꿀벌 검역 관련 정보

[동불]

지정검역물의 검역방법 및 기준 제정안

국립수의과학검역원

 [시행 2013. 12. 30.] [농림축산검역본부고시 제2013-151호, 2013. 12. 30., 일부개정.]

제3조(지정검역물의범위)  가축전염병예방법(이하 "법"이라 한다.) 제31조 및 같은 법 시행규칙(이하 "시행규칙"이라 한다.) 제31조에 따른 지정검역물(이하 "검역물"이라 한다)에 대한 범위 등은 별표1과 같다.

[별표 1] 지정검역물

지정검역물에 대한 범위 등(제3조 관련)

 1. 지정검역물

가. 시행규칙 제31조에 따른 동물

지 정 검 역 대 상
법규상의 구분	분류학상의 구분	종 류
제5호 꿀벌	벌목	꿀벌과(꿀벌에 한함)

 나. 축산물

1) 시행규칙 제31조 제7호 내지 제10호에 해당하는 지정검역물

2) 동물의 정액․난자 및 수정란

제5조(수입을 위한 검역증명서의 요건) 법 제34조 및 시행규칙 제35조의 규정에 의한 수출국정부기관이 발행한 검역증명서는 동물검역업무를 담당하는 정부기관에서 발행한 것으로서 다음 각 호의 조건을 준수한 것이어야 한다.

1. 검역증명서는 원본(부본을 포함한다)이어야 한다.

2. 검역증명서가 한국어 또는 영어 이외의 수출국의 자국어로 표기된 경우에는 한국어 또는 영어로 된 번역공증서를 첨부하게 할 수 있다.

제7조(검역기간 및 검역방법) ① 시행규칙 제37조제4항 별표8 검역기간의 산정기준은 검역관(관리수의사, 검역관리인 등 포함)이 검역물을 확인[동물(축산물중 종란 포함)은 검역시행장 입고 완료일, 축산물은 검역신청일]한 시기를 기준으로 한다.

  ② 제1항에 의한 검역기간을 단축·연장할 수 있는 것은 다음 각 호와 같다.

  1. 수출·입 축산물 중 역학조사, 현물검사, 정밀검사, 소독 등이 완료된 검역물은 검역기간을 단축할 수 있다.

  ③ 시행규칙 제37조제5항 각 호에 해당되는 검역물의 검역기간 및 검역방법은 다음 각 호의 1과 같다.

  4. 특별관리방법으로 사육되거나 생산되는 시험연구용 동물로서 쥐, 기니픽, 랫트, 훼렛, 토끼, SPF종란 또는 검역본부장이 인정하는 검역물

    가. 관할 지역본부장은 상대국 검역증명서 등과 대조하여 특별관리 되었음을 확인할 수 있고 방역상 이상이 없을 경우 검역증명서를 발급한다.

제2장 수입동물검역

제20조(개․고양이 등 수입동물 검역방법) 개․고양이․꿀벌․애완조류․초생추 등의 검역방법은 별표7에 의한다.

[별표 7]

개・고양이 등 수입동물 검역방법(제20조 관련)

 2. 꿀벌

가. 정밀검사 방법

대상 질병명	검사방법	검사시료
부 저 병	홀스트씨 우유검사 및 원인체동정	죽은 유충 또는 성충 등
기생성응애류	원인체동정	“
석 고 병	원인체동정	“
백 묵 병	원인체동정	“

나. 시료채취 방법

1) 시료종류 : 죽은 유충․성충, 번데기, 유충, 성충, 소비, 밀랍 및 임상검사상 의심이 되는 시료

2) 채취용기 : 멸균된 종이로 포장하여 압착방지

3) 시료 채취량

검사대상수(군)	시료채취수(군)	군별 시료채취 개체수(마리)
10 이하	전체	군별로 일정비율로 합계 100이상
11～100	10～20	10이상
101～500	20+100초과량의 4%	10이상
501 이상	40이상	10이상

