Re:The analgesic and anti-inflammatory effect of WIN-34B, a new herbal formula for osteoarthritis composed of Lonicera japonica Thunb and Anemarrhena

[공병희]

WIN-34B¹⁾

금은화(인동(忍冬)), 지모

 금은화(Lonicera japonica Thunb)

 - 금은화는 중의학에서 관절염, 당뇨, 열, 감염, 인후통 및 부종을 포함해서, 다양한 질환의 치료에 흔히 사용한다. 금은화(flower, buds(싹))의 biological activity에는 항박테리아, 항염증, anti-nociceptive, 항산화, antiangiogenic, antipyretic, 항바이러스 및 hepatoprotective 효과를 포함한다.

 - 다양한 compounds를 가진다. Luteolin이 잘 알려진 주 활성 물질로, HMC-11 세포에서 NF-kB와 MAPKs 활성 경로를 blocking함으로 염증 매개자의 분비를 억제한다.

 지모(Anemarrhena asphodeloides BUNGE)

 - antipyretic, 항염증, 항당뇨, anti-platelet aggregator 그리고 antidepressant로 사용되어 왔다.

 - 다양한 성분이 함유되어 있다. mangiferin, stroidal saponins(sarsasapogenin, timosaponin AII 그리고 BII와 같은) 

2010	Journal of Ethnopharmacology 동물실험	The analgesic and anti-inflammatory effect of WIN-34B, a new herbal formula for osteoarthritis composed of Lonicera japonica Thunb and Anemarrhena asphodeloides BUNGE in vivo		- 한국과 중국에서 인동과 지모는 다양한 염증성 질환과 감기 그리고 감염성 질환에 수세기 사용되어왔다. 인동의 말린꽃과 지모의 말린 뿌리로부터 n-butanol fraction(WIN-34B)의 활성(anti-nociceptive와 항염증)을 평가했다.
				- WIN-34B (100, 200 and 400 mg/kg, p.o.)  1. anti-nociceptive : using acetic acid-induced writhing response, formalin-induced paw licking, hot plate, radiant heat tail-flick, carrageenan-induced paw pressure, and Hargreaves tests  2. 항염증 활성 : were assessed using acetic acid-induced vascular permeability, carrageenan-induced paw edema, and croton oil-induced ear edema.  3. 항관절염 : monosodium iodoacetate (MIA)-induced osteoarthritis animal model.
		- carrageenan, carrageenan-induced paw edema, croton oil-induced ear edema에서 celecoxib보다 나은 항-염증 활성을 보였다.  - 쥐의 formalin-induced paw licking과 writhing response model의 late phase에서 유의한 anti-nociceptive효과를 가졌다.  - radiant heat tail-flick, carrageenan-induced paw pressure에서 인도메타신과 celecoxib와 유사한 활성.  - hot plate에서 인도메타신보다 더 낫거나 유사한 효과를 보임  - Hargreaves tests에서 celecoxib보다 더 나은 anti-nociceptive 효과  - 관절염 모델에서, pain measurement periods을 통해 celecoxib보다 유사하거나, 더 나은 anti-nociceptive 특성을 보였다. - 결론: celecoxib에 비교 시, WIN-34B는 유사 또는 더 나은 anti-nociceptive와 항염증 활성을 가진다.

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1) 2.2. Preparation of n-butanol fraction prepared from dried flowers of Lonicera japonica(금은화) and dried roots of Anemarrhena asphodeloides(지모)

     Dried flowers of Lonicera japonica and dried roots of Anemarrhena asphodeloides having common characterization of UPLC patterns purchased from various sources based on UPLC finger-printings of them are chosen. 2:1(w/w) mixture of the two medicinal herbs,100g of such chosen dried flowers of Lonicera japonica and 50g of such chosen dried roots of Anemarrhena asphodeloides were extracted with 1.35l of 50%(v/v) ethanol in water for 4h at 85 .C. After the extracted solution was filtered and evaporated in vacuo, there sulting concentrate was dissolved in 225ml of distilled water and partitioned with 195ml of n-butanol. The n-butanol layer was evaporated in vacuo and lyophilized for complete removal of the residual solvent to a yield brown powder of 11g, with a yield of 7%.The final resultant extract was called WIN-34B.

