면역혈청학자료

[차소영]

제 1 장 혈청학 총론

(1) 항원 (Antigen)

1. 항원★★★

- 완전항원 : 면역원성(항원성)을 일으킬 수 있는 단백물질★★★

- 불완전항원(hapten) - 반응성

- 면역원성(항원성) - 특이항체를 생성하게 하는 성질★★★

- 반응성 - 자기가 생성한 항체․림프구와 반응하는 성질

- Paratope - 항원과 결합하는 항체의 초가변 부위

- Epitope - paratope와 결합하는 항원의 부위

2. 항원의 분류 및 종류

1) 항원의 분류

① 이종항원 - 특이적 항원, 종․장기(organ) 특이적 성향과 관련

② 이호성항원 - Forssman 항원, 비특이적 항원, 자연계에 자연적으로 분포★★★

2) 항원의 종류

① 단백질 항원 - 순수 단백질 항원, 복합 단백질 항원

② 다당류 항원 - 협막성분이나 혈핵형 물질 등으로 된 항원

③ 지질, 항원 - hapten으로서의 작용밖에 없음

3. 항원의 구비조건

1) 완전항원의 구비조건

① 면역되는 동물에 이종물질이어야 함

② 고분자 물질이어야 함

③ 충분한 양이어야 함

④ 비장관계로 직접 접종이어야 함

2) 불완전항원의 구비조건 - 저분자 물질, 단백을 결합시키면 완전항원으로 작용

4. 면역증강제(Adjuvant)

1) 면역증강제의 역할 ★★★(K형)

① 항원의 표면적을 증가시켜 macrophage에 탐식되기 쉽게 한다.

② 항원의 작용을 일정시간 지속시켜 준다.

③ 면역계 T세포의 분열을 촉진시킨다.

④ 항원 주사부위 국소에 염증을 일으켜 항체 생성 세포를 증식시킨다.

2) 면역증강제의 종류

무기염류, 세균, 내독소, 광물유(사람 - 알미늄화합물, 작용이 약하고 빨리 제거되는 것)

(2) 항체(Antibody)

1. 항체

항원을 생체에 투여한 후 생체가 생성한 혈청단백, γ-globulin(immunoglobulin)★★★

2. 항체의 구조

3. 면역글로불린의 성상

1) IgG의 성상 ★★★

; 가장 고농도, 4종류의 아형(비율 70:18:8:3), 태반 통과성, 면역반응에 항체로 작용

2) IgA의 성상

; 초유의 항체, 분비형 글로불린

3) IgM의 성상 ★★★

; 고분자 물질, 항체생산 과정 중에 가장 조기에 출현

4) IgD의 성상

; 림프구 표면에 분포, 항체생산과 관련

5) IgE의 성상

; Allergy 반응에 관계 (reagin 본체)

☞ 농도 : IgG > IgA > IgM > IgD > IgE★★★

☞ 분자량 : IgM > IgE > IgD > IgA > IgG★★★

4. 항체의 정제

1) 특이적 정제방법 : 항원-항체, 반응 이용, 항체만 분리

2) 비특이적 정제방법 : 물리화학적 성질 이용, 분자량, 이동도, 등전점, 용해도 이용

☞ 정제 - 56℃/30min 비동화, 혈청 중 단백분해효소 제거 → 항체 활성 저하 예방

(3) 보체 (Complement)

1. 보체

혈청 중에 존재하는 protein, 이열성, C1～C9까지 존재

2. 경로

1) 제 1 경로 (고전적경로, classical pathway)★★★

① 항원-항체 결합물에 의해서만 활성화★★★★★

② 활성화 항체 - IgM, IgG

③ 2가 이온 Mg++, Ca++ 필요

④ Clq, C4b, C2a 관여가 필수적

2) 제 2 경로 (부경로, alternative pathway)★★★

① 자연계에 존재하는 물질에 의해서도 활성화★★★(뱀독에 의해서 활성화 가능)

