[◈임상화학◈] 임상화학 & 세균학 요점정리 ★

[영범이]

܆. 총론

1. 단위 (unit)

1)길이 : 1m = 100cm = 10⁶ㄍm = 10⁹nm = 10¹⁰Å

2)부피 : 1l = 10³ml = 10⁶ㄍl

3)무게 : 1kg = 10³gm = 106mg =109ㄍg = 1012Pg

2. 농도 (concentration)

1) %농도 : 용액 100ml 중 녹아있는 g수 또는 ml수

2) 몰(M)농도: 용액 1l 중에 녹아있는 용질의 g 분자량수

3) 몰랄(m)농도: 용매 1l중에 녹아있는 용질의 g 분자량수

4) 규정(N)농도: 용액 1l중에 녹아있는 용질의 g 당량수

5) 오스몰 용액: 용매 1l중에 losmole gram이 함유되어 있는 용액

6) 당량(Eqnivalents): 수소 1 혹은 염소 35.5 혹은 산소 8과 결합

또는 대치 할 수 있는 물질의 양

3. 표준물질

- 안정되고 일정한 조성을 가질 것

- 당량이 클 것

- 정확, 단순, 신속, 완성

1) 표준물질의 종류

① constant boiling HCL ② pot. bipthalate

③ oxalic acid ④ sod. tetraborate

⑤ tishydroxy methyl aminomethane ⑥ sod. carbonate anhydrous

⑦ sod. chloride ⑧ pot. iodute

4. PH 와 완충액

1) PH의 정의 : 수소이온 농도의 역수의 대수

2) PH의 공식 : PH = -log[H⁺] = log 1/[H⁺], PH + POH = 14

3) 완충액 정의 : 약산과 그의염, 또는 약염기와 그의염을 함께 용해하여 만든

용액

4) 완충액의 성질 : 소량의 산이나 염기를 넣거나, 희석 또는 농축하여도 PH가 변하지 않는다.

5. 지시약

1) 강산이나 약산을 강염기로 적정시 사용되는 지시약 : phenolphthalein

2) 강염기나 약염기를 강산으로 적정시 사용되는 지시약 : methyl orange

6. 초자기구

1)Volumetric Flask : 표준액 및 시약의 조제. 희석 정확성있는 초자기구.

2)Transfer Pipette : 정확한 량을 취하여 옮길 때.

3)Ostwald Pipette : 정성이 있는 혈청 또는 혈액 취할 때.

4)Separatory Flunnels : 단순 추출 과정, 용액층과 용매층 분리.

5)Polyethyrene bottle : 강 Alkali 보관.

6)T.D : 방출양, 흘러내린양

7)T.C : 수용량. 들어있는 양.

8)Burette : 적정할 때. 일정한 양을 많이 옮길 때.

7. 세척법

1)혼합 세척액 : 중크롬산카리를 농황산에 용해시켜 포화 용액으로 만든 것.

산화력이 강할 때 등갈색. 세척력이 감소될 때 녹색.

2)20%HNO3용액 : 수은 (Hg)제거.

3)6N HCl 용액 : 중금속 제거.

4)10% KOH용액 : 혈액응고를 제거.

8. 건조제의 종류

1)오산화인 : 가장강력한 건조제.

2)산화바륨, 황산동, 염화칼슘, 황산나트륨, 탄산칼슘, 산화 암모늄, 실리카겔,

과염소산 마그네슘, 산화칼슘, 수산화칼륨, 가성소다.

9. 용혈 (Hemolysis)

-물에 젖은 주사기 및 시험관, 무리한 흡인 및 거품이 원인.

1)측정가능성분 : Sodium Chloride

2)약간 용혈이면 측정가능성분 : Total Protein, Ammonia, Glucose, Phosphate,

Amylase, Lipase, TTT, ZTT, Bilirubin, BSP.

3)거의 측정 불가능 성분 : K, Mg, iron, Blood PH, Cholesterol, ACP, ALP,

GOT, GPT, LDH

10. 성분의 분포(농도)

-혈청에 비해 혈구내 농도가 높은 것 : ICO, LDH, ACP, K, GOT, GPT,

비당원성물질, NPN, Greatine등.