4) 시료채취 세부방법

가) 시료채취 방법은 건별, 생산농장별을 단위로 무작위로 선택

나) 질병감염의 의심 또는 검역상 필요한 경우에는 시료 채취수 증가

다) 체표면 기생 진드기 검사는 생산농장별로 5군 이상 임의선택 검사

  [별표 5]

동․축산물 검사 및 시료채취 요령(제18조 및 제34조 관련)

1. 동물 검사방법 및 시료채취

시료채취는 아래와 같다. 다만, 이외의 질병은 가축질병 병성감정 실시요령(농림축산검역본부 고시)을 준용한다.

병 명	검 사 방 법	검 사 시 료
부저병	원인체 동정	죽은 유충, 성충, 소비
꿀벌기생성응애류 및 해충	원인체 동정	번데기, 유충, 성충
석고병	원인체 동정	유충, 성충, 소비, 밀랍
백묵병	원인체 동정	유충, 성충, 소비, 밀랍

2. 축산물 검사방법 및 시료채취 (꿀벌 정액 미정의)

품명	검사질병명	검사방법	검사시료
사향,녹용,웅담,우황 등 한약재 기타 축산물	수출상대국에서 발생되는 질병에 대한 병원미생물 검사		-사향, 웅담, 우황 등 : 3개부위에서 10g～60g - 녹용 등 : 5개부위에서 200g～600g
지정검역물의 검사시료 채취시는 검역관이 관능검사결과 검사상 필요에 따라 시료 수를 증감할 수 있다

가. 상기 검사는 관능검사 또는 역학상 오염의 의심이 있는 축산물에 대해서만 실시

나. 사료원료로 사용하는 검역물(골분, 혈분, 육분, 우모분) 등에 대해서는 역학조사 결과 필요시 살모넬라균 및 탄저균 검사를 행함.

[별표 6]

동․축산물 정밀검사 방법(제18조 및 제34조 관련)

1. 동물

동물별	검 사 병 명	검 사 방 법	검사요령
꿀벌	1. 부저병	홀스트씨 우유검사 및 원인체 동정	수출입 동물 및 축산물의 전염병 정밀검사방법
	2. 기생성응애류	원인체동정
	3. 석고병	원인체동정
	4. 백묵병	원인체동정
	5. 기타 임상검사 또는 폐수검안결과 정밀검사가 필요하다고 인정되는 전염병	원인체 동정 및 기타검사법

※ 다만, 상기의 검사질병 중 수입위생조건에서 수출국 비발생질병으로 명시된 질병이거나 OIE 연보 또는 수출국정부의 질병발생정보 등에 의해 비발생으로 확인된 질병으로서 예방접종을 실시한 질병(브루셀라병 제외) 등의 경우에는 정밀검사를 생략할 수 있다.

2. 축산물 

(참고. 정액류 등, 현재 꿀벌 정액은 정의되어 있지 않음) 

[별표 13] 질병별 동물 임상검사 및 진단방법

50. 부저병( Foulbrood in Honeybees)

가. 정의

○ 꿀벌의 애벌레에 감염사를 일으키는 질병으로서 벌의 육성을 불가능하게 하여 벌군의 기능을 잃게 되는 질병임

나. 원인체

○ Paenibacillus larvae(아메리카부저병) : 난원형, 중립 또는 단립의 아포를 형성하고 무편모이며 병원성은 유충에만 있고 성체에는 없음

○ Melissococcus plutonius(유럽부저병) : 그람음성, 구균 또는 다형성의 간균상, 장연쇄, 무아포이며 35℃ 혐기성 배양이 필요

