘 되지 않을 경우는 ?
1) Periodic acid로 처리한다
2) Sodium bicarbonate로 처리한다
3) Lithium carbonate 로 처리한다
4) Ammonium hydroxid로 처리한다
5) Ammonia water로 처리한다
<설명> 고정 불량으로 조직의 핵이 잘 염색되지 않았다면 그것은 Hematoxylin과의 정전기적인 대전성의 약화로 볼 수 있다. 따라서 핵에서 음이온의 대전성을 좌우하는 인(P)의 대전성을 높여 주기위해 Periodic acid와 같은 것으로 처리하면 염색성이 회복될 수 있다.
[답] 1.
45. 조직염색 후 흑색 과립이 있는 경우는?
1) 염색을 불확실하게 했을 때
2) 세포나 곰팡이가 혼합되었을 때
3) 작은 기포가 있을 때
4) Formalin에 오래 고정했을 때
5) 탈수가 불충분 했을 때
<설명> 조직염색 후 흑색 과립이 있는 경우는 Formalin에 오래 고정했을 때 조직내에 적혈구가 가진 Hemogloblin이 Formalin에 Aldehyde(CHO)기에 의해 산화되어 Hematein이 생성되기 때문이다.
[답] 4.
46. 염색된 조직절편이 Slide에서 떨어졌을 때 그 원인은 아마도?
1) Paraffin이 완전히 제거되지 않았을 것이다
2) 고정이 잘 안되었을 것이다
3) 너무 연한 paraffin을 사용했기 때문일 것이다
4) 탈수가 완전히 안되었을 것이다
5) 수세가 안되었을 것이다
<설명> Slide에서 염색된 조직절편이 떨어지는 경우는 조직절편을 Slide에 부착시킬 때 고정(부착)이 잘 안되었기 때문일 것이다.
[답] 2.
47. 조직절편이 불규칙하게 염색되었을 때 그 원인이 아닌 것은 ?
1) Paraffin이 완전히 제거되지 않았기 때문이다
2) 조직절편의 두께가 일정치 못했기 때문이다
3) 너무 연한 Paraffin을 썼기 때문이다.
4) 고정이 잘 않되었기 때문이다
5) 염색을 불확실하게 했기 때문이다
<설명> 조직절편이 불규칙하게 염색되었을 때 그 원인이 될 수 있는 경우는 Paraffin이 완전히 제거되지 않았을 때, 조직절편의 두께가 일정치 못했을 때, 고정이 잘 되지 않을 때, 염색을 불확실하게 했을 때이다. 그러나 너무 연한 Paraffin을 썼다고 염색이 불규칙하게 되지는 않는다.
[답] 3.
48.염색 반응은 다음 중 무엇의 영향을 많이 받는가?
1) 과당의 농축액
2) 염색액의 pH
3) Tungsten 과 Picric acid
4) Formaldehyde와 탄닌산
5) 염색액의 농도
<설명> 염색 반응은 염색액의 pH에 가장 많은 영향을 받는다. 그것은 염색액에 녹아 있는 염료의 이온화양과 조직성분과의 등전점을 이루는데 큰 영향을 주기 때문이다.
[답] 2.
49. Hematoxylin-Eosin 염색에서 칼슘은 어떤 색으로 염색되는가 ?
1) 농적색 2) 약한 적색 3) 황갈색 4) 흑색 5) 청자색
<설명> 봉입이란 염색이 끝난 조직을 봉입제와 조직을 완전이 덮을 수 있는 얇은 Cover glass를 이용하여 완전히 밀봉시키는 것을 말하며 그 목적은 ① 퇴색방지, ② 부패방지, ③ 조직손상방지와 ④ 표본보존에 있다. 봉입에 사용되는 봉입제가 갖추어야 될 가장 중요한 조건에는 ① 투명할 것 ② 굴절율이 좋을 것 (조직성분의 굴절율과 같은 것이 좋은 것이다.) ③ 중성액이어야 할 것 ④ 휘발 후 조직의 균열이 없을 것 등이다.
[답] 4.
2. 봉입제가 갖추어야 될 가장 중요한 조건은?
1) 광선이 투과될 것
2) 부패방지와 조직 보호가 좋을 것
3) 산화를 방지할 수 있을 것
4) 응집력이 있을 것
5) 견고도가 있을 것
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
3. 봉입제가 될 수 없는 조건은?
1) 투명할 것
2) 일정한 굴절율을 갖을 것
3) 액성은 중성일 것
4) 불투명할 것
5) 조직을 균열시키지 말 것
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답]
4. 다음 중 봉입제는?
1) Glycerin
2) Potassium acetate
3) Cellulose
4) Cajeput oil
5) Agar
<설명> 봉입제의 종류에는 천연수지인 Canada balsam, 합성수지인 Permount , Histoclard( 최근에나온 합서수지)와 같은 Xylol이나 Toluene에 녹는 비수용성인 것들과 물을 비롯하여 봉입 후 Cover glass 주변을 메뉴큐어로 잘 밀봉하면 몇 달 동안 보존도 가능하다. Glycerin은 조직의 보호기능 이 있어 일시 봉입제로 적당하고 Glycerin jelly은 Phenol을 방부제로 사용하며 몇 년간 염색표본의 보존이 가능하다. 그리고 Van apathys gum syrup과 같은 것은 Thymol을 방부제로 하고 Amyloid을 검출하기 위한 Methy violet이나 Crystal violet 염색법과 같은 변색성염색에 많이 이용한다. Levulose(Fructose)syrup은 다른 수용성 봉입제에 비해 굴절율이 높으면서 변색성염료가 용해되지 않아 일시 봉입제로 적당한 수용성인 봉입제이다.
[답] 1.
5. Canada balsam에 대하여 틀리는 것은?
1) 불투명하다.
2) Xylol에 녹는다.
3) 방치하여 스며들며 산이 된다.
4) 가장 일반적으로 사용하는 봉입제다
5) Fat염색 후의 봉입제로는 사용할 수 없다.
<설명> 문제 1번과 4번 설명을 참고할 것. 지방염색후 봉입제로는 비수용성인 것을 사용해서는 않된다. 그것은 비수용성인 봉입제들의 용매제인 Xylol이나 Toluene에 의해 지방이 용해되어 버리기 때문에 지방의 보존이 되지 않는다.
[답] 1.
6. Canada balsam이나 permount가 갖추지 않아도 될 조건은?
1) 조직절편의 염색에 영향이 없을 것
2) Cover glassd와 slide간을 밀봉 고착시킬 것
3) 광선의 투과에 지장이 없을 것
4) Paraffin과 융합할 수 있을 것
5) 중성일 것
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것. 그밖에 Canada balsam이나 Permount가 갖추어야 할 것은 염색과 조직형태에 변경을 주지 않을 것, 산화력이 없고 부착력이 좋을 것, 염색된 조직을 탈수시키지 말 것 등이다.
[답] 4.
<설명> Glycerin jelly은 수용성 봉입제로서 주성분은 Glycerin과 Gelatin의 혼합물이다. 지방염색, 변색성염색, 유지방염색의 양성물질은 Xylol이나 Toluene에 의해 퇴색되므로 위와 같은 수용성 봉입제를 사용하여야 한다.
[답] 1.
8. 합성 봉입제의 주성분은?
1) Resin 2) Citrate 3) Balsam 4) Albumin 5) Agar
<설명> 문제 4번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
9. 지방 염색후 봉입에 좋은 것은?
1) Canada balsam
2) Glycerin-jelly
3) Celloidin
4) Cedarwood oil
5) Resin gum
<설명> 문제 4번과 7번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
10. 봉입과정에서 조직은?
1) 완전히 건조돤 후 봉입한다.
2) 불투명한 조건에서 봉입한다.
3) 건조되지 않은 상태에서 봉입한다.
4) 투명전에 봉입한다.
5) 염색 후에 봉입한다.
<설명> 봉입과정에서 반드시 조직은 건조되지 않은(젖은) 상태에서 봉입해야 한다. 만약 건조상태에서 봉입했을 경우 현미경 시야가 뿌옇게 흐려 관찰할 수 없다.
[답] 3.
11. 봉입에 대한 설명 중 틀린 것은?
1) 완전히 탈수 되어야 한다
2) 기포가 없어야 한다
3) 완전히 조직이 덮어야 한다
4) 젖은 상태에서 붕입해야 한다
5) 건조 상태에서 봉입해야 한다
<설명> 봉입시 주의해야 할 것은 완전히 탈수 시켜야하고, 기포가 없어야 하고, 완전히 조직이 덮어야 하고, 젖은 상태에서 붕입해야 한다. 건조 상태에서 봉입해서는 절대 않된다.
[답] 5.
12. 봉입할 때 실패하여 기포가 많이 생겼다. 그 대응책은?
1) Cover glass을 눌러서 기포를 압축한다.
2) 침으로 Cover glass을 들어올려 떼고 다시 봉입한다.
3) Xylol에 담가 Cover glass을 떼고 다시 봉입한다.
4) 처음부터 다시한다.
5) 그대로 방치해도 무방하다.
<설명> 봉입할 때 잘 못하여 기포가 생겼다면 원칙은 Xylol에 담가 Cover glass을 떼고 다시 봉입해야 한다.
[답] 3.
13. 염색이 끝난 후 봉입할 때 탈수가 불충분하면?
1) 절편에 주름이 생긴다.
2) 뿌옇게 된다.
3) 공포가 생긴다.
4) 변색이 잘 된다.
5) 염색이 잘 안된다.
<설명> 염색이 끝난 후 봉입할 때 탈수가 불충분하면 뿌옇게 된다. 그것은 탈수가 불충분하면 조직내에 수분이 남게되어 투명이 않되어 쓸 것이고 또한 남은 물은 봉입제의 용매인 Xylol과도 혼합되지 않기 때문에 혼탁스럽게(뿌옇게) 보일 것이다.
[답] 2.
14. Canada balsam으로 봉입시 하얀 혼탁이 생겼다면?
1) 염색이 불충분할 때
2) 표본이 너무클 때
3) 탈수가 불충분할 때
4) 봉입제가 많을 때
5) 젖은 상태에서 봉입하였을 때
<설명> 문제 13번 설명을 참고할 것.
[답] 3.
15. 조직표본 제작 후 가장 중요한 것은?