11.항응고제 영향

1)Calcium ion의 제거

2)Na, K, Ammonium salt의 오염

3)시료 PH 변화

4)혈구용적의 수축

12. 항응고제의 원리와 용도

1)Double oxalate : 불용성인 수산염 형성 Ca활성을 약화. CBC, ESR, 황달지수

2)EDTA - 2Na : 불용성인 착염형성 Ca활성을 약화, CBC, ESR, Ammonia.

3)Lithium oxalate : 수산염인 불용성을 형성 Ca활성을 약화,

Creatine, Uricacid.

4)Sod. Flouride : Ca 성분의 해리를 약화. 당의 보존제이기도 함.

5)Sod. Citrate : 혈액의 등장용액으로 Ca의 작용 약화. ESR, PTT.

6)Sod. Heparin : Thrombin 생성 억제, Gas analysis.

13. 가시광성의 범위 : 400 - 700 nm

용액에 의해 흡수된 파장	용액의 색	용액을 투과한 파장 (눈으로 볼 수 있는 색의 파장)
575-585	Violet	400-424
585-647	Blue	424-491
647-700	Green	491-575
400-424	Yellow	575-585
424-491	Orange	585-647
491-575	Red	647-700

14. 광도계의 기본구성

광도 → 분광부 → Cell → 수광부(검출부) → 눈금판

1)광원 : tungsten lamp, 수소방전관, 수은 lamp

2)분광부 : prism, 회절격자, 간섭필터, slit

15. Cell의 형식

1)표준 cubett의 직경 1cm

2)Washing - Alcohol, DW로 헹굼

3)glass cubette : 가시광선

석영 cubette : 가시광선, 자외선

16. 형광광도계 (Fluorescence Spectrophotometer)

- Vit 이나 호르몬 분석시 사용

광원(키세논 램프) → 여기필터 → Cell → 측정필터 → 수광기

17. 염광광도계 (Flame photometer)

- 금속이온 분석시, Li (내부표준물질)

무화기, 버너부 → 분광기 → 검출기 → 증폭기 → 지시기

18. 원자흡광 광도계 (Atomic Absorption Spectrophotometer)

광원부 (Hollow cathod) → 원자화부(시료) → 분광부 → 검출부 → 기록부

19. Gas chromatography

- 지방, 아미노산, 당류, 스테로이드, 카테콜라민, 독성물질.

20, 고속 액체 크로마토 그래피 (HPLC)

- 카테콜라민, 아미노산, 항경련제, 테오필린.

21. 투석 (Dilysis)

- 검체내물질이 막을 통해 빠져나옴, 단백은 투과 못함.

- 자동분석기 Protein 제거 (제단백)

CSF, Urine protein 농축 → 전기영동에 활용.

22. 저울의 종류

1) Trip Balance - 100mg

2) Törsion Balance - 10mg

3) Chemical Balance - 0.1mg

23. 주의사항

1)저울은 수평하고, 직사광선이나 열을 피해야 하며 진동을 피하고,

건조하게 해야 한다.

2)약포기 혹은 시계접시 천칭병 이용

3)무거운 것부터 가벼운 것 순서대로 올려놓는다.

4)분동은 우측, 물체는 좌측.

5)저울을 고정한 다음 조작해야하며, 문을 닫은 후 고정대를 풀어야함.

24. PH meter

유리전극 (glass electrode) - 수소이온농도측정 (H⁺를 선택적 투과)

비교전극 (reference electrode)

25. 전기영동(Electrophoresis)

1)활용

⸁Serum protein

⸂Isoenzyme - LDH, CK, ALP, GOT.

⸃Lipoprotein

⸄Hb_Alc

⸅glycoprotein

⸆핵산 - DNA, RNA.

PCR - TB, HV.

2)원리 - 분자량에 반비례하고, 대전도에는 비례한다.

즉, 영동도차에 의해 분리된다.