② 이물침입 초기에 작용 → 생체방어에 중요한 역할 담당

③ 활성화 - 변성단백, Lipo polysaccharide(LPS), Zymosan

④ 2가이온 Mg++ 필요

⑤ C1q, C4b, C2a 관여 없음

(4) 항원항체 반응

1. 항원과 항체의 결합★★★(종류)

1) 정전력(인력, Electrostatic)

; 서로 반대의 하전이온, 서로 당기는 힘, 거리(d)의 제곱에 반비례 (F ∝ 1/d2)

2) 수소결합

; 친수성기(-OH,-NH2,-COOH)-본래 정전력을 가지 있어 서로 접근할수록 강한 힘이 생김

3) 소수성(Hydrophobic)

; 소수성기가 접근하면 그 사이의 분자는 배제되고 소수성에 의해 결합

4) Van der Waals힘

; 분자간에 생기는 인력, 서로 접근할수록 당기는 힘은 강해짐

2. 항원항체 반응의 종류

1) 침강반응

; 항원 입자의 크기에 따라 구분, 적혈구나 세균 정도의 크기이면 응집★★★(침강과 응집의 차이)

2) 응집반응

; 입자의 크기가 적혈구나 세균 정도, 진탕․교반 ․ 원심침전 ․ 37℃ → 왕성한 반응

3) 보체결합반응

; 항원 과잉시 보체 결합이 억제, 항원 강량법, 항체 감량법, 보체 증량법

4) 항원항체 억제(저지) 반응

Influenza virus - O형 혈구 ․ 조류 혈구 응집 󰠈 항체 존재시 응집반응

Myxo virus - 조류 혈구 응집 -----------⌏ 억제

5) 표지항원항체 반응

형광항체법(형광색소), 방사면역 측정법(동위원소), 효소면역 측정법(효소)

6) 항원항체 중화반응

독소의 무독화(중화)․미생물의 감염력 중화 검사 → 효소의 불활성화 (중화반응)

(5) 면역(Immunity)

1. 면역이란

생체의 저항성, 자기(self)와 비자기(non-self)의 구별 → 이물질을 인식하여 제거(저항)

2. 면역응답 반응

1) 1차 면역응답

항원 자극 - IgM이 조기 출현하여 증가 → IgG증가, IgM이 감소 → IgG(항체로 존재)

2) 2차 면역응답

1차 면역응답에서 생성된 항체가 시간이 지남에 따라 항체가 저하 및 소실되는 것

☞ 기왕반응 - 2차 면역응답 후 재차 같은 항원 투여시 빠르게 높은 항체가를 생산하는 것

󰠆󰠏 선천면역 - 종족, 인종, 풍속, 개인차

※ 면역의 종류 󰠐 󰠆󰠏 자연능동면역 - 전염병 감염 후

󰠐 󰠆󰠏 능동면역. 󰠌󰠏 인공능동면역 - 예방접종(vaccine, toxoid)

󰠌󰠏 후천면역 󰠐

󰠌󰠏 수동면역 󰠆󰠏 자연수동면역 - 모체면역, 태아 면역

│

󰠌󰠏 인공수동면역 - 항혈청 제제 접종(antitoxin)

제 2 장 혈청학 실험

(1) 열성질환 감염 검사 - 세균 응집반응, 비동화(불활성화)

1. Widal 반응

1) 의의 - 장티프스와 파라티프스의 진단

2) 원리 - Salmonella 항원 + 환자 혈청(항체) → 응집

3) 항원

① O 항원 - Salmonella 모든 균주, 균체, 다당체, 내열성 → 현증★★★

② H 항원 - Salmonella 모든 균주, 편모, 단백성 항원, 이열성 → 예방접종★★★

③ Vi 항원 - Sal.paratyphi C, 협막성 항원 → 보균자

4) 해석

① 발병 2주까지 - 혈액검사, 2～3주 - 분변, 뇨검사, 3～5주 - Widal 반응 검사

② H 항원은 예방접종, O 항원은 현증, Vi 항원은 보균자일 경우 항체가가 높게 나타난다.