1) 오래 보관 해도 변화가 없는 것
2) 염색이 잘 된 것
3) 투명제를 잘 선택한 것
4) 조직표본을 잘 선택한 것
5) 기관이 잘 증명된 것
<설명> 조직표본 제작 목적 중의 하나가 표본조직을 변화없이 장기간 동안 보존할 수 있도록 하는데 있다. 따라서 조직표본 제작 후 가장 중요한 것은 오래 보관 해도 변화가 없도록 하는 것이다.
[답] 1.
1. PTAH 염색에서 교원섬유와 섬유소는 각각 어떤 색인가 ?
1) 등자색과 적색
2) 황색과 청색
3) 청색과 등자색
4) 등자색과 청색
5) 녹색과 적색
<설명> PTAH 염색은 진행적으로 교원섬유, 기적막을 등자색으로, 근섬유, 섬유소, 신경교섬유, 미토콘드리아를 청색 - 청자색으로, 탄력섬유를 청자색으로 염색시켜 판별해낼 수 있는 염색으로 염색원리는 명확히 규명되 있지는 않지만 Potassium permanganate로 처리한 후 Oxalic acid로 처리 하면 세포막의 침투성과 세포성분의 선택력에 따라 Permanganate가 남아 있는 조직성분과 남아 있지 않은 조직성분으로 구분되어 Permanganate를 포함한 성분은 Tungsten Hematein(Lake : 매염제와 염료가 결합된 상태 )과 결합하여 청색를 나타내고, Permanganate를 포함하지 않은 한 성분은 Phosphotungstic acid 용액이 가지는 적색에 의해 등자색으로 염색된다.
답] 4.
2. 횡문근 증명에 가장 좋은 염색법은 ?
1) Masson's trichrom 염색법
2) Van Gieson's 염색법
3) Reticulum 염색법
4) Mallory's PTAH 염색법
5 PAS 염색법
<설명> 횡문근 증명에 가장 좋은 염색법으로는 Mallory의 PTAH염색법으로 알려져 있다. 그것은 횡문근의 세포질내에는 근섬유가 횡으로 잘 발달되어 있으며 Tungsten Hematein과 매염결합을 통해 짙게 염색되어 잘 나타나 보인다.
[답] 4.
<설명> PTAH 용액은 Hematoxylin (염료) + Phosphotungstic acid(매염제) + Potassium permanganate (산화제) + D. W로 구성되어 있으며 Hematoxylin 과 Phosphotungstic acid의 비는 1 : 20으로 Phosphotungstic acid가 훨씬 많다. Hematoxylin + Phosphotungstic acid (Lake)로 염색되지 않 은 조직성분은 바로 이 Phosphotungstic acid ( Non lake)에 의해 적색으로 염색되게 된다. 이 적색은 오랜 물 또는 알콜 수세에 의해 탈색될 수 있으므로 염색 후 빠른 탈수가 요구된다. 그리고 PTAH 용액은 제조 1개월 후에 사용하는 것이 좋다. 그리고 갈색병이나 어두운 실온에 보관하면 오랜 동안 안전하다. 혼탁하거나 침전물이 생긴 염색액은 사용치 않는다. PTAH염색시 Control 조직으로는 횡문근과 뇌조직을 사용하는 것이 좋다.
[답] 1.
7. PTAH 염색에 의한 교원질 염색시 필요한 조직 고정액은 ?
1) Zenker's 용액
2) Formalin 용액
3) Hemming 용액
4) Alcohol-Ether 동량액
5) Kaisering 용액
<설명> PTAH 염색시 Formalin에 고정된 조직절편은 매염을 위해 2차 고정으로 56 ℃에 Zenker's 용액에 1시간 씩 , 또는 실온에서 4% Chromic acid 수용액에 1시간 씩 매염시켜야 한다.
[답] 1.
㉡ Van Gieson's 염색법
1. Van Gieson's 염색은 무엇을 보기위한 염색인가?
1) 교원섬유질 2) Cellulose 3) 근육 4) 탄수화물 5) 세균
<설명> Van Gieson's 염색은 교원섬유질과 근조직을 두 개의 산성염료 Picric acid와 Acid fuchsin이 혼합된 Van Gieson's용액(Picrofuchsin)에 처리하면 교원섬유질은 Acid fuchsin에 의해 적색으로, 근조직은 Picric acid에 의해 노란색으로 분리 되도록한 염색이다. 그 원리는 강한 산성용액에서 정전기적으로 음으로 대전하는 산성염료인 Acid fuchsin이 정전기적으로 양으로 대전하는 교원섬유 만을 선택적으로 염색케 한다. 이 때 산성염료인 Acid fuchsin이 교원섬유만을 선택적으로 염색케 할 수 있는 산성용액의 pH는 Picric acid가 제공하고, 동시에 Picric acid는 대조염색으로 근조직을 염색시킨다. 다시 말하면 정전기적으로 음으로 대전하는 두 산성염료가 정전기적으로 양으로 대전하는 교원섬유와 근조직을 각각 다른색으로 염색시킬 수 있는 것은 Van Gieson's 용액의 pH가 두 염료와 두 조직성분간의 정전기적인 대전성이 각각 같도록 만들어 주기 때문이다. 염료와 조직성분 간의 정전기적인 대전성이 같을 때를 등전점이라 한다. Van Gieson's 용액의 등전점은 포화상태의 Picric acid 용액을 사용할 때 가능하다. 만약 Van Gieson's 용액제조시 포화상태의 Picric acid용액을 사용치 않았거나 용액의 pH가 높아지면 Acid fuchsin이 교원섬유을 선택치 않아 적색으로 염색되지 않고 엷은 분홍색 내지 Orange색으로 염색 되거나 근조직이나 세포질과 같은 색으로 염색될 수도 있고, 전혀 염색이 않될 수도 있다. 따라서 Van Gieson's 염색에서 가장 중요한 것은 Van Gieson's 용액의 낮은 pH의 유지이다. 그리고 Van Gieson's 염색은 염색 즉시 내지는 24시간 안에 관찰하는 것이 좋다. 그것은 염색 후 Slide가 Van Gieson's 용액 밖으로 나오면 pH의 변화로 등전점이 달라져 교원섬유질과 Acid fuchsin이 분리되어 탈색기 때문이다.
[답] 1.
2. Van Gieson's 염색액의 수명은?
1) 1시간 2) 2시간 3) 3-4시간 4) 24시간 5) 1주일
<설명> Van Gieson's 용액의 pH가 염료와 조직성분간의 정전기적인 대전성이 각각 도록 만들어 주기 때문에 오래된 Van Gieson's 용액은 여러가지 외부 조건에 따라 pH가 변하여 등전점이 달라질 수 있으므로 24시간 안에 쓰는 것이 좋다.
[답] 4.
3. 다음 중 Van Gieson's 용액의 성분과 관계가 있는 것은?
1) Ammonium sulfate
2) Acid fuchsin
3) Mercuric chloride
4) Sodium citrate
5) Sodium carbonate
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
4. Van Gieson's에서 교원섬유에 착색되는 것은?
1) Aniline blue
2) Acid fuchsin
3) Mercuric chloride
4) Basic fuchsin
5) Light green
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
5. Van Gieson's 염색에서 근 조직은?
1) 청색 2) 황색 3) 갈색 4) 적색 5) 녹색
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
6. Van Gieson's 염색에 맞는 것은?
1) 교원 섬유질은 Picric acid에 의해 황색를 띈다
2) 교원 및 근육 섬유는 염기성 염료에 염색된다
3) 근섬유는 Acid fuchsin에 적색을 뛴다
4) 근조직은 황색으로 교원섬유는 적색으로 염색된다
5) 교원 섬유질 이외의 것은 모두 적색으로 염색된다
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 4.
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것. Van Gieson's 염색시 제일 먼저 Slide가 들어가는 염색액은 핵을 염색시키 위해 Weigert's iron hematoxylin( Hematoxylin + 95% Alcohol + 29% Ferric chloride + Conc HCL + DW )으로 처리한 후에 Van Gieson's 용액으로 염색한다.
[답] 4.
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
㉢ Masson's trichrom 염색법
1. Masson's trichrom 염색으로 잘 나타나는 것은?
1) 세망섬유 2) 교원섬유 3) Bacteria 4) 안구 5) 지방
<설명> Masson's trichrom 염색법은 교원섬유를 선별적으로 염색하는 방법으로 특히 신장의 당뇨성 사구체경화증(Glomerulosclerosis), 홍반성난창증 (Lupus erythematous), 섬유증(Fibrosis) 및 사구체성 신장염(Glomerular nephrities)에서의 막 등의 변화를 관찰하는데 이용한다. 그 원리는 일단 산성 염료인 Biebrich scarlet - Acid fuchsin으로 과염색시킨 후 Phosphomolybdic acid 나 Phosphotungstic acid로 감별(탈색)시킨키면 교원섬유는 근조직이나 세포질 보다 구조가 느슨(loose) 하고, 또한 Biebrich scarlet - Acid fuchsin이 교원섬유와 강하게 결합할 만큼 산성화, 즉 정전기적인 대전성이 약하고 그리고 화학적으로 결합되지 못했기 때문에 쉽게 밖으로 빠져 나와 무색이되고 근조직이나 세포질은 적색이 된다. 이 때 무색이된 교원섬유에 흡수된 Phosphomolybdic acid 나 Phosphotungstic acid의 Acid group은 교원섬유의 Basic group과 Anilline blue나 Light green 의 Basic group을 결합시켜 교원섬유가 청색이나 녹색으로 염색되게 한다.
[답] 2.
<설명> Masson's trichrom 염색시 제일 먼저 Slide가 들어가는 염색액은 핵을 염색시키 위한 Weigert's iron hematoxylin용액 (Hematoxylin + 95% Alcohol + 29% Ferric chloride + Conc HCL + DW )으로 핵은 흑청색 된다. 후에 Biebrich scarlet - Acid fuchsin 용액으로 처리하고 탈색하여 Anilline blue나 Light green으로 처리한다.
[답] 5.
3. Masson's trichrom 염색시 탈색은 무엇으로 하는가 ?
1) Picric acid 와 95% alcohol로 한다
2) Phosphotungstic acid로 한다
3) Anilline blue로 한다
4) Acetic acid로 한다
5) Ferric chloride로 한다
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
4. Masson's trichrom 염색의 결과로서 틀린 것은?
1) 핵 - 흑청색
2) 교원섬유 - 청색
3) 근조직 - 적색
4) 교원섬유 - 적색
5) 세포질 - 적색
<설명> 문제 1번과 2번 설명을 참고할 것.
[답] 4.