3)혈청단백

⸁등전점(PI) - PH 4.9

⸂acid - ㅳ charge

⸃alkali - ㅸ charge

⸄Albumin, ㄁₁, ㄁₂, ㄂, ㄃-globulindml 5개 분획으로 분리

4)영향인자

⸁대전도 (하전량) ⸂완충액의 PH

⸃이온강도 ⸄지지체의 특성

⸅전압 ⸆함유된 전해질의 성질

⸇전기적 삼투압 ⸈Wick flow

5)염색액의 종류

⸁Ponceau S ⸂Amido black 10B

⸃Brom phend blue ⸄Lissamine green

⸅Nigrosine ⸆Azocarmine

6)지지체의 종류

⸁Cellulose acetate membrane ⸂Agar gel

⸃Agarose gel ⸄Polyacrylamide gel

26. Blood gas Analyzer

1)원리

- PH, Pco₂, Po₂ 동시 측정

- Whole blood를 사용하며 항응고제는 heparin

- 신속하고 혐기적으로 분석

2)Blood PH 조절

- HCO^-₃, H₂CO₃에 의해 조절

27, 정도관리

1)정확도 (Accuracy)

- 진가에 접근정도

2)정밀도 (Precision)

- 반복측정시 얼마나 서로 접근해 있는가

3)특이도 (Speciticity)

- 분석 물질만 반응정도

4)감도 (Sensitivity)

- 어느정도까지 분석가능한가.

5)오차

⸁우연오차 (Random error) - 평균치 변함없고, 표준편차 증가 (정밀도 저하)

- 측정조건, 기술미숙 불결한 초자기구, 부정확 pipett

⸂계통오차(Systemic error) - 표준편차 변함없고, 평균치 변화 (정확도 저하)

- 측정방법의 변경, 표준액 변질, 시약변질, 측정기구불량,

검량선

6)표준편차의 계산

표준편차 (S.D) =			∑(X−ʪ)2
		n—1

X : 실측치, ʪ : 평균치, n : 검사건수

7)정규분포의 곡선에서 분포범위

⁑1SD : 68.3% ⁑2SD : 95.5% ⁑3SD : 99.7%

8)변동계수 (C.V)의 계산

CV =	표준편차	⁓ 100 =	변동폭	⁓ ½ ⁓ 100
	평균치		평균치

•CV⁑5% 이하일 때 정밀도가 좋다.

9)Ton's 허용범위

Ton's 허용범위 =	표준편차 ⁓ 0.25	⁓ 100
	평균치

10)정확도 관리

⸁검사법 검토 ⸂정확한 표준악 ⸃관리 혈청을 이용

11)정밀도 관리

⸁ 관리혈청을 이용하는 관리법

ⅰ) ʬ - 관리법

ⅱ) 쌍치법 (Twinplot법) : 계통오차와 우연오차 구별

ⅲ) 누화법 (Cusum법) : 자동분석기 관리

ⅳ) 변동계수법 (C.V법)

⸂ 임상성적을 이용하는 관리법

ⅰ) 반복측정법 (Repeat analysis법)

ⅱ) Number plus법

ⅲ) 정상자 평균치법

ⅳ) 검체 혼합법 (Mixed Sample법)

ⅴ) Cross check법

⸃ ʬ - 관리도의 판독

ⅰ) 탈선 (outlier)

⁑2SD를 경계선을 벗어난 상태, 용량의 부정확, 검체의 오염,

광도계의 변화

ⅱ) 요동 (unrest)

변동폭이 표준편차의 3배 이상의 진폭, 시약의 불안정, 기술미숙,

분석자의 빈번교대

ⅲ) 편재 (shift)

분석결과가 계속 6~7회 이상 중심선이 평균선을 벗어나 한쪽으로

치우쳐 나타남.

•Upward shift - 표준액 과다희석, 시약의 오염, 반응온도 상승,

반응시간연장

•Downward shift - 표준액의 농축, 반응온도의 저하, 반응시간단축,

시약의 농축

ⅳ) 경향 (trend)

분석결과가 6~7회 이상 계속적으로 상승하거나 하강하는 현상

•Upward trend - 표준화의 변화, 시약의 불안정, 파장 잘못선택,

광전지의 교체시기, 분주기이상

•Downward trend - 표준액의 농축

12)개별정도 관리 분류 - 동일환자의소견을 이용.