다. 감수성동물 : 꿀벌 유충

라. 감염경로

○ 감염 포자가 유충 내 침입하여 감염되며 감염의 정도에 따라 생존 여부가 결정, 다시 오염원이 됨

마. 예후 : 불량

바. 임상증상

○ 아메리카부저병 : 충체를 핀셋으로 집어내면 점조성의 실과 같은 것이 나오며 가피가 변화되어 소방(巢房) 밑에 고착 됨

○ 유럽부저병 : 폐사한 유충은 백색, 회백색 또는 회갈색이고 여러 형상을 나타냄. 충체는 점착성이 없고 수분이 있는 과립상

사. 진단방법

원인체 동정	임상증상, 현미경 검사, PCR, 선택배지동정(Agar culture), 생화학적 검사
혈청학적 검사	상용 검사법 없음

-------- 기타 참고자료 ---------

부저병 Foulbrood Disease
원인체 동정	Agent Identification

1. 아메리칸 부저병 (American Foulbrood, AFB)

A. 현미경 검사

1) 슬라이드글라스를 2～3장 깨끗이 닦는다.

2) 꿀벌 시료 중에서 죽었거나 또는 건강하지 않은 유충벌의 적당량(20～30마리) 을 Lab. blender 봉지에 채취한다.

3) 채취된 시료봉지에 멸균된 증류수를 10㎖ 정도 첨가하여 Lab. blender를 사용하여 균질화 시킨다.

4) 균질화된 시료액 25㎕ 정도를 슬라이드글라스 위에 직경 0.5㎝ 정도의 원형으로 도포한다.

5) 자연상태에서 슬라이드를 건조시킨다.

6) 알콜램프에서 슬라이드에 열을 가하여 화염 고정

7) 0.2% Carbol fuchsin 용액을 사용하여 30초간 염색

8) 수돗물로 세척

9) 자연상태로 건조 또는 blot dry

10) 현미경 1000×배율에서 슬라이드를 관찰하여 아포를 형성한 그람양성간균의 존재유무 확인

11) 양성 판정 : Bacillus larvae균 확인

B. 원인체 동정

1) 5부 유리시험관에 5개 증류수 9㎖ 분주

2) 죽은 유충벌 또는 성충벌 10마리 정도를 짓이겨서 시험관에 넣어 잘 혼합시킴.

3) 시료가 담긴 시험관은 70℃의 항온수조에서 15분간 방치시킨 다음 냉각

4) 상기의 현탁액을 1～2 loop씩 취하여 Brain heart infusion 평판배지에 도말 (표준균주도 같이 배양)

5) 페트리디쉬를 5% 이산화탄소가 공급되는 37℃ 인큐베이터에서 2～3일간 배양

6) 배양 2일째부터 plate를 검사하여 의심되는 집락(small and opaque) 선발

7) 의심되는 집락에 대하여는 다음의 간이검사 실시

구분	그람염색	Catalose검사	Nitrate reduction	Nutrient 평판배지	운동성
표준균주	그람양성 아포형성간균	-Ve	+Ve	비발육	+Ve

8) 상기 7번의 검사결과 표준균주와 동일시에 기타의 생화학적 성상검사와 비교(Bergey's manual of systematic Bacterilogy) 및 항혈청 응집반응검사를 실시하여 최종 판정

2. 유럽피안 부저병(European Foulbrood, EFB)

A. 현미경 검사

1) 슬라이드글라스를 2～3장 깨끗이 닦음.

2) 꿀벌 시료에서 추출한 mid-gut의 내용물을 슬라이드글라스 위에 놓는다.

3) 5% nigrosin 용액 20～30㎕을 시료 위에 적하 한 다음 1㎠ 정도의 크기로 도말한다.