5. Masson's trichrom 염색에서 교원섬유을 염색하는 것은 ?
1) Anilin blue
2) Methyl green
3) Methylene blue
4) Biebrich scarlet
5) Acid fuchsin
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 4.
6. Masson's trichrom 염색에서 교원섬유은 무슨색으로 염색되는가?
1) 적색 2) 흑색 3) 핑크색 4) 청색 5) 황색
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 4.
㉯ 결합조직에서 탄력섬유(Elastic fiber)성분을 검출하기 위한 염색법
㉠ Verhoeff's 염색법
1. 탄력섬유(Elastic fiber)를 염색하는 좋은 염색법은 ?
1) H & E 염색법
2) PAS 염색법
3) Einarson 염색법
4) Verhoeff's 염색법
5) Van Gieson's 염색법
<설명> Verhoeff's 염색법은 탄력섬유, 교원섬유 그리고 근조직을 각각 분리 염색할 수 있는 다목적 염색방법으로 특히 탄력섬유의 변성을 증명하는데 이용된다. 예를들면 탄력섬유가 위축된 기흉종(Emphysema), 탄력섬유가 두꺼져거나 얇아진 그리고 손실된 동맥경화증(Arterisclerosis), 각종 혈관질환(Vascular disease), 그밖에 특별한 Cancer가 혈관까지 전이되었는 지를 결정하는데 이용될 수 있다. 이 염색의 원리는 Hematoxylin을 Absolute alcohol에 가온 용해시킨 Hematoxylin 용액(Hematoxylin 염료 ) + 10% Ferric chloride 용액(매염제) + Iodine 용액(산화제, Iodine + Potassium iodate)으로된 Verhoeff's Hematoxylin 용액에 조직을 처리하여 과염색시키면 탄력섬유의 중심부에 존재하는 무형질의 Elastine(Desmosine, Isodesmosine, Lysine과 같은 아미노산으로 되어 있음)은 Hematoxylin lake(Hematoxylin + Ferric chloride )와 수소결합으로, 그리고 Ribosome, Heterochromatine, 분비과립 등은 Hematoxylin lake와 정전기적인 결합으로 불용성의 복합체가 형성되어 2% Ferric chloride로 탈색(감별) 시켜도 빠지지 않게 되고 그밖에 조직성분들은 Hematoxylin에 묻어 있는 상태로 염색되어 2% Ferric chloride로 탈색(감별)시키면 Ferric chloride와 결합 용해되어 수세로서 제거된다. 따라서 핵, 탄력성분, Ribosome, Heterochromatine, 분비과립 등은 흑청색로 염색된다. 탈색된 교원섬유나 근조직은 Van Gieson's 염색에 의해 교원섬유은 적색, 근조직은 황색으로 분리 염색된다.
[답] 4.
5. Verhoeff's 염색 결과에 맞지 않는 것은?
1) 핵 - 흑색
2) 탄력섬유 - 흑색
3) 교원섬유 - 적색
4) 근조직 - 황색
5) 탄력섬유 - 적색
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 5.
6. Weigert's 탄력섬유 염색에서 탄력섬유의 색은?
1) 갈색 2) 녹색 3) 황색 4) 흑색 5) 적색
<설명> Verhoeff's 염색법과 같은 목적으로 이용되는 염색법이나 Verhoeff's 염색법은 Verhoeff's Hematoxylin 용액으로 핵과 탄력섬유를 흑청색으로 염색케 하는 반면 Weigert's 방법은 핵을 Weigert's iron Hematoxylin 용액에 의해 흑청색으로 염색되게 한 후 Resorcine-Fuchsin 용액 (저장액: Resorcinol + Basic fuchsin + 95% Alcohol + 농 HCL ; 실사용액 : 저장액 + 70% Alcohol + 농 HCL)에 과 염색시키고 95%Alcohol로 탈색(감별)하면 화학적으로 결합된 탄력섬유만 흑자색이된다. 탈색된 교원섬유나 근조직은 Verhoeff's 염색법과 같이 Van Gieson's 염색에 의해 교원섬유은 적색, 근조직은 황색으로 분리 염색된다. 이 방법은 다만 Verhoeff's 염색법 보다 복잡한 것이 단점이다.
[답] 4.
7. Verhoeff's 에 탄력섬유 염색의 검경은?
1) 2시간 후가 좋다
2) 12시간 후가 좋다
3) 24시간 후가 좋다
4) 48시간 후가 좋다
5) 72시간 후가 좋다
<설명> Verhoeff's의 탄력섬유 염색법은 1번 문제 설명에서 언급한바와 같이 그 원리가 화학적 결합에 의한 것으로 탄력섬유와 염료간의 충분한 반응시간을 주어야 염색반응이 잘 나타나므로 염색 후 1- 12시간 후에 검경하는 것이 좋다. 특히 이 염색은 퇴행성염색법으로 2% Ferric chloride 용액으로 탈색시 과 탈색에 주의하여야 한다. 가장 좋은 방법은 저배율의 현미경으로 관찰하며 탈색시키는 것이다.
[답] 2.
<설명> Gomori's의 세망섬유 염색법은 Ammonical silver 용액을 이용해 림프절, 림프소절, 골수, 간장, 비장과 같은 조직에서 세망섬유을 분리시켜 간경화성변화( Cirrotic change), Virus성 간염, 림프세망섬유종(Lymphoreticular neoplasm), 세망 세포육종(Reticulum cell sarcoma) 등의 진단에 도움 을 주고, Pap의 Silver 염색법은 Gomori's의 염색법과 같은 입장에서 이용되지만 특히 급성 유두종(Acute papillate necrosis)과 세망섬유가 소실(음성)되는 Ewning's 육종 (Ewning's sarcoma)을 진단하는데 이용된다. Jones의 Periodic acid - methenamine silver 염색법은 신장의 기저막 (Basement membrane), 보우만씨 주머니 (Bowman,s capsule) 및 막성사구체 신장염(Membranous glomerular nephritis) 등에 의한 사구체 소방( Glomerular tuft) 두께 변화를 관찰하는데 이용한다. 그밖에 Grocott's 의 Methenamine silver 염색법(GMS)은 조직내 곰팡이 감염 여부를 확인하는데 이용하기 도 한다. Wilder's 염색법, Gridley's 염색법, Snook's 염색법 등도 Silver 염색법에 속한다.
[답] 5.
2. 조직내 세망섬유을 검출하기 위해 시행하는 염색법은 ?
1) H & E 염색법
2) Van Gieson's 염색법
3) Sudan III 염색법
4) Giemsa's 염색법
5) 도은법 (Silver stain)
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것. Sudan III 염색법은 지방염색방법으로 지방을 적색으로 나타낸다. Giemsa's 염색법은 주로 혈액도말 표본염색에 이용되며 특히 혈액내 말라리아 검출이나 골수표본에 존재하는 여러 미숙세포들의 염색에 좋다.
[답] 5.
3. 도은법으로 염색되지 않는 것은 ?
1) Wilder's와 Gomori's 염색법에 의한 세망섬유 염색
2) Van kossa's 염색법에 의한 칼슘 염색
3) Levaditi's 염색법에 의한 Spirochetes 염색
4) Holzer's 염색법에 의한 신경세포 염색
5) GMS 염색법에 의한 곰팡이 염색
<설명> Holzer's 염색법에 의한 신경세포와 섬유질 염색은 신경교 종에서 수초, 섬유, 혈관을 분리하는데 좋기 때문에 신경계의 염증변화와 종양을 증명하는데 이용한다. 결과는 Crystal violet은 양으로 대전하고 신경섬유는 음으로 대전하기 때문에 서로 결합되어 신경조직 중 성상교세포(Astrocyte < Astroglial, Cajal cell, Macroglia> )는 청-보라색으로 염색된다. Van kossa's 염색법에 의한 칼슘 염색, Levaditi-Manovelian's 염색법과 Warthin - Starry's 염색법에 의한 Spirochetes 염색은 Silver nitrate를 이용한 염색으로 그 결과는 모두 흑색으로 나타난다. Jones 와 Grocott's methenamine silver(GMS) 염색법은 세망섬유나 기저막에 존재하는 탄수화물(Carbohydrate)을 Periodic acid로 산화시키면 Aldehyde기(CHO)을 생성케되고 이는 Methenamine silver complex의 Silver를 눈에 인식할 수 있는 Metalic silver로 환원시킨다. 그리고 이 Metalic silver 는 Gold chloride와 치환하여 보다 안정된 Metalic gold가 되어 흑자색을 나타나게 한다. Gold chloride 는 조색기능을 가지고 있으며, 여분의 Gold chloride 는 Sodium thiosulfate에 의해 제거되어 진다. 이 염색법은 조직내 곰팡이 감염 여부를 확인하는데 이용기도 한다.
[답] 4.
4. 도은법의 염색진행 과정이 옳은 것은?
1) Silver액에 노출 - 감작 - 산화 - 조색 - 환원 - 제거되지 않은 은 입자 제거 - 대조염색
2) 산화 - Silver액에 노출 - 환원 - 감작 - 제거되지 않은 은입자 제거 - 조색 - 대조염색
3) 산화 - 감작 - Silver액에 노출 - 환원 - 조색 -제거되지 않은 은 입자 제거 - 대조염색
4) 환원 - 감작 - Silver액에 노출 - 대조염색 - 산화 - 조색 - 제거되지 않은 은 입자 제거
5) 산화 - 조색 - 환원 - Silver액 노출 - 제거되지 않은 은 입자 제거 - 대조염색
<설명> Gomori의 Ammonical silver nitrate 방법에는 7 단계가 있다.
1) 산화
조직의 산화는 세망섬유의 다음 염색을 촉진토록 하는데 있다. 즉 다음에 오는 감작단계에서 금속염을 세망섬유에 부착시키기 위한 전처치이다. 산화제의 종류에는 Periodic acid (Gridley), Phosphomolybddic acid (Wilder), Potassium Permanganate (Foot and Laid law) 등이 있다.
2) 감작
이는 세망섬유와 금속염 (Metalic salt)을 부착시켜 금속 유기체(Metalic organic compound)를 형성케 하여 나중에 Ammonical silver nitrate 용액의 화학적 성분인 Silver diamine complex와 대치토록 하기 위한 것이다. 감작제로는 Uranyl nitrate (Wilder), Silver nitrate (Foot and Gridley) 등이 있다.