③ O 항원 응집소가 - 1:160(typhi ＆ paratyphi A) / 1:80(pararyphi B)

④ H 항원 응집소가 - 1:80(양성)

⑤ Vi 항원 응집소가 - 1:20(장티프스, 보균자)

2. Weil-Felix 반응

1) 의의 - 리켓티아성 질환 진환

2) 원리 - 변형균(Proteus)과 공통성분의 항원이 존재 → 변형균에 대한 항체 생성

․ 변형균 항원 - Proteus OX-19, OX-2, OX-k★★★

․ Proteus 항원 + 환자혈청(항체) → 응집

3) 해석 - 발병 2～3주경 - 항체가 상승, 4～5주경 - 항체가 최고도

① Proteus OX-19 - 1:160이상 → 발진티프스와 발진열★★★

② Proteus OX-k - 1:160이상 → 털진드기병(쯔쯔가무시병)★★★

③ Proteus OX-19, OX-2 → 록키산 홍반열★★★

3. 결과 - 최종역가(항체가)는 2+의 응집을 나타낸 최고 희석배수

1) 음성 - 응집이 없음

2) 1+ - 약간 응집, 25%정도

3) 2+ - 현저한 응집, 50%정도

4) 3+ - 거의 완전 응집, 75%정도

5) 4+ - 완전응집, 100%응집

(2) Antistreptolysin O 역가 측정 (ASO, ASLO)

1) 의의 - Streptolysin O(혈구 용혈), ASO(중화, 용혈저지)

2) 원리

① Rantx-Randall 법(정량법)

혈구부유액(5%) + SLO reagent→적혈구 용혈 + 환자 혈정(ASO) → 용혈작용 중화(감염)

② Latex 응집법(정성법)

SLO coating Latex + 환자 혈청(ASO) → 응집(감염)

3) 결과

① 1 Todd unit - 5% 혈구부유액 0.5ml를 용혈시키는 최소량의 SLO를 중화시키는 ASLO양

② Rantz-Randall법 - 중화된 혈청의 최고 희석배수 (정상 - 0～200 Todd unit)

③ Latex 응집법 - 응집(166 Todd unit 이상)

④ 역가 상승 질환 - 성홍열, 류마티스열, 급성 사구체 신염, 교원병, 연쇄상구균 감염★★★

2. Antihyaluronidase 역가 측정(AHT)

1) 의의 - hyaluronidase(Pot.hyaluronate 가수분해), AHT(중화)

Pot.hyaluronate + 초산 → 결합하여 응집

2) 원리 - hyaluronidase + 혈청 + Pot.hyaluronate + 초산 → 응괴(감염)

3) 결과 - 응집이 일어난 혈청의 최고 희석배수(역가)

․ 정상치 - 256 unit 이하, 연쇄상구균 감염(성홍열 등)

- 1024 unit 이상

① AHT 존재 - 응집 → hyaluronidase 중화

② AHT 비존재 - 비응집 → hyaluronidase 비중화

4) 해석 - SLO 비생산 연쇄상구균 감염시 AHT Titer 상승

3. Antistreptokinase 역가 측정

1) 의의 - 항체는 Streptokinase 흡착 면양적혈구를 응집시킴(응집소가 측정)

2) 원리 - streptokinase coating sheep RBC + 환자혈청 (항체) → 응집(감염)

3) 결과 - 양성 - 1:64이하 / 음성 - 항체가 없음

(3) 결핵균 감염 검사

- 결핵균 다당체 이용 → 항체 검출, 결핵균의 활동성 및 비활동성 감별

1. Middlebrock-Dubos 반응 - 비동화

1) 의의 - 활동성일 경우 역가 상승, X-ray상 → 폐결핵과 다른 폐질환의 감별

2) 원리 - 결핵균 다당체 흡착 적혁구 + 환자 혈쳥(항체) → 응집(감염)

3) 결과 - 음성 - 1:8이하 / 급성감염-1:500이상(2주) / 1:4,000(1개월)