4) 슬라이드를 자연건조

5) 알콜램프에서 슬라이드를 약하게 화염 고정

6) 현미경 1000×배율에서 슬라이드 관찰하여 시료중에 많은 0.5×1.0㎛ 크기의 lanceolate cocci가 관찰시 양성 판정

B. 원인체동정 (Melissococcus pluton)

1) Melissococcus pluton의 선택배지 제조

◦ Yeast extract 10g

◦ Cysteine 또는 Cystine 0.2～2g

◦ Glucose 또는 fructose 10g

◦ Soluble Starch 10g

◦ 1 M KH2PO4(pH 6.6) 100㎖

◦ Agar 15g

◦ D.W. 900㎖

2) 116℃ 20분(121℃에서1 5분간) 고압멸균후 페트리디쉬에 분주

3) 꿀벌 5마리 정도에서 적출한 mid-gut의 내용물을 상기의 배지 3장에 도말

(표준균주도 같이 배양)

4) 페트리디쉬를 5% 이산화탄소가 공급되는 37℃ 인큐베이터에서 2～4일간 배양

5) 배양 2일째부터 plate를 검사하여 의심되는 집락(small white opaque)을 선발

6) 의심되는 집락에 대하어는 다음의 간이검사 실시

구분	집락형태	그람염색
표준균주	small and opaque	lamceo late cocci

7) 상기 6번의 검사결과 표준균주의 성상과 동일시에 기타의 생화학적 성상검사와 비교

8) 항혈청 응집반응검사 실시하여 최종판정

부저병 Foulbrood Disease
홀스트씨 우유검사	Holst's Milk Test

1. 4부 유리시험관에 1% Skim milk(탈지분유) 용액을 3㎖ 분주.

2. 죽은 유충벌 또는 성충벌 2～3마리를 상기의 시험관에 혼합하여 잘 혼합한다.

3. 37℃ 배양기에서 20분간 반응한 다음 판정.

4. 판정 양성 : 황갈색

음성 : Skim milk용액 색깔 변화 없음.

기생성 응애류 Parasitic Mites
	원인체 동정 Agent Identification

A. 꿀벌 내부기생충검사법(Acarapis woodi)

1. 재료 및 시약

◦ 실체현미경 ◦ 배양기 (incubator)

◦ 메스 ◦ Lactic acid (85%)

◦ 5% KOH

2. 실험방법

[검사법 1]

가. 날카로운 메스를 이용하여 첫 번째 한 쌍의 다리와 머리를 동시에 제거시키고, 흉부를 요부 가까이에서 절단한다.

나. 이것을 꿀벌의 기관이 노출되게 실체현미경에 놓고 Lactic acid 85%를 흉강내로 떨어뜨린다.

다. 현미경 관찰

라. 감염이 의심되면 기관을 분리하여 슬라이드글라스에 놓고, 커버글라스를 덮은 다음, 광학현미경으로 ×100 시야에서 관찰하여 확인한다.

[검사법 2]

가. 검사법1의 가.를 실시한 후(50마리), 5% KOH 용액에 담가서 37℃ 16～24시간동안 배양한다.

나. 각각의 시료에서 기관을 분리하여 현미경 관찰한다(×40～100).

3. 기타

꿀벌기문응애동정은 Apodeme의 형태로 구분된다.

B. 꿀벌 외부기생충검사법

1. 재료 및 시약

◦ Folbex V.A, 신등전훈연지 등 ◦ 확대경

◦ Perizin (Coumafos), 마이캇트 등 분무제 ◦ 실체현미경

◦ Apistan (Fluvalinate) 스트립 ◦ 여과지

◦ 밀폐용기(주문제작) - 아크릴 박스

2. 실험방법

가. 수입용 벌통(Package bees)을 비스듬하게(약 5～10◦) 기울여서 망사로 된 부분이 상하로 되도록 놓되, 바닥 면에는 확대경으로 확인이 용이하도록 매끄러운 흰 종이 또는 여과지를 놓는다.

나. Folbex V.A 2～6장을 밀폐시킬 상자 또는 벌통에 걸어서 훈연시킨다. 이와 동시에 마이캇트 분무제를 벌통에 분무하면 효과적이다(1:500 희석). 페리진 분무제 사용할 때는 1:50 희석하여 사용한다.

다. 약 1～2시간이 지난 후 상자를 열고 벌통을 좌우로 흔들어 준다.

라. 낙하물을 확대경 또는 육안으로 확인한다.

마. 실체현미경으로 동정을 실시한다.