3) Silver 용액에 노출
감작 후 Ammonical siver nitrate 용액으로 처리하면 이 용액에 화학적 성분인 Silver diamine complex는 감작 단계에서 만들어진 금속 유기체와 대치 되면서 선택적으로 세망섬유와 결합한다.
4) 환원
새로 세망섬유와 결합된 Silver diamine complex를 Formaline으로 환원시키면 Silver diamine 은 Metalic silver로 환원되어 은 입자의 존재량과 과립크기에 따라서 흑갈색(Brown black)이 된다. Formic acid
2 Ag(NH₃)₂OH + HCHO -→ 2 Ag + HCOOH + H ₂O + 4 NH₃Silver diamine Formaline Metalic silver
(Brown black)
5) 조색
세망섬유에 남아있는 Metalic silver를 Gold chloride로 치환하면 Silver 가 Gold 입자로 치환되어 세망섬에는 Silver 보다는 안정한 Metalic gold가 남게 되고 이는 흑자색(Purple black)를 나타내 다른 조직 구성 성분과 명백히 구별된다.
3 Ag↓ + AuCL₃ -------- Au↓ + 3 AgCL
Metalic silver Gold chloride Metalic gold
(Brown black) (Purple black)
6) 반응되지 않은 Silver 용액의 제거
반응되지 않고 조직편 (호은성 조직) 에 남은 Ionic silver은 Sodium thiosulfate을 써서 용해성 silver complex로 변화시켜 제거한다. 또한 Sodium thiosulfate는 존재할 수도 있는 여분의 Gold chloride도 제거한다.
Ag + 2 Na₂SO₃ ----→ Na + Na₃Ag(S₂O₃)₂
7) 적당한 대조염색
나머지 조직편은 나타내기를 원하는 색으로 염색하면 된다.
Ex) Nuclear fast red, Metanil yellow, Light green 등.
# Ammonical silver nitrate 용액의 제조
Silver nitrate 용액에 Ammonium hybroxiide을 가하면 Silver nitrate 용액의 pH가 9.5 까지 올라가면서 흑갈색(Brown black) 의 침전물인 Silver hydroxide (AgOH)나 Silver Oxide가 생긴다. 이때 계속해서 Ammonium hydroxide 을 가하면 Silver hydroxide(AgOH) 의 침전물은 없어지면서 Silver diamine comlex ( Ag NH₃)₂을 형성하게 된다. 이 때 침전물이 완전히 없어져드라도 Ammonium hydroxide를 몇 방울 더 가해 pH가 11 - 12가 되도록 한다.
AgNO₃ + NH₄OH -------→ NH₄NO₃+ AgOH↓
이러한 Silver nitrate 용액의 제조는 방법에 따라 Ammonium hydroxide 대신 Laid-Law's 방법에서는 Lithium carbonate를 가하여 Yellow white arbonate의 침전물을 형성 시켜 만들수도 있고, Wilder's 방법에서는 Sodium hydroxide를 가해 만들 수도 있으며 또한 Silver 용액의 노출 시간도 방법에 따라 다르다.
[답] 3.
8. 도은법에서 세망섬유의 색조는 ?
1) 흑색 2) 청색 3) 녹색 4) 적색 5) 황색
<설명> 문제 1번과 4번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
9. 조직 염색시 질산은(Silver nitrate)에 흑색으로 염색 되지 않는 것은 ?
1) Argyrophil 2) Spirochetes 3) 교원섬유 4) 세망섬유 5) 칼슘
<설명> 문제 1번과 3번 설명을 참고할 것. Argyrophil은 친은화성을 나타내는 말로 인체 조직성분에는 친은화을 띠는 성분들이 여러 개 있다.
[답] 3.
10. Silver 용액에 Slide를 넣었을 때 조직절편이 떨어지는 이유는 ?
1) Silver 용액의 높은 산성 때문에
2) Silver 용액의 높은 알칼리성 때문에
3) 고정의 불충분 때문에
4) 투명의 불충분 때문에
5) 염색의 잘 못 때문에
<설명> 문제 4번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
나. 조직화학적인 특수염색 (Histochemical special stain)
㉮ 탄수화물(Carbohydrate) 검출을 위한 염색법
㉠ McManus의 PAS( Periodic Acid Schiff) 반응법
1. PAS 반응은 어느 물질을 증명하기 위하여 실시하는가 ?
1) 점액다당류 2) 지방 3) 단백질 4) Amyloid 5) 비타민
<설명> McManus,s PAS 염색의 목적은 조직에 분포되어 있는 전반적인 탄수화물의 검출에 있다. 그 원리는 조직내의 탄수화물을 Periodic acid 로 (HIO4 혹은 H5IO6 ) 산화시키면 Aldehyde기가 발생되고 이 Aldehyde기는 Schiff's reagent(또는 leucofuchin )을 재산화시켜 나타난 적색의 농도에 따라 조직내 탄수화물이 검출되어 진다. 즉 적색의 농도는 Aldehyde의 농도와 비례하고 이는 조직내 탄수화물의 양과 비례하게 되어 조직내 탄수화물의 증감을 알아 볼 수 있다. 결과적으로 PAS에 양성반응을 나타낸 물질은 적색이고, 음성반응을 나타낸 물질은 Mayer의 Hematoxyline으 로 대조염색을 했을 때 핵 등과 함께 청색으로 염색된다. 그밖에 PAS에 양성인 물질에는 Glycogen, Neutral mucosubstance, Epithelial sulfomucin(certain), Epithelial mucin(certain), Hyalin substance(certain), Thyroid Colloid 물질, Pituitary의 Pors intermedia ,β-cell granules of pancreatic islets, Adenohypophysis, Basement membrane, Reticular fiber), Collagen fiber, Juxta-glomerular granules, Fungus cell wall, Glycolipid, Phospholipid, Lipid nature 의 Pigment 등이다.
[답] 1.
2. Schiff's 용액과 Aldehyde기가 접촉하면 ?
1) 청색 반응을 나타낸다
2) 적색 반응을 나타낸다
3) 녹색 반응을 나타낸다
4) 흑색 반응을 나타낸다
5) 황색 반응을 나타낸다
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
3. PAS 반응에 양성이면 ?
1) Blue 2) Red 3) Yellow 4) Brown 5) Black
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
4. PAS반응에서 Periodic acid의 역할은 ?
1) 중화제 2) 환원제 3) 고정제 4) 산화제 5) 매염제
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 4.
5. PAS 반응에서 산화제로 사용할 수 없는 것은 ?
1) Chromic acid
2) Potassium permanganate
3) Glycerin
4) Periodic acid
5) Sodium bisulfite
<설명> Chromic acid, Potassium permanganate, Periodic acid, Sodium metabisulfite, Sodium bisulfite 등에 산화제들을 PAS 반응에 산화제로 사용할 수 있다.
[답] 3.
7. PAS 반응에 쓰이는 가장 중요한 시약은 ?
1) Hematoxylin
2) Leucofuchsin (Schiff's reagent)
3) Light green
4) Crystal violet
5) Metanil yellow
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 2.
8. Schiff's 용액의 표백시 어느 염료가 표백되나 ?
1) Acid fuchsin
2) Basic fuchsin
3) New fuchsin
4) Eosin Y
5) Methylen Blue
<설명> Schiff's 시약이란 Basic fuchsin의 중앙 Carbon 분자에 Sulfite ester을 가하면 Basic fuchsin 의 발색단이 환원되어 Basic fuchsin (pararosanilin)-leucosulfonic acid 가 형성되면서 무색이 되고 여기에 Basid fuchsin 의 Amino group은 Pararosanilin leucosulfonic acid 의 유도체를 만들기 위해 Sulfur dioxide을 첨가하게 한다. 바로 이렇게 만들어진 Pararosanilin leucosulfonic acid의 Sulfinic acid을 Schiff's시약이라 하며 이는 다시 산화되면 적색을 띄게된다.
[답] 2.
9. Schiff's 용액을 48시간 표백하였으나 분홍색이 남아 있었다. 무엇으로 처리 해야 하는가 ?
1) Alcohol
2) Sodium bisulfite
3) Hydrochloric acid
4) Charcoal
5) Acetic acid
<설명> PAS 염색시 주의할 점은 다음과 같다.
① Schiff's's 용액으로 처리한 후 Sodium metabisulfite (Na2S2O5)에 의한 세척이 필요하다 .
이유 : 가) 과잉한 시약의 제거.
나) 흡수된 Schiff's 시약이 봉입 후 공기 중의 산화로 인한 False pigmentation을 막기 위해 실시한다.
② 엷은 조직편은 산화제와 Schiff's 용액에 좀 더 오랜기간을 둔다. 그리고 좀 좋지 않은 Schiff's 용액은 노출시간을 길게 주면 보상될 수 있다. 그러나 Pink 색이 나면 버려야 되고 원칙적으로는 다시 준비해야 한다.
③ 산화 시간과 Schiff's 용액의 처리 시간은 Periodic acid의 농도와 반응과정, 온도 등에 따라 다르다.
④ 일반적으로 0.5% aqueous periodic acid 는 5 분이면 충분하고 10 - 30% 범위에서 사용한다. (온도에 따라 다르다)
⑤ Schiff's 용액은 냉암소에서 48시간 정도 표백하고 만약 분홍색이 남아 있을 때는 활성탄(Charcoal)을 첨가하여 제거한다.
⑥ Schiff's 용액은 1주일에 한번씩 갈아 주는 것이 좋고, 사용에 따라 다르겠으나 4℃ 에 보관하면 3 개월 정도는 보관할 수 있다.
[답] 4.
10. Schiff's 용액을 만들때 약 48 시간 동안 표백하는 곳은 ?
1) 냉암소 2) 실온 3) 냉장고 4) 실온암소 5) 고온 암소
<설명> 문제 9번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
11. Schiff's 용액의 사용여부 검사는 ?
1) Acetone으로 한다
2) Methyl alcohol로 한다
3) Ammonia water로 한다
4) Formalin으로 한다
5) Acetic acid으로 한다
<설명> Schiff's 시약의 사용여부를 시험하는 방법은 아래와 같다.
가. 화학적인 방법
37-40% Formalin을 시계접시(Watch glass)에 붓고 여기에 몇 방울의 Schiff's 시약을 가하면 좋은 Schiff's 시약은 Purple red, 나쁜 Schiff's 시약은 반응이 느리거나 Deep blue 내지 Purple 색을 띄게 된다.
나. 조직학적인 방법
맹장(Human Appendix)의 조직편을 좋은 Schiff's 시약으로 처리하면 개개의 Smooth muscle 사이의 근 섬유막이 아주 맑은 적색 그물(Mesh) 모양을 나타낸다.