(4) Toxoplasma증 검사

- 원충(T.gondii)감염 질환, 뇌장애, 태생기 선천성 질환

1. 간접 적혈구 응집반응 - 비동화★★★

1) 의의 - T.gondii를 Bis-diazotized benzudine(BDB) 처리한 면양 적혈구 이용

2) 원리 - T.gondii 감작 적혈구 + 환자 혈청(항체) → 응집(감염)

3) 결과 - 음성 - 1:8이하 / 급성감염 - 1:500이상(2주) / 1:4,000(1개월)

2. Latex 응집반응

1) 원리 - Toxoplasma coating latex 입자 + 환자 혈청(항체) → 응집(감염)

2) 결과 - 음성 - 1:8이하 / 급성감염 - 1:500 이상(2주) / 1:4,000(1개월)

(5) 매독검사

	반응형식	검사법	항원 조성
비 항 원	침강반응	VDRL(Veneral Disease Research Laboratory)	Cardiolipin Lecithin Cholesterol
	보체결합 반응	Kolmer의 항체 감량법, Ogata의 항체 감량법 Wasserman의 항원 감량법 Browning의 보체 증량법
	응집반응	RPR(Rapid Plasma Reagin)
매 독 항 원	매독 운동 정지시험	TPI(Treponema Pallidum Immunobilization)	비병원성 매독균 균체 성분
	매독 응집 반응	TPA(Treponema Pallidum Agglutination)
	매독 형광항체 반응	FTA(Flurescent Treponema Antibody)
	매독 면역점착 반응	TPIA(Treponema Pallidum Immune Agglutination)
	매독균 혈구 응집반응	TPHA(Treponema Pallidum Hem Agglutination)
	매독 보체 결합 반응	TPCF(Treponema Pallidum Complement Fixation)
	단백 보체 결합 반응	RPCF(Reiter Protrin Complement Fixation)

1. VDRL(Veneral Disease Research Laboratory)★★★★★

1) 의의 - 간접 응집, 침강반응

Cardiolipin, Lecithin, Cholesterol → Kaolin or Carbonate 입자에 흡착한 지질항원 이용

2) 원리

지질항원 조성 - Cardiolipin 0.03%, Lecithin 0.18～0.3%, Cholesterol 0.9%

지질항원 + 환자 혈정(비동화) → 응집(감염) / 비응집(비감염)★★★

3) 결과

① 정성법

․ Non-Reactive(N) - No clumping(-)

․ Weakly Reactive(WR) - Small clumping(±, 1+)★★★

․ Reactive(R) - Medium or Large clumping(2+, 3+, 4+)★★★

② 정량법(역가)

․ 정성검사 결과 Weakly Reactive 혹은 Reactive경우에 대해 행한다.

․ 응집 중 2+인 혈청의 희석배수를 역가로 한다.

2. RPR(Rapid Plasma Reagin) Circle 반응★★★★★

1) 의의 - 혈청과 혈장 모두 사용 (비동화 안함)

2) 원리 - 지질항원 + 환자 혈청(항체) → 응집(감염)★★★

․ 지질항원 조성 - Cardiolipin 0.003%, Lecithin 0.02～0.022%, Cholesterol 0.09%★★★

3. 매독 형광항체 반응(FTA)★★★

1) 의의 - 형광색소, 특이적 검사

2) 원리 - 비병원 균주(Nichol's) 부유액, 형광 표지한 항 Human γ-globulin

․ 간접법 - 항원 + 혈청(항체) → 항원-항체 복합물 + 형광 표지

항 Human globulin →형광

․ 직접법 - 항원 + 형광 표지 항 Human globulin 혈청(항체) → 형광★★★

3) 결과

․ BV filter(Yellow)와 UV filter(무색)를 사용하여 형광현미경으로 관찰

판정	BV(Yellow) ＆ UV(무색) filter	비 고
4＋	극히 강한 형광 인정	BV filter 사용 형광 현미경 2+ 이상 양성
3＋	강한 형광 인정
2＋	특이 형광 인정
1＋	약한 특이 형광 인정	UV filter 사용 형광 현미경 1+ 이상 양성
±	매독균 존재만 확인
－	암시야법으로만 매독균 확인