⸁Panic check - 이상치 check

⸂Logic check - 질병과의 관계를 서로 비교

⸃Delta check - 전에 분석한것과 비교

܆܆ . 정상치

1. Protein

Test	Normal value
Total protein	6.5~8.5 g/dl
Albumin	3.5~5.5 g/dl
Globulin	1.5~3.5 g/dl
A/G ration	1.5~2.5 : 1
CSF protein	15~45 mg/dl
Urine protein	25~75 mg/day

2. Cellulose acetate 막에서 정상치

분 획	분 획 비
Albumin	62~71%
㄁1 - globulin	2.8~4.1%
㄁2 - globulin	5.7~9.9%
㄂ - globulin	6.1~10.7%
㄃ - globulin	9.0~18.3%

3. NPN

Test	Nomal values	When increased
Total NPN	20~35 mg/dl	Nephritis
BUN(urea nitrogen)	7~17 mg/dl	Nephritis
Creatine	0.4~0.8 mg/dl	Muscle wasting
Creatinine	0.7~1.7 mg/dl	Nephritis
Uric acid	2~7 mg/dl	Gout, Arthrits, 백혈병
Ammonia	20~120 ㄍg/dl	Liver disease

4. Lipids

Test	Nomal values
Tatal lipids	400~700 mg/dl
Phospholipids	150~250 mg/dl
Total cholesterol	130~230 mg/dl
Free cholesterol	20~40 %
cholesterol ester	60~80 %
Triglycerides	50~200 mg/dl

5. Glucose

Test	Nomal values
Total glucose	65~95 mg/dl
신역치	100~180 mg/dl
CSF	45~65 mg/dl

6. Electrolytes

Test	Nomal values
Sodium (Na+)	135~145 mEq/l
Potassium (K+)	3.5~4.5 mEq/l
Calcium (Ca2+)	9~11 mg/dl
Magnesium (Mg2+)	1.6~2.9 mg/dl
Chloride (Cl-)	98~110 mEq/l
Iron serum (Fe2+)	60~170 ㄍg/dl
Total iron binding capacity	250~450 ㄍg/dl
Iron blood	40~60 mg/dl

7. Gas analysis

Test	Nomal values
PH	7.35~7.45
PCO2	35~45 mmHg
PO2	80~110 mmHg
HCO-3	21~25 mM/l
Total CO2	20~24 mM/l
O2 capacity	18~23 vol%
O2 content	17~22 vol%
O2 saturation	95~98 %

8. Enzyme

Test	Nomal values
Amylase	50~160 units
Lipase	0~1 unit, Teitz 0~1.5 units, cherry C.
ALP	0.8~2.3 Bessey unit 2~4 Bodansky unit 4~12 King - Armstrong unit
ACP	0.1~0.63 0.1~1.1 1~4
AST (GOT)	5~40 sigma unit
ALT (GPT)	5~35 sigma unit
Aldolase	4~20 unit/ml
Choline esterase	40~80 unit (Rappaport)
CPK	0~2 sigma unit/ml
Isocitric dehydrogenase	50~180 sigma units
Lactic dehydrogenase	200~500 units

ܨ. 각론

1. 제단백법 (PFF)

검 사 법	원 리	시 약	참 고
Folin - Wu	Na2WO4 + H2SO4 → H2WO4 + Na2SO4 2H+ + WO-4 + protein+	` 10g% Na2WO4 ` ⅔N H2SO4	음이온 침전제
TCA (Green wald법)		Trichloroacetic acid	` Ca, P 분석시
Perchloric acid (Neuberg)법		4/3M perchloric acid	` Mucoprotein 정량 효소 분석시
Metaphosphoric acid			` vitamin lactic acid
Somogy	ZnSO4 + Ba(OH)2 → Zn(OH)2 + BaSO4 2OH- + Zn2+ + protein-		` 양이온 침전제
Dialysis	투석막이용, 셀호판지	` CSF, Urine의 protein 농축 → EP
Heating		` Cholesterol 분석시
Miscible Solvent 이용법	Ether, Acetone 이용	` Cholesterol 분석시

2. 단백질 (Protein)