[답] 4.
12. Schiff's 시약의 사용여부를 판단하기 위한 검사법에서 사용할 수 없는 색조는 ?
1) Brown 2) Pink 3) Blue 4) Yellow 5) Red
<설명> 문제 11번 설명을 참고할 것.
[답] 3.
13. PAS 반응에 양성이 아닌 것은 ?
1) Glycogen
2) 점액소(Mucin)
3) 세망섬유
4) Fungus
5) 핵
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 5.
14. PAS 반응으로 무엇을 볼 수 있는가 ?
1) Melanin색소 2) Fungi 3) Calcium 4) Iron 5) Amoeba
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
그밖에 탄수화물 검출법의 임상적 이용은 다음과 같다.
① PAS에 양성반응을 나타내는 세망섬유와 기저막(Basement membrane)의 검출에 이용한다.
② 어떤 병적상태에서 나타나는 PAS 반응의 양성인 Glycolipid의 존재를 나타내는데 이용한다.
Ex) Cerebrosider 나 Gangliosider 시에는 Glycolipid가 나타남.
③ 분비성 Adenocarcinoma(PAS-positive)와 미분화된 Sqamous cell carcinoma(PAS-negative)을 구분하는데 이용한다.
④ 조직 분비물에서 Fungus을 검출하는데 이용한다.
⑤ Digestive tract, Lungs, Cervix와 같은 여러 기관의 Epithelia에서 분비되는 PAS positive인 mucosubstance의 type를 검출하는데 이용한다.
[답] 2.
15. 사구체나 기저막을 염색하기에 적당한 염색법은 ?
1) Bauer's feulgen 염색법
2) Van Gieson's 염색법
3) PAS 염색법
4) Azan 염색법
5) Weigert 염색법
<설명> 문제 1번과 14번 설명을 참고할 것. Bauer feulgen 반응도 일종의 탄수화물 검출법으로 원리나 목적은 PAS 반응 과거의 같으나 Periodic acid 대신 Chromic acid를 산화제로 사용하고 Feulgen 용액을 사용하여 주로 Fungus나 당복합체인 Glycogen 그리고 몇몇 Mucine들 만이 적색으로 염색돼 보인다. 만약에 PAS 염색시 Periodic acid 대신 Chromic acid를 산화제로 사용하면 생성된 Aldehyde기를 Carboxyl(COOH)기 까지 산화시켜 PAS에 음성반응을 나타나게 한다. 따라서 Bauer feulgen 반응은 분자량이 큰 셀루로오즈된 세포벽을 가진 Fungus나 당복합체들의 검출에 는 유용하나 인체 조직이 포함하는 탄수화물이나 탄수화물을 포함한 조직성분들로 구성된 사구체나 기저막과 같은 조직의 구조를 확인하는 데는 PAS 염색법이 적당하다.
[답] 3.
㉡ Glycogen(당원)의 검출을 위한 Best's carmine 염색법
1. Glycogen의 검출을 위한 염색과 관계가 먼 것은 ?
1) PAS 반응에 양성이다
2) 무수 Alcohol에 고정한다
3) Zenker's 고정액에 고정한다
4) Best's carmine 염색법을 사용한다
5) Liver cell에 풍부하다
<설명> Glycogen은 정상적으로 Skin, Liver, Cardiac muscle, Parathyroidgland, Skeletal muscle 등 많은 세포들에 각기 다른 양으로 존재하고 있다. Glycogen의 검출을 위한 고정은 수분이 있는 고정액에 고정하면 조직내 Glycogen이 탄수화물성이기 때문에 가수분해되어 손실된다. 따라서 Carnoy's 용액이나 Absolute alcohol 용액, 10% Formal alcohol 용액과 같은 무수 고정액을 사용해야 한다. 그러나 10% Formalin 용액과 같은 고정액은 물이 있지만 가수분해율이 적어 결과에 큰 영향을 주지 않기 때문에 무수 고정액이 준비되지 않을 때에는 사용할 수도 있다. 그리고 Glycogen의 검출을 위한 Best's carmine 염색법의 원리는 Glycogen의 Glycol group과 염료의 Phenolic group의 이온화로 발생된 음이온 -0- 와의 수소결합에 의한 것이다. 결과는 Glycogen은 적색, 핵은 청색(대조염색대로 염색됨)로 염색된다. 이 때 Best's carmine 용액의 pH가 9-11 이여야 Carmine 의 Phenolic group이 이온화 되어 음이온 -0- 가 발생된다. Glycogen 검출을 위한 Best's carmine의 임상적 이용은 다음과 같다.
① Congenital pathologic condition 을 진단하는데 이용한다.
예) ㉠ Von Gierke's disease에서는 Glycogen 이 증가된다.
Von Gierke's disease : 1877 독일의 병리학자. 당원성 간. 신비대증 Glycogen 분해의 장애에 의해 간장. 신장. 비장 등에 당량의 Glycogen이 축적되어 사용되어지지 않고 비대해지는 일종의 대사 이상증이다.
㉡ Pampe's disease에서는 Glycogen이 증가된다.
심장에 영향을 끼치는 심장병의 일종
② Necrotic tissue 주변의 염증반응을 알아보는데 이용한다. 즉 염증이 있으면 Glycogen 이 증가한다.
③ 소비성질환(Wasting disease)나 당뇨병(Diabetes mullitus)을 진단하는데 이용한다. 즉 Wasting disease나 Diabetes mullitus에 있어서는 간세포의 세포질에 Glycogen이 감소된다. 그러나 Diabetes mullitus의 간세포의 핵에는 Glycogen이 증가한다.
④ 횡문 근육종(Rhabdomyosarcoma : 근 아세포의 증식에 의한 악성 종양)의 진단에 이용한다. 횡문 근육종시 심근섬유의 소결절(Nodules:세포집합체)에 Glycogen의 축적으로 팽창된 것을 볼 수 있다.
⑤ Sugar tumor (폐의 Benign성 tumor)을 진단하는데 이용한다. 즉 폐세포의 세포질에 다량의 Glycogen이 존재한다.
[답] 3.
2. Glycogen 고정을 위해 쓰이는 시약이 아닌 것은?
1) Carnoy's 용액
2) 10% Formal alcohol 용액
3) 10% Formalin 용액
4) Zenker's 용액
5) Absolute alcohol 용액
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 4.
3. Glycogen 검사에만 쓰이는 염색법은 ?
1) Sudan 염색법
2) Best's carmine 염색법
3) Van Gieson's 염색법
4) PAS 염색법
5) Alcian blue 염색법
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것. Sudan 염색법은 지질검출을 위한 염색법이고 Alcian blue 염색법은 주로 산성점액질의 검출법으로 Alcian blue의 특성은 일종의 수용성 Polyvalent한 염기성염료로 분자내에 Cupper의 존재 때문에 청색을 나타낸다. Alcian blue 염색의 원리는 수용 액에서 Alcian blue는 음이온의 Group을 포함하고 있는 혼합물과의 반응결합력에 의한 염(Salt)의 결합으로 Acid mucosubstance, Acidic mucin, DNA 등과 결합하여 청색를 나타낸다. 염의 결합기전은 완전히 일치하지는 않는다. 그 밖에 Alcian blue을 사용하는 많은 유용한 염색법(용액의 pH에 따라 Acid group과 반응이 달라지는 것을 이용하는 방법)은 아래와 같다.
① pH 2.5 의 Alcian blue 용액을 사용하는 일반적인 방법
ㄱ) 많은 Acidic mucin 과 Acid mucosubstance를 이 용액으로 염색시킨다.
ㄴ) 대조염색은 자의적인 선택이나 Nuclear fast red나 PAS 반응을 쓴다.
② 다른 Level의 pH를 가진 Alcian blue 용액을 사용하는 방법
ㄱ) 일반적으로 2.5-1.0의 pH가 사용된다 .즉 pH 2.5에서는 Carboxyl기와 Sulfate기을 가진 Acid mucosubstanc와 Mucin만이 청색으로 염색된다. 그리고 pH 6.0에서는 Carboxyl기를 가진 Acidic mucosubstance만이 청색으로 염색된다.
ㄴ) 대조염색은 자의적인 선택이나 보통 Nuclear fast red나 PAS 반응을 쓴다
③ 여러 가지 전해질 농도를 포함한 Alcian blue 용액을 사용하는 방법 .
ㄱ) Alcian blue 용액에 각각 다른 질량농도의 Magnesium chloride를 가하면 염색 Pattern에 따라 Acidic mucin과 Acid mucosubstance가 Carboxylate인지 Sulfate인지 약간 Sulfate된 것인지를 구별할 수 있다.
④ Alcian blue는 Aldehyde fuchsin 염색 후 대조염색으로 사용될 수 있다.
ㄱ) Aldehyde fuchsin은 자체적으로 여러가지 pH에서 강하게 Sulfate된 Mucosubstance와 약하게 Sulfate된 Mucosubstance를 구별하기 위해 사용한다.
ㄴ) 이 방법은 Acidic nonsulfated mucosubstance를 청색 - 청녹색으로, 약하게 Sulfate된 Mucosubstance는 자색으로, 강하게 Sulfate된 Mucosubstance는 짙은 자색으로 염색된다.
⑤ Alcian blue 염색은 여러 가지 Acid mucosubstance 특성를 증가시키기 위해 Testicular의 Hyaluronidase와 같은 여러 가지 효소에 의한 소화(Digestion)방법을 쓰면 발전할 수 있을 것 이다.
염색결과는 Carboxylate되거나 Sulfate된 Mucosubstance와 Mucin은 청색으로, 기타 조직은 대조염색에 사용된 염료대로 염색된다.
[답] 2.
5. PAS반응에 양성이나 Amylase 소화 후 음성을 나타내는 것은 ?
1) 진균 2) Amyloid 3) 점액 4) Glycogen 5) 교원섬유
<설명> Glycogen은 Amylase와 같은 Diastase에 의해 소화되기 때문에 소화 후 PAS 반응을 시키면 음성으로 나타난다.
[답] 4.
㉢ Amyloid 검출을 위한 Crystal violet 과 Congo red 염색법
1. Amyloid를 염색할 수 없는 염료는 ?
1) Hematoxylin
2) Crystal violet
3) Methyl violet
4) Congo red
5) Iodine
<설명> 1) Amyloid의 특성은 다음과 같다.