4. 매독균 혈구 응집 반응(TPHA, 감작 적혈구 응집반응)★★★

1) 의의 - 비병원 균주(Nichol's)를 적혈구에 흡착, 특이적 검사

2) 원리 - 감작 적혈구 + 환자 혈청(항체) → 응집(감염)

3) 결과

① 정성법

② 정량법 - 응집이 일어난 최고 희석배수(역가)

판독	반 응 양 상	판 정
－	세포(중앙), 과립 침전이 없음(도너츠나 단추모양)	음 성
±	세포(중앙), 외연(두꺼움), 침전(응집)
1＋	외연(얇음), 많은 과립 침전	양 성
2＋	세포(넓게 퍼짐), 외연(선명치 않음)
3＋	외연(미확인), 침전(넓게 퍼짐)

5. Colloidal Gold test

1) 의의 - 신경계 잠입 매독 진단, 비특이적 검사

2) 원리 - Albumin ＆ Globulin 비율 변화, 10개 tube 이용

Albumin(침강 저지), Globulin(침강 유도), 침강 정도는 색깔에 의해 숫자로 표기★★★

3) 결과 - 0～1 - non Reactive / 2～5 - reactive

① 5 - Coloreless, 완전침강

② 4 - Pale blue

③ 3 - Blue

④ 2 - Purple or lilac

⑤ 1 - Red or bluish-red

⑥ 0 - Orange-pink, 비침강

4) 해석

① 전대 곡선 - 1～4 tube(부분 또는 완전침강) ․ 무증후성 신경매독, 척수 매독, 척수로, 매독성 뇌막염

② 중간대 곡선 - 4～6 tube (색의 변화, 완전침강은 드뭄) ․ 수막구균 뇌막염, 결핵성 뇌막염

③ 종대 곡선 - 6～10 tube (색의 변화, 완전침강은 드뭄) ․ 화농성 뇌막염, 지주막하 차단

(6) 후천성 면역결핍증의 검사

- T-cell의 helper T-cell과 supressor T-cell비율의 역전★★★★★

1. EIA(Enzyme Immunoassay) - AIDS 정성검사

1) 원리 - 고상법 이용 (B/F 분리 필요), HTLA-III virus(항원)

․ HTLA-III virus를 bead에 coating + 혈청(항체) → 미반응

HTLV-III 세척 → anti-human IgG-peroxidase(2차반응) → 미반응 anti

- human IgG-peroxidase 세척→OPD(O-phenylenediamine)→bead(yellow-orange)→ 발색을 492nm에서 측정

2) 결과 - 음성 대조혈청 평균 흡광도(NCX), 양성 대조혈청, 평균 흡광도(PCX)

․ Cutoff치 = NCX + (0.1×PCX) / Cutoff치 이상(양성), 이하(음성)

2. Western Bloting법 - HIV 항체 확인 검사★★★★★(AIDS screening test로 가장 많이 사용된다.)

1) 원리

․ SDS-polysaccharide gel 전기영동으로 분리한 단백(HIV)을 nitrocellulose막에 전사하여 전사된 단백 성분을 검출하고 혈청(항체)과 반응시킴. 미반응 단백 세척, 항 사람 IgG가 하고 효소기질로 발색시켜 492nm에서 측정

2) 결과와 해석

․ P 24, P41에 대한 항체(조기 출현), P 24에 대한 항체가 하강 - AIDS 관련 증후군, 에이즈

․ 양성 - gp(glycoprotein) 110, gp 41 항체가 출현

음성 - gp 18 항체가만 출현

(7) B형 간염 바이러스 감염검사

․ 혈청형, DNA virus, Protein․Cabohydrate․Lipid이 주성분

․ 중심핵 - core 항원(HBc Ag)/외막 - envolpe 항원(HBe Ag)

외피 - surface 항원(HBs Ag)

1. PRHA(Passive Hemagglutination) test - 항원 이용★★★

․ 원리 - 감작 적혈구 + 환자 혈청(항체, 비동화 안함) → 응집(감염)