검 사 법	원 리	시 약
질소정량	단백질소정량 ⁓ 6.25	산화제 : 황산, 황산동 NaOH : 암모니아유리 붕산 : 적정시약 Methyl red : 지시약
Biuret	protein + Biuret 시약 → 청자색 540nm	Ruchell salt : 침전방지 NaOH : alkali CuSO4 : 반응물질 KI : 매염제 Sulfate - Sulfite 염색시약
Biuret, HABA 색소법	Albumin + HABA 시약 PH 6.2 → Red 480nm	Biuret 시약 HABA 시약 색소 : BCP, phenol, Methyl orange
Biuret, B.C.G 색소법	Albumin + B.C.G 시약 PH 4.2 → Green 630nm ` PH ↑ : Yellow ` PH ↓ : 짙은 Yellow	` Biuret 시약 ` B.C.G 시약 B.C.G buffer - succinate buffer - 30% Brij 35
Fibrinogen 정량	` EDTA plasma + calcium → fibrin + Biuret 반응 Tyrosine법 비탁법

3. 비단백 질소 (NPN)

검 사 명	원 리	시 약
Creatine	(Total creatinine - Preformed creatinine) ⁓ 1.16
Creatinine	A. Folin - Wu Creatinine + Alkaline picrate → Creatinine picrate 등정색 (Amber)	Folin - Wu 시약 picric acid ` NaOH
	B. Modified ` Lloyd's creatinine 침전물 (특이도 ↑) PH를 달리한 분석 PH 4~5 : 비특이적 물질만 반응 PH 12 : 모두반응 PH 12 - PH 4~5 = 특이물질	TCA ` Lloyd 시약 picric acid NaOH
Uric acid	A. Henry법 Uric acid + NaCO3 + phosphotungstate 환원 → tungsten blue 700nm	Folin - Wu 시약 Phosphotungstic acid Sodium carbonate : Alkali 역할
	B. Brown법 Uric acid + NaCN + phosphotungstate 환원 → phosphotungstite complex	Folin - Wu 시약 Phosphotungstic acid Sodium cyanide : 색도를 강하게
	C. Uricase법 uricase Uric acid + O2 +2H2O → Allantoin + CO2 + H2O2 catalase H2O2 + ethanol → Acetaldehyde + 2H2O ADH Acetaldehyde + NADH + H+→Ethanol + NAD+ 340nm
Urea nitrogen	A. Urease - Nessler법 Urea + H2O + Urease → Ammonia Ammonia + Nessler시약 → dimercuric ammonium iodide *Nessler reaction 등적색 470nm *Urea : UN = 2.14 : 1		` Hgl ` Kl ` NaOH ` Urease
	B. Penate hypochlorite법 ammonia+alkalihypochlorite+Phenol정색시약 → Indophenol blue 630nm *Berthelot reaction		` phenol 정색시약 (Sodium nitroprusside 촉매제) Alkali hypochlorite ` Urease
	C. Oxime법 (UUN 분석에 적당) Urea + Diacetylmonoxime + thiosemicarbazide 가열 → Yellow 520nm 산성 *Fearon reaction	` Free ammonia 없애는법:Permutit 시약

NPN	A. Kjeldahl - Nessler법 가열 N-compound + H2SO4 → NH+4 CuSO4 NH3 + Nessler 시약 → 등적색	` 산화제 : H2SO4 (CuSO4촉매제) Nessler 시약
	B. Pernate - hypochlorite법	산화제 동일 BUN과 동일
	C. Rappaport법
Ammonia	A. Conway법 (Conway diffusion cell) Ammonia 유리 : K2CO3 Ammonia 흡수 : Boric acid 흡수된 ammonia + indicator → 0.003NHCl로 적점	K2CO3 : 유리 Boric acid : 흡수 0.003N HCl : 적정 Indicator : Methyl red Methylene blue
	B. Seligson법 흡수된 ammonia + Nessler 시약 → 등적색	` K2CO3 ` Boric acid ` Nessler 시약
	C. 효소법 NH3 + ㄁-Ketoglutaric acid + NAD(P)H GLDH → L-glutamate + NAD(P) 흡광도 감소 측정

4. 지질 (Lipids)