(1) Amyloid의 정확한 Origin은 알 수 없으나 여러가지 병적상태에서 Immune reaction으로 부터 생긴 Circulating abnormal protein complex가 조직내 세포 간질에 침전되어 덩어리화 된 것을 말하며 그 덩어리는 주변 조직에 중대한 손상을 줄 만큼 큰 것도 있다.
(2) Carbohydrate 성분이 있는 것도 있고, 없는 것도 있다.
(3) 광학현미경에서 Amyloid는 동질성이며 적색을 띤다.
(4) 전자현미경에서 Amyloid는 일정한 물리적 특징을 가진 Protein fibrils로 이루어져 있음을 볼 수 있다.
(5) Amyloid는 물리적, 화학적, 초구조적으로 동일한 물질은 아니다. 여러 종류의 Amyloid에서 보면 몇가지 비슷한점도 있고, 다른 차이점을 가지고 있는 것도 있다.
2) Amyloid 검출법
(1) Benhold의 Congo - Red 염색법
(2) Lieb의 Crystal violet과 Methyl violet을 이용한 변색성 염색법
(3) 현광현미경을 이용하는 Thioflavin T 염색법
(4) Iodine reaction 법
① Benhold의 Congo red 법
가. 원리
직선상의 분자식을 가진 Congo red에 의한 많은 Amyloid 염색은 염료를 구성하고 있는 Azo group과 Amine group이 비슷하게 위치된 Amyloid의 Hydroxyl기 (OH)와 수소결합 (Hydrogen binding)하여 염색된다. 또한 몇몇 방법들은 염료결합을 위해 이용할 수 있는 보다 많은 Potential sites을 갖게하기 위해 조직편을 Alkali로 전처리 하여 인접한 Protein chain 사이에서 자연적인 상호 수소결합을 하도록 하는 것을 이용하고 있다. 대조염색은 Hematoxylin을 사용한다.
나. 방법
고정 : Carnoy's 용액, Absolute alcohol 용액, 10% NBF 용액, Bouin's 용액
염료 : Mayer's Hematoxylin 용액, Congo red
봉입 : 합성봉입제
결과 : Amyloid --------------> 적색 - 분홍색
핵 --------------> 청색
탄력섬유 --------------> 옅은 적색
기타 --------------> 염색않됨
다. 주의
Crystal violet (methyl violet) 염색보다 Congo red 염색이 안정하다. (Crystal violet은 색이 바래는 경향이 있다) 5-10μ 범위로 짤린 조직편내 Amyloid는 편광현미경 하에서 복굴절하여 녹색으로 나타난다. 그러나 이 두께 범위가 아닌 조직에서는 복굴절을 하지 않는다. 그리고 Formalin 이 외의 고정액에 고정된 조직은 위양성 복굴절을 나타낸다.
Lieb의 Crystal violet과 Methyl violet을 이용한 변색성염색법
가. 원리
변색성(Metachromasia)을 위한 통상적인 기전은 전기적으로 음성을 띄는 기(Eelectro negative redicals)나 주기율표 상의 음성 전하(Periodic negative surface charge)를 가진 조직성분과 염료분자 사이에 상호 반응이 일어날 수 있는 방식으로 염료를 결합하여 변색을 나타나게 한다. 즉 Amyloid가 가진 강력한 음이온의 결합전하와 Crystal violet (Methyl violet)이 가진 양이온이 Polymerization에 의해 결합되면 염료 분자들은 최대한으로 새로운 변색상(Metachromatic)을 흡수하여 적자색의 변화를 나타내어 Amyloid가 염색되게 한다.
나. 방법
고정 : Benhold의 Congo red 법과 동일함
염료 : Crystal violet(methyl violet 혹은 혼합사용)
봉입 : 수용성 봉입제(물, Glycerol, Glycerin Jelly)
결과 : Amyloid ----------- 적자색
핵 -------------- 청색
기타조직성분 ------ 청색
다. 주의
Amyloid에서나타난 Polymerization에의한 Metachromasia (양,음이온)은 일반적인 metachromasia, 즉 친화력에 의한 선택력에 의해 결합되어 나타나는 것과는 다른 형태의 염료 결합에 의존하고 있다. 그리고 Crystal violet 용액에 Acid (Acetic acid)를 가하는 것은 세포질이 진한 정염색으로 염색되는 것을 막아 주기 위해서다.
[답] 1.
2. Amyloid 염색을 하기 위한 가장 우수한 고정액은 ?
1) 10% Formalin 용액
2) 70% Alcohol 용액
3) 무수 Alcohol 용액
4) Periodic acid 용액
5) Acid fuchsin 용액
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것. Amyloid에는 많은 양의 탄수화물에 성분을 포함하고 있어 탄수화물 검출법에 의해 양성을 나타낸다. 따라서 고정시 무수 고정액을 사용해 가수 분해되는 것을 막아야한다. 만약 무수 고정액이 없을 시에는 10% Formalin 용액을 사용할 수도 있다.
[답] 3.
㉯ 지방검출을 위한 염색법
1. 지방질을 조직내에서 검출하려고 할 때 조직은?
1) 100% Alcohol 용액에 고정한다
2) 빨리 탈수하돼 70% Alcohol 용액로 부터 시작한다
3) 10% Formalin 용액에 고정한 후 동결절편법을 사용한다
4) 10% Formalin 용액에 고정한 후 Paraffin 포매법을 사용한다
5) 10% Formalin 용액에 고정한 후 Cellodin 포매법을 사용한다
<설명> 지방검출 방법에는 아래와 같은 방법들이 있다.
1) 염료를 쓰지않고 편광현미경이나 형광현미경 (Polarized light M., Fluorescence M.)을 사용하는 물리적 방법(임상에서는 사용않함)
2) 염료를 사용하는 물리적 방법(Sudan 염료들과 같은 지용성 염료를 쓰는 경우)
3) Complex lipid를 위한 화학적 방법
(1) 염료를 이용한 지방 염색법 (물리적인 방법)
Sudan dye와 Oil red 0을 이용한 지방 검출
가. 원리
이 방법은 많은 화학적 기전에 의한 염색법과 달리 물리적 방법에 의해서 이루워 진다. 즉 Sudan 염료나 Oil red 0의 용매인 Propylene glycol로 녹인 염색액으로 조직편을 처리하면 염료는 본래의 용매에서 보다 조직 속의 지질에 더 잘 녹아 작은 입자가 되어 원래의 적색 보다 더진한 적색을 나타내므로서 적색의 농도에 따라 조직내 지질성분을 알아 볼 수 있도록한 방법이다. 여분의 염료는 본래의 용매로 제거한다.
나. 방법
가) Sudan Black B 사용법
고정 : 10% Formalin 용액, Bouin's 용액
포매, 박절 : 동결절편,
절편두께 : 10μ-15μ
염료 : Sudan Black B. Nuclear fast red
시약 : Propylene glycol(Sudan black B의 용매)
봉입 : Kaiser's glycerin jelly
결과 : 지방 ------------> 흑청색
기타 조직성분 -----> 적색(대조염색대로)
나) Oil red 0 사용법
고정 : Sudan 과 동일
포매, 박절 : Sudan 염료들과 과 동일
염료 : Oil red 0, Harris의 Hematoxylin 용액
시약 : Propylene glycol, Ammonia water
봉입 : Glycerin Jelly
결과 : 지방 ----------> 적색
Nuclei --------> 청색
Nile blue sulfate 법을 이용한 Neutral lipid와 Acidic lipid 검출
가. 원리
이 염색법은 조직 중에서 Neutral lipid와 Acidic lipid를 검출하는 방법으로 Nile blue sulfate 용액에 조직편이 염색되는 것은 물리적, 화학적 기전을 포함하고 있다. 즉 염색용액의 염료성분들 중 몇몇 은 물리적 흡착방법에 의해 Lipid를 염색하고, 나머지 성분들은 화학적으로 조직에 포함된 Lipid 유 도체와 반응을 일으켜 염색된다. Nile blue 용액에는 주요 3 가지 성분이 있다. 첫번째 수용성인 흑 청색(Dark blue)에 Nile blue oxazine 염(Nile blue oxazine salt), 두번째 비수용성인 적색의 염기성 유리 Oxazine (Free base of oxazine : Lipid에 용해되고 적색을 나타냄), 셋번째 비수용성인 적색의 Nile red oxazon 유도체다. (Lipid에용해됨) 일반적으로 이들 후자 두 성분들은 Nile blue 용 액속에 적은 양으로 존재하고 그들의 양은 희석황산을 첨가한 Nile blue 용액을 끊이면 증가된다. 이와같은 Nile blue용액에 조직을 처리하면 아래와 같은 결과를 얻게 된다.
Neutral lipid는 Nile red oxazone에 의해 적색을 나타낸다.
Acidic lipid는 적색으로 염색되는 경향이 있다.그러나 Acidic lipid는 Nile blue Oxazone 염색용액에 존재하는 유리 염기성(Free base)과 염(Salt)를 형성하는 능력을 가지고 있고 형성된 염(Salt)은 Lipid에 녹아 흑청색로 염색된다. 이 흑청색Acidic lipid가 또한 적색으로 염색되기 때문에 숨겨질 수도 있다.
Fatty acid들은 Nile blue sulfate 성분들에 의해 청색으로 염색된다.
나. 방법
고정 : 10% Formalin 용액
포매, 박절 : 동결절편,
절편두께 : 6-8 μ
염료 : Nile blue sulfate
시약 : 1% Acetic acid (Nonlipid에 결합된 염료들을 제거)
봉입 : Glycerin Jelly
결과 : 중성지질(Triglyceride, Cholesterol, Steroid )
--------> 적색-분홍색
산성지질(Fatty acid, phospholipid--> 청색
핵 -----------------> 청색
세포질 ------------------> 옅은 청색
(2) 불포화 지방을 위한 화학적 검출방법
Osmium tetroxide 사용법
가. 원리
Osmium tetroxide가 불포화 지방에 녹으면서 자신은 검은 환원물을 형성하면서 환원된다. 형성 된 복합체는 보통 지방용매에 더 이상 녹지 않는다.
나. 방법
고정 : 10% Formalin 용액
박절 : 동결절편,
절편두께 : 10 - 15 μ
시약 : Osmium tetroxide
봉입 : 합성수지를 쓰지 말 것.(Osmium이 산화되어 탈색 됨)
결과 : 지방 -----------> 흑색
기타 조직성분 ----> 황색 - 갈색
1. 지방염색에 꼭 필요한 조작은 ?