 - 조인스(Joins^TM)는 즉각적인 진통효과가 없어서 결함을 가진다.

 - 이 두 본초의 조합은 2:1(w/w)(금은화:지모) 구성으로 즉, WIN-34B이다.

 - 현재 연구는 Joins^TM, celecoxib 또는 인도메타신을 포함하는 항관절염약과 비교한 연구.

 4. Discussion

 - 이 결과는 WIN-34B이 유의한 진통효과를 제공하며, 이는 WIN-34B의 활성 화학 compound의 존재와 더불어 아라키돈산 대사물 합성의 억제 때문이라고 생각된다.

 - 위의 실험은 WIN-34B의 빠르고, 유의한 통증 완화를 시사하고 있다.

 - 카르기닌에 유도된 nociceptors(hypernociception)의 감작은 최소한 cAMP/PKA/Ca+ 또는 phospholipase/PKC/Ca+ 경로 자극을 포함하는 metabotropic event를 가진다고 알려져 있다. 그러므로 WIN-34B은 이러한 경로를 방해함으로 anti-nociception 효과를 가진다고 생각할 수 있다.

 - CFA는 NF-kB 경로로 염증과 nociception 효과! (WIN-34B는 이 경로를 방해하는 것 같다.)

 - 염증의 in vivo 모델에서 카르기닌-유도 발 부종은 natural products의 anti-edematous effect를 평가하기 위해 자주 이용된다. WIN-34B에 의한 카르기닌-유도 염증의 억제효과는 celecoxib와 유사하다(그림 6. p<0.001). 카르기닌에 의해 유도된 부종은 3기에 최대 volume에 도달하고, 프로스타글란딘의 존재와 느린반응의 다른 compounds로 특징지어진다. 이는 WIN-34B의 항-염증 기전이 위에서 언급한 프로스타글란딘 합성의 억제와 연관될 거라고 제안한다.

 - corton oil 유도 염증 반응은 neutrophil infiltration, 프로스타글란딘 생성 그리고 혈관 투과성의 증가로 특징된다. - 이를 WIN-34B이 억제했음. corton oil의 주활성은 AA release와 대사를 포함 또는 의존한다. 그러므로, 현재 연구의 결과는 WIN-34B이 lipoxygenase와 cyclooxygenase 억제제와 유사한 약리적 특성을 가질 것이라고 제안한다.

 - 항관절염 모델의 연구는 항-관절염제제보다 WIN-34B가 더 효과적일거라고 제안한다(급만성 염증성 통증완화와 염증 억제에 대한 celecoxib와 비교).

 WIN-34B의 자세한 항관절염 기전은 아래에 있다: it is known that chlorogenic acid, the primary ingredient in  Lonicera japonica Thunb, was shown to have anti-inflammatory effects. It has been reported that chlorogenic acid inhibited inflammation by suppressing LPS-induced COX-2expression‎ via attenuating the activation of NF-κB and JNK/AP-1 signaling pathways in Raw 264.7 cells in vitro. Chlorogenic acid inhibited carrageenan-induced paw edema and formalin-induced pain in rats in vivo. Mangiferin, which has strong anti-inflammatory properties, is a major active constituent of Anemarrhena asphodeloides BUNGE. It has been known that mangiferin inhibited LPS-induced nitric oxide and prostaglandin E2 through NF-κB inactivation in RAW 264.7 macrophages and rat microglial cells, which exhibits anti-inflammatory effect in vitro. Two components, loniceroside C and anemarsaponin B of Lonicera japonica Thunb (LJT) and Anemarrhena asphodeloides BUNGE (AAB) have shown their anti-inflammatory effects. However, it has been reported that the amounts of those two components in LJT and AAB are very small. Therefore, it is thought that WIN-34B may work as an anti-osteoarthritic agent by decreasing inflammation and pain through inhibition of leukotrien and prostagrandin productions by maincomponents such as chlorogenic acid and mangiferin, and unknown components.

 - WIN-34B는 골관절염에 흔히 사용되는 Joins^TM, 인도메타신, diclofenac과 celecoxib와 비교 시, 효능과 안전성에서 골관절염의 새로운 치료가 될 강한 잠재력을 보였다.