2. PHA(Passive Hemagglutination) test - 항체 이용★★★

․ 원리 - 감작 적혈구 + 환자 혈청(항체, 비동화 안함) → 응집(감염)

3. 결과

① 정성법

판 독	반 응 양 상	판 정
－	단추․고리모양, 매끄러운 원형	음 성
±	고리모양, (-) ＆ (±)의 중간응집	음 성
1＋	고리모양, 약간 크고 많은 응집	양 성
2＋	응집이 균일, 막 모양
3＋	응집이 중심을 향하고 매끄러운 상태

(8) 일본뇌염 바이러스 감염 검사

- Arbovirus group, 조류의 혈구 응집

1. Heamgglutination inhibition(HI) test★★★

1) 원리 - 일본뇌염, 인플렌자 바이러스 → 조류의 혈구 응집

․ 항원 부유액 + 환자 혈청(항체, 비동화 안함) → 응집(감염)

2) 결과 및 해석

① Single ～ 감염 - 1:320이상

② Paired ～ 감염 - 급성기 ≤ 1:40 / 회복기 1:160

(9) 비정형 폐염의 혈청학적 검사

․ 혈청에 한냉응집소와 Streptococcus MG agglutinin의 두 가지 비특이적인 응집소가 상승★★★

1. 한냉 혈구응집 반응

1) 의의 - 0~5도 온도에서 적혈구를 응집★★★

2) 원리 - 1% O형 혈구 부유액 + 환자 혈청(항체) → ice bath(0～5도, 하루) → 응집(감염)★★★

3) 결과 및 해석

① 발병 2주째 - 역가 상승 / 3～4주 - 최고도 / 4～6주 - 하강

② 비정형 폐염 양성 - 1:512 or 반복검사시 4배이상의 상승

2. Streptococcus MG 응집반응

1) 원리

․ 흉막폐염 환자 혈청 - 비용혈성 streptococcus MG의 협막다당질과 결합하는 항체 존재★★★

․ 협막다당질 + 환자 혈청(항체, 비동화 안함) → 응집(감염)

2) 결과 - 최종역가는 2+ 응집된 혈청의 최고 희석배수

․ 음성 - 응집이 없음

1+ - 약간 응집, 25%정도

2+ - 현저한 응집, 50%정도

3+ - 거의 완전응집, 75%정도

4+ - 완전응집, 100% 응집

3) 해석 - 항체가 - 1:20 이상(의심) / 반복검사 - 4배이상 상승(감염)

(10) 전염성 단핵구증 검사

․ 전염성 단핵구증 - 경구적 감염(급성질환), virus, 면양 적혈구를 강하게 응집(이호성항체)

․ 혈청병 환자 - Forssman antibody(이호성항체) → 면양 적혈구를 응집시킴★★★

1. Paul-Bunnell 반응 I (추정시험)

1) 의의 - 항체량을 측정

2) 원리 - 면양 혈구 부유액 + 환자혈청(비동화) → 응집

3) 결과 및 해석 - 1:56 or 1:112 → 감별시험

․ 정상치 - 1:56 이하 / 전염성 단핵구증 - 1:224이상(말 혈청제제를 맞은 적이 없는 사람)

2. Paul-Bunnell 반응 II (감별시험)

1) 의의 - 3종류의 이호성항체(단해구증 항체, 혈청병 항체, Forssman 항체) 구별★★★

2) 원리 - Guinea pig kindey(GPK), Beef erythrocyte(BE)에서 조제한 항원

․ GPK + 환자 혈청(비동화) + 면양적혈구 → 응집(IM) / 비응집(serum sickness, Forssman)

BE + 환자혈청(비동화) + 면양적혈구 → 응집(IM, serum sickness) / 비응집(Forssman)

3) 결과

․ GPK와 BE의 이호성항체 흡수여부에 따른 응집 및 비응집을 비교하여 판정한다.