1) 조직을 알콜에 고정한다.
2) 고정하지 않은 신선한 조직을 동결한다.
3) 조직을 Acetone에 고정한다.
4) 조직을 Ether-Alcohol에 고정한다.
5) 조직을 zenker's 용액에 고정한다.
<설명> 문제 1번 설명을 참조할 것. 지질성분들은 유기용매에 녹기 때문에 Paraffin 포매법으로 조직내 지질성분을 검출할수가 없다. 따라서 신선한 조직을 동결절편하거나, 아니면 10% Formalin에 고정한 후 동결절편하여 Sudan Ⅲ(Ⅳ), Oil red O, Sudan black B 등의 지용성 염료들을 이용하여검출한다.
[답] 2.
2. 지방을 증명하기 위해 가장 자주 이용되는 방법은 ?
1) Aectone에 고정 - Oil red O 염색 - Glycerin에 봉입
2) Aectone에 고정 - Sudan III 염색 - Apathy gum syrup에 봉입
3) 10% Formalin에 고정 - Sudan III 염색 - Glycerin jelly에 봉입
4) 10% Formalin에 고정 - Sudan black B 염색 - Balsam에 봉입
5) Bouin's 용액에 고정 - Sudan black B 염색 -Gelatin에 봉입
<설명> 문제 1번과 2번 설명을 참조할 것.
[답] 3.
3. 조직 중에서 지방을 증명하기 위한 고정액은 ?
1) Osmic acid 용액
2) Ether-Alcohol 용액
3) 95% Alcohol 용액
4) 10% Formalin 용액
5) Acetone 용액
<설명> 문제 1번과 2번 설명을 참조할 것. Osmic acid(Osmium tetroxide가 물에 녹아 있는 상태를 말함)와 10% Formalin용액을 다 사용할 수는 있지만 Osmic acid는 조직을 고정함과 동시에 불포화 지방을 검출할 수 있는 장점이 있다.
[답] 1.
4. 지방염색과 관계가 없는 것은 ?
1) Sudan III
2) Oil red O
3) Sudan black B
4) Nile blue
5) Alcian blue
<설명> 문제 1번과 2번 설명을 참조할 것. Alcian blue는 산성점액질을 염색하기위한 염료이다.
[답] 5.
5. 지방염색에 좋은 염료은 ?
1) Biebrich scarlet
2) Neutral fast red
3) Carmine - B
4) Oil red O
5) Acid fuchsin
<설명> 문제 1번과 2번 설명을 참조할 것. Oil red O 이외의 염료들은 지방염색에 전혀 사용할 수 없다.
[답] 4.
6. 지방질을 염색할 수 있는 염료는?
1) Oil red O 와 Scarlet B
2) Orange G 와 Congo red
3) Sudan III, IV와 Suan black B
4) Methyl green와 Methyl violet
5) Congo red, Nile blue
<설명> 문제 1번과 설명을 참조할 것.
[답] 3.
7. Osmic acid는 ?
1) 조직내 지방에 의해 흑색으로 환원된다
2) Nissle소체를 보기위한 가장 좋은 염색이다
3) Amyloid에 좋은 염색이다
4) Glycogen에 좋은 염색이다
5) Fungus에 좋은 염색이다
<설명> 문제 1번과 4번 설명을 참조할 것.
[답] 1.
8. 지방을 Sudan III로 염색했을 때 색조는 ?
1) 갈색 2) 흑색 3) 청색 4) 적색 5) 황색
<설명> 문제 1번 설명을 참조할 것.
[답] 4.
9. 다음 중 지방을 용해 시키지 않는 것은?
1) Toluene 2) Osmic acid 3) xylol 4) Benzol 5) Alcohol
<설명> 문제 1번과 4번 설명을 참조할 것. Osmic acid 이외의 것들은 모두 유기용매들이다.
[답] 2.
㉰ 조직에서 미생물 검출을 위한 염색법(Tissue microbiological special stain)
1. AFB 염색을 할 때 고정은 ?
1) 고정이 필요없다
2) 10% Formalin 용액을 사용한다
3) 염색 후 고정한다
4) Alcohol 용액만 사용된다
5) 아무 고정액이나 모두 사용한다
<설명> 조직내 미생물 검출을 위한 고정에는 주로 10% Formalin 용액을 사용한다. 특히 AFB 염색시에는 유기용매가 들어 있는 Carnoy's 용액과 같은 고정액을 사용해서는 않된다. AFB균벽의 지질층이 녹아 AFB성을 잃기 때문이다. 그리고 조직내 미생물 검출을 위한 염색은 일반 미생물 염색과 거의 같다.
[답] 2.
2. Kinyeoun's 법에 의하여 조직내 항산성균을 염색하면 그 색은 ?
1) Red 2) Blue 3) Black 4) Yellow 5) Green
<설명> Ziehl-Neelsen's 법, Kinyeoun's 법, Fite's 법 등이 모두 AFB 염색법이고 결과는 모두 적색이다.
[답] 1.
3. AFB 염색을 위한 조직의 고정은 ?
1) 특히 유기용매가 없는 고정액에 고정했을 때 잘 염색된다.
2) 어떤 고정액에 고정을 해도 잘 염색된다.
3) 고정하지 않은 조직에만 염색이 된다.
4) 무수고정액에 고정된 조직에 잘 염색된다.
5) 유기용매가 들어 있는 고정액에 고정을 해야 잘 염색된다.
<설명> 문제 1번 설명을 참고할 것.
[답] 1.
4. Acid Fast 염색의 원리가 적용되는 결핵균의 특성은 무엇인가?
1) Acid alcohol에 의해 탈색되지 않는 지방성 막이 존재함
2) Ether alcohol에 의해 탈색되지 않는 지방성 막이 존재함
3) Enzyme에 의해 탈색되지 않는 지방성 막이 존재함
4) Acetone alcohol에 의해 탈색되지 않는 지방성 막이 존재함
5) Acid alcohol에 의해 탈색되는 지방성 막이 존재함
<설명> 결핵균과 같은 AFB균의 특성은 일반세균과 달이 세포벽에 두꺼운 지방성 막이 존재하여 Carbol fuschin 용액으로 가온 염색한 후 식혀 수세하고 Acid alcohol로 탈색할 때 정해진 시간내에 탈색되지 않는 성질을 갖고 있는 것이다.
[답] 1.
5. 조직에서 AFB 증명에 가장 좋은 염색법은?
1) Gram 염색법
2) Wright's 염색법
3) Ziehl-Neelsen's 염색법
4) Giemsa's 염색법
5) Congo red 염색법
<설명> 문제 2번 설명을 참고할 것.
[답] 3
6. 조직내 곰팡이를 증명하는데 좋은 염색법은 ?
1) H & E 염색법
2) Van Gieson's 염색법
3) PAS 염색법
4) Wright's 염색법
5) Methylene blue 단 염색법
<설명> 조직내 곰팡이를 증명할 수 있는 염색법에는 McMannus나 Gridley의 PAS 염색법과 GMS 염색법이 있다. 결과는 두 PAS 염색법에서는 적색, GMS 염색법에서는 흑색으로 나타난다.
[답] 3.
7. Gridley's PAS가 McMannus's PAS 반응 보다 곰팡이 염색에 우세한 이유는 ?
1) 과정이 간편하기 때문이다.
2) 시약 값이 저렴하기 때문이다.
3) Fungus만 붉게 염색되기 때문이다
4) PAS 반응은 Fungus 염색을 못하기 때문이다.
5) 시간이 짧게 걸리기 때문이다
<설명> McMannus와 Gridley의 PAS 염색법이 다른 점은 전자는 산화제로 산화력이 약한 Periodic acid를 사용하였고, 후자는 산화력이 강한 Chromic acid를 사용하였다. 곰팡이의 경우는 4% Chromic acid를 사용하여야 균사의 셀루로오스 성분(Polysaccharide)이 산화되어 Aldehyde(CHO)가 생성되어 Schiff's 시약에 적색반응을 나타내 곰팡이가 적색으로 보인다. Periodic acid를 사용하면 산화력이 약해 균사의 셀루로오스 성분에서는 많은 양의 Aldehyde(CHO)가 생성되지 않아 Schiff's 시약에 적색반응을 약하게 나타낸다. 그러나 조직내 일반 탄수화물들을 4% Chromic acid로 산화시키면 생성된 Aldehyde(CHO)기는 Carboxyl(COOH)기 까지 산화되어 Schiff's 시약에 적색반응을 나타내지 않는다. 따라서 곰팡이 검출시 Gridley's PAS 염색법을 사용하는 것이 좋지만 McMannus's PAS 염색법을 사용해도 잘 나타나 보인다. 원래 Gridley의 곰팡이 염색은 곰팡이 균사의 셀루로오스 성분(Polysaccharide)이 산화되어 생긴 Aldehyde(CHO)가 Coleman feulgen 용액과 Aldehyde fuchsin 용액에 접촉하여 적색 반응을 일으키게 만들어졌다.
[답] 3.
8. Grocott의 Methenamin Silver (GMS) 염색에서 곰팡이는 ?
1) 세균과 함께 염색된다.
2) 결핵균과 함께 염색된다.
3) 원충과 함께 염색된다.
4) 흑색으로 염색된다.
5) 적색으로 염색된다.
10. 곰팡이를 보기 위한 Gridley's 염색은 무엇으로 산화시키는가 ?
1) 6% Chrome acid에서 1시간
2) 2% Periodic acid에서 1시간
3) 4% Gold chloride에서 1시간
4) 4% Chrome acid에서 1시간
5) 4% Potassium dichromate에서 1시간
<설명> 문제 7번 설명을 참고할 것
[답] 4.
11. 곰팡이를 보기위한 염색방법이 아닌 것은?
1) GMS 방법
2) Levaditi의 방법
3) Gridley의 PAS 방법
4) McMannus의 PAS 방법
5) Mayer의 Mucin Carmine 방법
<설명> Levaditi-Manovelian의 염색법은 일종의 도은법으로 나선균(Spirochetes)검출 방법으로 사용되며, 조직내 매독균(Treponema pallidium)를 증명하는데 이용한다. 이 방법의 특징은 조직편을 Paraffin 침투전에 도은염색하고 환원시켜 흑색으로 매독균을 염색시킨 후 Paraffin을 침투시켜 절편하여 표본을 만든다. 이외의 보기에 염색방법들은 모두 곰팡이를 증명하기 위한 방법들이다.