검 사 명	원 리 & 시 약
Total lipids	A. Kunkel법 Total lipid + Phenol 시약 → 탁도 660nm
	B. Sulfophospho Vanillin법 가열 Total lipid + conc H2SO4 → Ketone Ketone + Vanillin + phosphoric acid → pink (적자색)
Cholesterol	A. Bloor법 (Total ch, ester ch) 추출 Serum + Alcohol ether (3:1) → 추출액 + Digitonine Cholesterol + H2SO4 + Acetic anhydride → 녹청색 620nm *Lieberman - Burchard reaction
	B. Zak - Henly법 (Total ch, Free ch) 추출 Serum + Acetone alcohol (1:1) → 추출액 + Digitonine Digitonide cholesterol (PPT) + FeCl3 + H2SO4 + glycial acetic acid → 적갈색 ⋅Digitonine : free cholesterol을 침전분리, ester형과 분리 *Kiliani reaction
	C. OPA법 (Total ch) Cholesterol + 초산−황산 + OPA (O-phthalaldehyde) → 적갈색
	D. Zurkowski법 Cholesterol + H2SO4 + Acetic anhydride + Sulfosalicylic acid → 녹청색 ⋅ Sulfosalicylic acid : 정색의 안정.
	E. Allainetal의 효소법 Cholesterol esterase를 이용 peroxidase H2O2 + 4-aminoantipyrine + phenol → Quinone 적색

HDL - cholesterol	Serum + 원침시약 → 원침 (LDL, VLDL 결합침전) HDL 발색반응 (LB, Kiliani) ⋅침전시약 dextran-Mg2+, phosphotungstate-Mg2+ heparin-Mn2+, heparin-Ca2+
Triglycerides	A. Van handel법 1. 추출(extraction)-혈청 + chloroform + 흡착제 → TG 2. 검화(Saponification)-TG + KOH → Glycerol 3. 산화(Oxidation)-Glycerol + NaIO4 → Formaldehyde 4. 발색−Formaldehyde + Chromotropic acid → pink
	B. Acetyl acetone법 1. 추출−혈청 + Isopropul alcohol + 흡착제 → TG 2. 검화(Saponification)-TG + KOH → Glycerol 3. 산화(Oxidation)-Glycerol + NaIO4 → Formaldehyde 4. 발색−Formaldehyde + Acetylacetone + NH3 → Yellow ⋅흡착제 ⸁Zeolite : 인지질 ⸂CuSO4 : 당 * Hantzch reaction
	C. Enzyme법 lipase TG → Glycerol + Free fatty acid ...
Phospholipids	TCA pff + Alcohol-ether + H2SO4, H2O2 → phosphorus 분리 phosphorus + molybdate + ANSA → Molybdene blue 660nm ⋅ANSA : 1,2,4 aminonaphthol sulfonic acid ∴phosphate ⁓ 25 = phospholipid
	⋅효소법 PL-D phospholipids → choline + 분해산물 choline oxidase choline → H2O2 + Betain POD H2O2 + phenol + 4-AAP → 적색

5. 혈당 (Glucose)

1)단당류 : Glucose, Fructose, galactose, Xylose, Mannose, Arabinose.

2)이당류 : Lactose, Maltose, Saccharose, Melibiose, Trehalose.

3)다당류 : Starch, Glycoge, Cellulose.

4)보존제 : Thymol - 당의 감소억제

NaF - 항응고제이며 당의 보존제

5)진단법 : Blood glycose

Urine sugar

GTT 당부하시험

Hb_Alc glycosylated Hb

Fructosamine

검 사 법	원 리 및 시 약
Folin - Wu	가열 Glucose + Alkaline copper 시약 → Cu2O Cu2O + phosphomolybdic acid → 청색 520nm ⋅환원당 측정. ⋅Benzoic acid 0.25% : 방부제
Somogyi - Nelson	가열 Glucose + Alkaline copper 시약 → Cu2O Cu2O + Arsenomolybdic acid → 청색 ⋅진당 (true glucose) ⋅Sodium sulfate : 제산화방지 ⋅disodium O-arsenate : 발색을 안정
Ortho - Toluidine	가열 Glucose + O-Toluidine 시약 + Acetic acid → 녹정색 630nm ⋅제단백 하지 않음
Hagedorn - Jensen	Fe 이용 환원력
Hexokinase	Hexouinase Glucose + ATP → ADP + Glucose-6-phosphate G-6-PDH Glucose-6-phosphate + NAD+ → 6-phosphogluconate + NADH + H+ ⋅340nm ⋅가장 특이적
Glucose oxidase	GO Glucose + O2 + H2O → Gluconic acid + H2O2 PO Diethylaniline + 4-AAP + H2O2 → 적색 Quinone ⋅550nm