․ (+) - 항체 흡수(비응집) / (-) - 항체 비흡수(응집)

분 류	전염성 단핵구증	혈청병	Forssman
GPK	(-)	(+)	(+)
BE	(+)	(+)	(-)

★★★★★

(11) α-Fetoprotein(AFP) 측정

- 원발성 간암 보조진단

․ 태생기에 존재하는 혈청단백질, 태아 4주경부터 출현, 10～15주경에 최고치(4mg/ml)

1. RPHA(Reserve Passive Hemagglutination) test★★★

1) 원리 - 감작 된 적혈구 + 환자 혈청 (항체, 비동화 안함) → 응집

2) 결과

① 정성법

판 독	반 응 양 성	판 정
－	단추 ․고리모양, 매끄러운 원형	음 성
±	고리모양, (-) ＆ (±)의 중간응집	음 성
1＋	고리모양, 약간 크고 많은 응집	양 성
2＋	응집이 균일, 막 모양
3＋	응집이 중심을 향하고 매끄러운 상태

② 정량법 - 응집이 일어난 혈청의 최고 희석배수를 역가로 하여 AFP의 함량 계산

․ 함량계산 - 2.5ng/ml × 응집이 일어난 최고 희석배수 = ( )ng/ml

․ 음성 - 50ng/ml / 원발성 간암 - 1,000ng/ml 이상

(12) 면역학적 임신진단

․ 임산부 뇨 - HCG호르몬, 임신 후 40～60일 사이 최고도, 정상분만 후 1주일 이후로 소실

․ 임신 중 음성 - 태아 사망 / 분만 후 - 2～3주간 양성 → 융모상피종, 기태(mole)

1. Immuno-plate pregnancy test - 임신 5주째부터 양성

1) 원리 - 한천평판 + 농축 가검뇨 → 둥근 환 또는 침강(호르몬 존재)

2) 결과 - 양성(양성 대조보다 약간 크거나 작은 침강환)

2. Pregnancy Slide test★★★

1) 원리 - 항 HCG 혈청 + 환자 요(HCG) + 감작혈구(HCG) → 응집(비임신) / 비응집(임신)

2) 결과 및 해석 - 양성-응집(비임신) / 음성 - 비응집(임신) / 임신 5주째부터 양성

(13) C-반응성 단백 검사 (C-Reactive Protein, CRP)

․ 염증 ․ 조직 변성 ․ 괴저성 질환시 나타나는 비정상 혈청단백이다.★★★

․ 폐염구균의 균체인 C-다당체와 반응하여 침강한다.

․ 심근경색에 특이적이다

1. Capillary tube method

1) 원리 - 항 CRP 혈청(1/3) + 환자 혈청(1/3, 항체) → 흰 침강 (6～8시간 반응)

2) 결과 - 백색 침강의 양에 따라 높이를 측정/ 1+ - 1mm / 2+ - 2mm / 3+ - 3mm ★★★(2차실기)

2. Latex 응집반응

1) 원리 - 항 CRP 혈청(Latex) + 환자 혈청(항체) → 응집(감염)

2) 결과 - 양성(응집) / 음성(비응집)

(14) Thermoprotein의 검사

․ cryoglobulin ＆ cryofibrinogen - 0～4℃의 한냉에서 침전 or Gel화

․ pyoglobulin ＆ Bence-Jonce 단백 - 56℃ 전후 가온으로 침전 or Gel화

1. Cryoglobulin - M 단백혈증 진단

1) 의의 - 저온 → 침전 or Gel화 / 37℃이상 → 다시 환원

2) 원리 - 혈청을 4～6℃에서 24시간 방치(침전 or Gel화 관찰) → 가온(환원 여부 관찰)

3) 결과 - 양성 - 4～6℃에서 침전(혼탁) 또는 Gel화 / 음성 - 변화없음

2. Pyoglobulin - M단백혈증 진단

1) 의의 - 56℃로 가온 → 침전 or Gel화, 온도를 낮추어도 용해하지 않음

2) 원리 - 혈청을 56℃에서 가온하여 침전 및 Gel화 유무를 확인

3) 결과 - 양성 - 56℃전후 가온으로 침전(혼탁) or Gel화 / 음성 - 변화없음

(15) 류마티스성 관철염 검사

․ 자가항체(IgM), 사람이나 토끼의 γ-globulin과 반응★★★

1. Rapid Slide Screening 반응 (Latex Fixation test)

1) 원리 - Latex 입자(γ-globulin) + 혈청(항체, 비동화) → 응집(인자 존재)