[답] 2.
13. Warthin-Starry's 염색은 무엇을 보기 위하여 실시하는가?
1) Spirochetes
2) Gram-Negative cocci
3) Gram-Postive cocci
4) Fungus
5) Protozoa
<설명> Warthin-Starry의 염색법은 Levaditi-Manovelian의 염색법과 같은 목적으로 이용되는 일종의 도은법으로 나선균(Spirochetes)검출 방법으로 사용되며, 조직내 매독균(Treponema pallidium)를 증명하는데 이용한다. Levaditi-Manovelian의 염색법과 다른점은 Paraffin 절편을 Slide에 부착한 후 도은하고 환원시켜 흑색의 나선균을 증명한다.
[답] 1.
㉱ 무기질 검출을 위한 염색법 (Mineral special stain)
1. Hematoxylin-Eosin 염색에서는 황갈색이고, Potassium Ferricyanide로 염색하면 청색을 띠는 것은 ?
1) 멜라닌색소 2) 혈청철 3) 담즙성 색 4) 말라리아 5) 칼슘
<설명> 혈철소(Hemosiderin)는 간조직의 내의 Kupffer세포, 신장의 세뇨관을 덮고 있는 세포, 그리고 폐포의 식세포에서 증명할 수 있고 특히 병리학적인 면에서는 용혈내지 조직내 출혈 유무를 확인하는데 이용하고 있다. Hematoxylin-Eosin염색에서는 황갈색이고, Potassium ferricyanide( 적혈염,K3 [ Fe(CN)6 ] )로 염색하면 청색을 나타낸다. 즉 3 Fe++ + 2 K3[ Fe(CN)6 ] → Fe3 [ Fe(CN)6 ]2 ↓ 푸른앙금(Turnbull blue)이 침전되어 청색을 띤다. 이 때 3가 철은 반응되지 않음. 3가 철의 경우 Ammonium sulfate(NH4)2SO4을 가하여 2가 철이온 황산제1철(FeSO4.7H2O)을 만들고 여기에 적혈염(K3[Fe(CN)6] )을 가하면 Turnbull blue 반응에 의해 청색을 띤다. 이런 검출법을irmann-Schmelzer 염색법이라 한다. 한편 3가 철은 Perls법 즉 Prussian blue 반응에 의해 검출할 수도 있다. 즉 3가 철에 1% HCl을 가하여 2가 철 FeCl3을 만들고 여기에 2% Potassium ferrocyanide (K4 [ Fe(CN)6] )을 가하면 청색 침전물(Fe4 [ Fe(CN)6 ]3이 생겨 청색을 띤다.
4 FeCl3 + 3 K4 [ Fe(CN)6] → Fe4 [ Fe(CN)6 ]3↓ + 12 KCl
[답] 2.
7. 가장 재생되기 어려운 것은?
1) 신경세포 2) 말초신경섬유 3) 신경섬유 4)골조직 5) 위점막세포
[답] 1.
8. 다음 중 암세포(Malignent cell)의 일반적인 특징이 아닌 것은?
1) 세포질에 비해서 핵이 차지하는 면적이 작다
2) 핵의 염색이 진하다
3) 세포분열상이 보인다
4) 핵소체가 뚜렷이 나타나고 크기와 모양이 가지각색이다
5) 핵의 면적이 세포질에 비해서 크다
[답] 1.
9. 생체에서 적출된 조직의 자가융해는 보통 몇 시간 후에 일어나는가?
1) 24시간 후 2) 12 시간 후 3) 4시간 후 4) 1시간 후 5) 1주일 후
[답] 4.
10. 건락괴사가 가장 많이 보이는 질환은?
1) 류마티스 2) Hodgkin's 병 3) 일본뇌염 4) 결핵 5) 열병
[답] 4.
11. 악성종양의 특징이 아닌 것은?
1) 침윤성 발육
2) 핵의 대소부동
3) 점액의 생성
4) 다수의 핵 분열상
5) 전이 존재
[답] 2.
12. 다음 장기의 중량 중 현저하게 병적인 것은?
1) 뇌 1,400g
2) 심장 300g
3) 신장 한쪽 50g
4) 간 1,300g
5) 비장 100g
[답] 3.
13. 자가면역 질환이라 생각되는 것은 ?
1) 심근경색 2) 열병 3) 급성폐렴 4) 홍반성 난창증 5) 신장염
[답] 4.
14. 지방 변성을 일으키기 쉬운 장기는 어느 것인가?
1) 간 2) 난소 3) 비장 4) 갑상선 5) 폐
[답] 1.
15. 다음 중 교원병에 속하는 것은 어느 것인가?
ⓐ 폐렴 ⓑ 결핵 ⓒ 간염 ⓓ 전신성 홍반성 난창증 ⓔ 만성 류마티스
1) ⓐⓑ 2) ⓐⓔ 3) ⓑⓒ 4) ⓒⓓ 5) ⓓⓔ
[답] 5.
16. 갈색 위축을 일으키기 쉬운 장기는 어느 것인가?
1) 폐 2) 간 3) 비장 4) 위 5) 심장
[답] 2.
17. 암은 다음과 같은 기질을 가지고 있다. 부적당한 것은?
1) 전이를 일으키기 쉽다.
2) 핵분열이 많다.
3) 주위의 정상 조직에 침유하기 쉽다.
4) 중년이후 노년층에 빈도가 높다.
5) 소아에게는 볼 수 없다.
[답] 5.
18. 다음 중 연결이 틀린 것은?
1) Van Gieson's 염색 - Acid fuchsin - 교원섬유
2) Masson's trichrom 염색 - Anilin blue - 교원섬유
3) Verhoeff's 염색 - Silver nitrate - 탄력섬유
4) Scarlet 염색 - Oil red O - 지질
5) Von Kossa's 염색 - Silver nitrate - 칼슘
[답] 4.
19. 다음 조립 중 옳은 것으로 만 짝지워진 것은?
1) 10% Formalin 용액-Alcohol 용액-Bouin's 용액-Orth's 용액
2) Nitric acid-Chromic acid-Sulfuric acid-HCl
3) Toluene-Dioxane-Chloroform-Alcoho
4) Acetone-Tetrahydrofuran-Benzen-Dioxan
5) Giemsa's 용액-Carnoy's 용액-Zenker's 용액-Helly's 용액
[답] 1.
20. 다음 중 연결이 잘못된 것은?
1) Von Kossa's 염색 - 칼슘 - 흑색
2) Nissl's 염색 - 신경세포 - 흑색
3) Levaditi's 염색 - Spirocheta - 흑색
4) Toluidin blue 염색 - 다당류 - 자색
5) PAS 염색 - 곰팡이 - 적색
[답] 2.
21. 조직염색의 연결 중 잘 된 것은?
1) Van Gieson's 염색 - 탄력섬유 - Picric acid
2) Kinyeoun's 염색 - AFB - Basic fuchsin
3) Einarson's 염색 - 신경섬유 - Gallocyanin
4) PAS 염색 - Glycogen - Acid fuchsin
5) Oil red O 염색- 지방 - 청색
[답] 2.
22. 다음 연결 중 잘 못 된 것은?
1) Van Gieson's 염색-Acid fuchsin-교원섬유-적색
2) Masson's trichrom 염색-Acid fuchsin, Scarlet-B - 근육 적색
3) Verhoeff's 염색- Hematoxylin - 탄력섬유- 흑색
4) PAS 염색 - Schiff's 시약 - 곰팡이 - 갈색
5) Benhold's 염색 - Congo red - Amyloid - 적색
[답] 4.
24. 다음 중 바른 것은?
1) 단순 알콜에 고정은 탈수, 탈지는 물런 당원과 요산 등도 용해한다
2) Zenker's 용액에 고정한 조직은 수세할 필요가 없다.
3) Nitric acid로 탈회한 조직은 Lithium carbonate로 중화한다
4) Paraffin 급속포매은 냉 Formalin 용액으로 고정한다
5) 냉 Aectone에 의한 고정은 조직의 경화나 수축력을 약화시킨다
[답] 3.
25. 다음 병변에 적절한 고정액 및 염색법은 어느 것인가?
1) Amyloid - 10% Formalin 용액 - Toluidine blue 염색법
2) 혈철소 - 10% Formalin 용액 - Toluidine blue 염색법
3) 진균증 - 무수 alcohol 용액 - Congo red 염색법
4) 석회침착 - 10% Formalin 용액 - Carbol fuchsin 염색법
5) 경색성빈혈 - 10% Formalin 용액 - Sudan III 염색법
[답] 5.
26. 고정방법의 실제에 관해서 적당한 방법은 어느 것인가?
1) 위나 장관 같은 장기는 절개 후에 판자 등에 붙여 고정한다
2) 침생검을 한 작은 조직편의 고정에는 투명한 용기를 쓰지 않는다
3) 혈관과 심장 같은 조직은 혈액을 충분히 수세 제거한 후 고정한다
4) Zenker's 용액에 고정할 때는 2일 정도면 충분하다
5) 10% Formalin 용액의 량은 조직편의 20-30배로 한다
[답] 1.
28. Paraffin 표본 제작 과정에 대해서 맞지 않는 것은?
1) 뱍절을 행하는 실험실은 난방을 해서 따뜻하게 한다
2) 포매용 Paraffin은 통상 경 Paraffin 을 사용한다
3) Rotary microtome을 사용하면 연속박절이 가능하다
4) 박절 후 Block의 박절면을 Paraffin으로 덮어 준다
5) 절편의 두께는 5 μ 정도로 한다.
[답] 1.
29. 다음 중 잘못 연결된 문항은?
1) PTAH - 횡문근, Fibrin
2) PAS - 다당류
3) Congo red - Amyloid
4) Dopa반응 - Melanin
5) Von kossa - 인산나트륨
[답] 5.
30. Cover glass를 덮고 검경할 때 전체에 백탁이 보인다. 그 이유는?
1) 난백 Glycerin의 부패 때문이다
2) 탈수가 불완전 했기 때문이다
3) 고정시 Formalin으로 고정했기 때문이다
4) Xylol로 투명했기 때문이다
5) 지방이 용출돼기 때문이다
[답] 2.
31. 다음 중 잘못 연결된 것은?
1) 진균 - GMS 염색법
2) 결핵균 - Ziehl Neelsen's 염색법
3) 조직내 Spirochetes - Gram 염색법
4) Amaeba - PAS 염색법
5) Malaria원충 - Giemsa's 염색법
[답] 3.