6. 전해질 (Electrolytes)

검 사 명	원 리 및 시 약
Sodium과 Potassium	A. 비색법 Na : Uranyl Zinc Acetate법 (Yellow) K : Sodium cobaltinitrite법 (Blue)
	B. Flame photometer 기저상태 → 여기상태 → 기저상태 Na : 589nm Yellow K : 768nm Violet
	C. ISE (Ion selective electrode) Na : glass electrode K : valinomycine electrode
	D. Enzyme Na : ㄂-galactosidase K : pyruvate kinase

Chloride	A. Schales - Schales 산성 Cl- + Hg(NO3)2 → HgCl2 과량의 Hg++ + Diphenylcarbazone → violet ⋅Mercuric nitrate : 적정 ⋅완충액 PH 1.5 − 1.8 ⋅diphenylcarbazone : 지시약
	B. White Horn 산성 Cl- + AgNO3 → AgCl 과량의 Ag+ + Ferric alum + thiocyanate → Salmon red ⋅AgNO3 : 적정 ⋅Ferric alum : 지시약
	C. Cotlod - chloridometer 전량 적정법
	D. ISE AgCl Sendroy이용
	F. Colorimetry Hemilton법 : Hg(SCN)2, Fe++이용 효소법 : Amylase이용.
CO2 content	A. Van - slyke 및 Natelson gasometer 혈액 + lactic acid → gas 유리 (P1) 유리된 gas + NaOH → CO2 흡수 (P2) CO2량 = (P1 − P2) ⁓ Factor ⋅Caprylic alcohol : 거품생성방지
	B. ISE - 전극분석법
O2 content	혈액 + Saponin Ferricyanide → gas 유리 유리된 gas + NaOH → CO2 흡수 (P1) 잔여 gas + hydrosulite → O2 흡수 (P2) O2량 = (P1 − P2) ⁓ Factor
Calcium	A. Clark - Collip Ca++ + Amm. oxalate → Calcium Oxalate Ca-Oxalate + H2SO4 → Oxalic acid 70 - 80℃ Oxalic acid → 0.01N KMnO4 적정 (purple 1분 지속)
	B. EDTA법 Ca+++ Calsein + KOH(alkali)→EDTA로 적정(황록색)
	C. OCPC법 Alkali Ca++ + OCPC 시약 → purple ⋅OCPC는 Alkalic 토족금속 지시약이며 산성에는 무색, Alkali에서는 purple (PH 11)
	D. ISE
	E. 원자흡광 광도계
	F. Flame photometer

Inorganic phosphorus	A. Fiske & Subbarow법 TCA pff + molybdate → phosphomolybdate phosphomolybdate + 1,2,4 aminonaphthol sulfonic acid → blue
	B. Malachite Green법 산성 phosphorus + malachite green molybdate → malachite green 유리
	C. 제단백하지 않고 직접분석 혈청 + P-methylamino phenol sulfate : 황원제 acid molybdate : 발색 ethanol amine : protein 혼탁 침전억제 → blue ⋅환원시약 : P-Semidine, Ascorbic acid
	D. UV법 P + molybdate → phosphomolybdate 340nm
	E. 효소법
Magnesium	A. Titan yellow 혈청 + tungstic acid → 단백침전 Mg + titan yellow + NaOH → red 540nm ⋅Gum ghatti : 붉은색 안정
	B. 형광법 8-hydroxy guinoline sulfonic acid
	C. AAS : 285.2nm