바. 응애류 동정을 위한 시료는 70% 에틸알코올에 넣어 보관한다.

3. 꿀벌 외부기생성응애류

◦ Acarapis externus ◦ Tropilaelaps claerae

◦ Acarapis dorsalis ◦ Tropilaelaps koenigenum

◦ Varroa jacobsoni ◦ Pyemotes ventricosus

◦ Euvarroa sinhai ◦ Leptus spp.

◦ Varroa underwoodi

석고병 및 백묵병 Stone Disease & Chalkbrood Disease
	원인체 동정 Agent Identification

1. 실험재료 및 장비

◦ 꿀벌유충 및 성충 ◦ Lab blender

◦ 현미경 ◦ 인큐베이터

◦ 생리식염수 ◦ 항온수조

◦ 알콜램프 ◦ 각종 증균배지 및 선택배지

2. 곰팡이 분리 배지인 Sabraud Dextrose agar, MY40배지, 오토밀 맥아한천배지 중에서 2종을 제작

3. 꿀벌 50마리 정도를 무균봉지(Lab blender 백)에 담고 멸균생리식염수 20㎖ 정도 첨가

4. Lab blender를 사용하여 시료를 균질화

5. 균질화 된 부유액을 상기의 선택배지에 직접 도말하여 25～30℃ 배양기에서 3～4일간 배양(표준 진균대조군도 같이 배양)

6. 배양 3일째 의심되는 집락을 선발

7. 의심되는 집락을 성상 검사하여 판정

[동불]

수벌정액과 여왕벌 수입절차 추가 및 개선되어야할 것 같습니다.

[토봉이]

벌을 수입할까하는데 중국과 카리브해인데 가능한가요 파운드벌식으로 몇통이나 산란신왕또는 수정여왕인데 비용은 얼마정도될까요 작년에 수입업자한테 의뢰하니 불가라던데

[동불]

현재꿀벌 수입가능국가는 7개 국가이고 여왕벌도 이 규정에 해당한돠고 합니다.

[토봉이]

어느나라인가요

[동불]

아시아 태평양에서는 하와이가 유일하고 유럽에서는 영국 포함 몇개국이 있는 것 같습니다. 좀 더 알아볼께요

[동불]

정정합니다.
한국으로 수출되는 꿀벌은 아프리카벌 또는 아프리카벌 교배종, 꿀벌기문응애가 존재하거나 의심스러운 지역이 아닌 호주, 뉴질랜드, 덴마크, 화란(네델란드), 헝가리, 일본, 미국(하와이주에 한함)에서 부화하여 사육된 것이어야 하며, 수출꿀벌은 다음 각 조건을 만족시키는 것이어야 한다.(개정 : 고시 1995-63호, ’95.7.27). 아래 링크 참고하세요.
http://www.law.go.kr/admRulInfoP.do?admRulSeq=2100000061893

[동불]

중국, 카브리해 국가는 포함되어 있지 않아서 수입불가입니다.

[토봉이]

예

[이공(서울 관악)]

여왕벌 수입하드래도 시료 채취하여 검사를 꼭 받아야하나요?

[동불(미국 덴버)]

여왕벌도 현재로선 꿀벌과 같은 절차를 거처야합니다. 즉 여왕벌 100 마리를 시료채취로 써야 한다는 이야기죠. 검역관들이 여왕벌과 꿀벌의 차이를 모릅니다. 절차에 적힌데로만 답변하더군요. 공무원이니 그럴 수밖에 없다고 생각합니다.

[이공(서울 관악)]

시료채취를 위해 여왕벌 100마리 이상를 의무적으로 수입해야 한다는 말인가요?
100마리 이상을 조사하는 과정에서 상당수 죽는다면 누가 책임지나요?

[동불(미국 덴버)]

시료 100마리라는 것은 100마리를 다 죽여서 갈아야 한다는 뜻입니다.

[이공(서울 관악)]

그래요? 놀랍습니다.
사실상 수입금지이군요.