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검사방법 스크랩 LDH (Lactic Dehydrogenase : LD)
겨울사랑 추천 0 조회 394 13.07.18 18:25 댓글 0
게시글 본문내용

LDH

(Lactic Dehydrogenase : LD)

 

 1.“LDH (유산탈수소효소)”란?

  1)Pyridine nucleotide 존재하에서 Lactic acid와 Pyruvic acid의 가역적 이행반응을 촉매하는 산화, 환원효소

  2)LDH는 혐기적 해당계의 최종단계에서 관여하는 중요한 효소

    (생리적 조건에서는 Pyruvic acidLactic acid로의 방향이 짙다)

  3)동물의 전체 조직에 존재하는 편재성 효소

  4)심장 , 심근 , 간 , 골격근, 등에서 생성된다

  5)LDH는 2개의 Subunit인 심근형 (H형)과 골격근형 (M형)으로 되는 4량체이다

    (일반적으로 H형이 안정하고 M형이 활성을 잃기쉽다)

  6)혈청 LDH의 측정은 각종 질환 진단 때문에 보조 Data의 하나로서 및 여러 질환의 경과 관찰 또는

    예후 판정지표의 하나로 이용


2.LDH의 성질

  

 

정반응

(Lactic acid Pyruvic acid)

역반응

(Pyruvic acidLactic acid)

최적 pH

pH 8.8~9.8 (pH 9.5)

pH 7.4~7.8 (pH 6.0~8.5)

기질

Lactic acid

Pyruvic acid

보조효소

NAD

NADH

저해제

EDTA , Borate (Sodium boric acid) , Oxalate


3.정상치 : 200~450 Unit

  1)어린이는 성인보다 활성이 높다

  2)출생시에는 성인의 약 2배 , 14세부터 성인치를 보인다


4.임상적 의의

  

이상 증가 질환

악성종양

간 담도암 , 췌장암 , 대장암 , ... ... ... 등

심폐질환

급성 심근경색 , 울혈성 심부전 , 폐경색 , ... ... ... 등

혈액질환

악성빈혈 , 만성골수성 백혈병 , 용혈성 빈혈 , ... ... ... 등

간질환

급성 간염 초기 , 간경변 ,


5.LDH (= LD) 동질효소 (Isoenzyme) 분획에 포함된 주요성분과 전기영동상의 분류

   ; LDH 동질효소는 전기영동시 5분획으로 나누어지는데 어떤 분획이 증가하는가에 따라 어느 장기의 질환인지를 구분

    LDH는 2개의 Subunit인 심근형 (H형)과 골격근형 (M형)으로 되는 4량체이다

    일반적으로 H형이 안정하고 M형이 활성을 잃기쉽다

  

구    분

전기영동상의 분류 및 비율

전기영동시

Supporting Media

(지 지 체)

 

혈청 단백질과의

 비 교

+○                ┌─────────  Globulin  ─────────┐      ○-

 

 

Albumin

 

α1

 

α2

 

β

 

γ

 

 

 

 

 

LDH1

 

LDH2

 

LDH3

 

L

D

H4

 

LDH5

 

 

 

Dencitogram

 

LDH1

LDH2

LDH3

LDH4

LDH5

LDH 동질효소 분획

LDH1

LDH2

LDH3

LDH4

LDH5

Subunit의 구성

HHHH형

HHHM형

HHMM형

HMMM형

MMMM형

Protein과 비교

Albumin ~α1 위치

α1~α2 위치

α2~β 위치

β~γ 위치

 γ~○-극 쪽에 위치

정  상  치

21~33%

36~46%

23~32%

1~6%

0~5%

유 래 장 기

심장 , 적혈구

신장 , 적혈구

, 비장 , 갑상선

, 종양 , 태반

, 골격근

주 요 질 환

심근경색

용혈성 질환

용혈성 질환

 * 혈관내 용혈

 * 악성 빈혈

 * 용혈성 빈혈

심근경색

폐경색

전이암

급성간염

기    타

 

 

 

낮은 온도에서 불안정

/<SPAN

  ※LDH : Lactic Dehydrogenase (= LD)


6.측정시 주의사항

  1)실온에서 24시간 이내 , 냉장고에서 3일 이내

  2)동결보존의 경우 -20℃에서는 불안정하므로 -40℃ 이하로 할 필요가 있다 

  3)약간의 용혈에도 큰 영향을 받는다 (혈구 중의 LDH는 정상 혈청의 약 100배의 농도)

  4)전혈을 그대로 방치하면 실온에서도 냉소에서도 1시간에 10~25% 상승하므로 신속한 혈청분리가 필요하다

  5)심근경색의 경우 2주일 이내에 측정해야 의의가 있다


7.LDH 측정법

  1)Pyruvic acid를 기질로 사용하는 방법 (역반응 이용)

  

측정법

UV 법

비   색   법

Wroblewski-Ladue 법

Cabaud-Wroblewski

원리

                     LDH (Serum)

                    ↓

Pyruvic acid + NADH → Lactic acid + NAD

                     LDH (Serum)

                    ↓

Pyruvic acid + NADH → Lactic acid + NAD

 

남은 Pyruvic acid + 2,4 DNPH → Hydrazone

 

Hydrazone + NaOH Brown Color

기질액

Pyruvic acid

보조효소

NADH

반응물질

 

남은 Pyruvic acid

정색시약

 

2,4 DNPH (2,4 Dinitrophenyl Hydrazine)

반응정지시약

 

NaOH

측정물질

NADH의 감소량

Hydrazone

파장

340㎚

500㎚

Color

Colorless

Brown (적갈색)

pH

pH 7.4~7.8

정상치

100~600 Unit

50~400 Unit

단위

혈청 1㎖에 의해 NADH 흡광도가 25℃에서 매분 0.001씩 감소할 때를 1 Unit로 한다 (Wroblewski Unit)

비고

⑴IU/L = Wroblewski Unit × 0.48

?


  2)Lactic acid를 기질로 사용하는 방법 (정반응 이용)

  

측정법

UV 법

비   색   법

Wacker 법

Babson 법 (Tetrazolium 법)

King 법 (2,4 DNPH 법)

원리

                  LDH (Serum)

                  ↓

Lactic acid + NAD →

        Pyruvic acid + NADH

                  LDH (Serum)

                  ↓

Lactic acid + NAD →

        Pyruvic acid + NADH

 

                    PMS

                 ↓

NADH + TetrazoliumFormazan

                  LDH (Serum)

                  ↓

Lactic acid + NAD →

        Pyruvic acid + NADH

 

Pyruvic acid + 2,4 DNPH → Hydrazone

 

Hydrazone + NaOH Brown Color

기질액

Lactic acid

보조효소

NAD

반응물질

 

NADH

Pyruvic acid

정색시약

 

Tetrazolium , PMS

2,4 DNPH

반응정지시약

 

HCl

NaOH

측정물질

NADH의 증가량

Formazan

Hydrazone

파장

340㎚

570㎚

500㎚

Color

Colorless

Red

Brown

pH

pH 8.8~9.8

정상치

 

100~190 Unit

225±525 Unit

단위

혈청 1㎖에 의해 NADH 흡광도가 25℃에서 매분 0.001씩 증가할 때를 1 Unit로 한다 (Wacker Unit)

비고

⑴Wacker Unit × 3 = Wroblewski Unit

  ※PMS : Phenazine methosulfate   ※2,4 DNPH : 2,4 Dinitrophenyl Hydrazine 

 
 

출처 : 안산중앙병원 진단검사의학과

 
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