2) 결과

① Non-Reactive(N) - 비응집

② Weakly Reactive(WR) - 부분 or 작은 응집

③ Reactive(R) - 완전하고 큰 응집(류마티스 인자 존재)★★★

2. Macroscopic tube 반응(역가 측정)

1) 원리 - Screening test 양성 혈청을 계대희석하여 Latex(γ-globulin)입자 첨가시 응집

2) 결과 - 양성 - 1:20 이상

3. Waaler-Rose 반응 - 분별응집비 증가

1) 원리 - 사람의 혈청 → 면양 적혈구에 대한 이종응집소 존재

① 감작 면양 적혈구(γ-globulin) + 환자 혈청 → 응집

② 무감작 면양 적혈구 + 환자 혈청(비동화) → 응집

③ 분별응집비 = 감작 혈구 응집소 역가(S) / 무감작 혈구 응집소 역가(N)

2) 결과 - 양성(응집비 1:16 이상) / 의심(응집비 1:8) / 음성(응집비 1:4 이하)

(16) 항핵항체의 검사(ANA)

- SLE(전신성 홍반성 난창)의 진단 및 병의 상태 해석

1. Latex 응집반응

1) 원리 - DNP-IgG latex 현탁액 + 가검 혈청(항체) → 응집(감염) / 비응집(비감염)

2. 형광항체법

1) 의의 - 핵재료를 가검혈청과 반응시키고 형광색소를 표지하여 발광하는 형광을 관찰★★★

⇒ 핵재료는 사람백혈구, 후두암 유래세포(HEp-2)가 많이 사용

2) 원리 - 핵재료 + 혈청(항체) + 형광색소표지 γ-golbulin → 형광

(17) Carcinoembrionic Antigen(CEA) 검출

- 대장암 및 악성종양 진단

1. EIA(Enzyme Immunoassay)★★★★★

1) 원리 - 고상법(B/F 분리 필요), 항원 검출

․ 항 CEA 항체 bead + 혈청→미반응 물질 세척→ peroxidase 표지 항 CEA 항체(2차반응)

→ 비반응 peroxidase 세척 → OPD(Orthphenylenediamine) → bead(yellow-orange색깔)

→ 발색 정도를 492nm에서 측정

2) 결과 - 표준용액으로 만든 표준곡선과 조합해서 검체 중의 농도를 산출한다.★★★

(18) γ-globulin ＆ fibrinogen 검출

1. Latex 응집반응을 이용한 γ-globulin의 반정량

1) 원리 - 계대희석한 3개의 혈청 검사

․ latex 입자(항 human γ-globulin 흡착) + 가검혈청 → 응집(일정량 이상)

2) 결과 및 해석 : 양성 - 응집(일정량 이상) / 음성 - 비응집 (일정량 이하)

< ○ - 비응집 / ● - 응집 >

1번	2번	3번	판 정
○	○	○	무 γ-globulin(25mg/ml 이하)
●	○	○	저 γ-globulin(50～2000mg/ml)
●	●	○	정상(600～1,200mg/ml)
●	●	●	고 γ-globulin (3,000mg/ml 이상)
○	●	●

2. 일원면역 확산법(SRID법)에 의한 γ-golbulin측정

1) 원리

․ Gel plate well에 일정량의 가검 혈청9항원, γ-golbulin)을 첨가하여 반응시키면 항원은 한 gel내를 확산하게 되고 이때 항체와 반응하여 백탁의 침강륜을 형성한다.

2) 결과

․ 표준혈청을 사용 검량선을 작성 검량체 침강륜의 직경을 검량선을 통해 항원의 농도 구함★★★

임상병리과자료실~~