Iron (혈청철)과 철 결합능	A. Ramsay법 Fe : 혈청 + Sod. sulfite → Fe++ 가열 Fe++ + ㄁ㅑ㄁−dipyridyl → 적색 TIBC : 혈청 + FeCl3 → 포화 Excess Fe + MgCO3→과량철제거 나머지 철정량법과 동일하게 반응.
	B. Peter법 (Bathophenanthroline법) Fe : 혈청 + HCl → Fe+++ 해리 Fe+++ + Hydrazine sulfate → Fe++ Fe++ + Bathophenanthroline → 적색 TIBC : 혈청 + Amm. Ferric sulfate → 포화 Excess Fe + Amberlite Resin → 과량철 제거 Fe+++ + Hydrazine sulfate → Fe++ Fe++ + Bathophenanthroline sulfonate → 적색

7. 효소 (Enzyme)

검 사 명	원 리 및 시 약
Lipase	A. Carry crandall법 lipase Olive oil substrate → fatty acid + glycerol PH 7.0 fatty acid + phenolphthalein → 0.05N NaOH로 적정,분홍색
	B. Tietz법 lipase Olive oil → fatty acid + glycerol PH 8.0 fatty acid + Thymolphthalein → 0.05N NaOH로 적정,청색
	C. 비탁법 lipase에 의해 Oilive oil의 혼탁도 감소.
Cholinesterose	A. 효소법 ch-E Benzoilcholine + H2 → choline + Benzoic acid Choline + cholineoxidase → H2O2 + Betain POD H2O2 + phenol + 4-AAP → 적색
	B. Rappaport법 ch-E Acetylcholine → choline + acetic acid Acetic acid + m-nitrophenol PH 7.8 → alkali로 적정 → yellow
Lactic Dehydrogenase (LDH)	A. LDH의 반응식 7.0~7.8 → Pyruvic acid + NADH LDH lactate + NAD ← 8.8~8.9
	B. Caband Wroblewski법 LDH Pyruvic acid + NADH → Lactic acid + NAD 남은 Pyruvate + DNPH → Hydrazone Hydrazone + NaOH → Brown
	C. 효소법 LDH Lactate + NAD → Pyruvate + NADH NADH + PMS → NAD + 환원형 PMS 환원형 PMS + INT → PMS + Formagan (적색) ⋅PMS : Phenagine metho sulfate ⋅INT : Idophenyl - nitrophenyl Tetragolium chloride
	D. Kinetic method PH 7.4, LDH Pyruvate + NADH → Lactate + NAD ⋅25℃에서 흡광도변화 매분 0.001 감소할 때 1unit

Alkaline & Acid phosphates (ALP, ACP)	A. Bodansky법 (생성된 P 분석) 가수분해 인산 ester → P + ester 물질 ALP, ACP ㄂-glycerophosphate → P + glycerol P + Amm. molybdate + 1,2,4 ANSA → blue ⋅TCA : 제단백, 반응정지시약 ⋅Alkaline substrate PH 8.6 ⋅Acid subtrate PH 4.8
	B. Bessey Lowry (ρ-nitrophenol 분석) ALP, ACP ρ-nitrophenylphosphate → ρ-notrophenol + P ρ-nitrophenol+NaOH(alkali)→yellow(quinoid형) +HCl(acid) → 무색(benjoid형) ⋅Alkaline substrate PH 10.5 ⋅Acid substrate PH 4.8
	C. Kind - King (phenol 분석) ALP, ACP Phenylphosphate → phenol + P Phenol + 4-Aminoantipyrine + ferricyanide → red ⋅Alkaline substrate PH 10.0 ⋅Acid substrate PH 4.9
	D. One step procedue ALP ρ-nitrophenylphosphate → ρ-nitrophenol + P
Amylase	A. Caraway (Amyloclastic method) amylase Starch substrate → Maltose + 잔류 starch (일정시간) PH 7.0 37℃ 잔류 starch + Iodine → blue 660nm ⋅blank : 증류수 ⋅생리식염수로 검체희석 (효소)
	B. Somogyi (Saccharogenic method) amylase Starch → Maltose (일정시간) PH 7.0 37℃ 가열 Maltose + Alkaline copper → Cu2O Cu2O + phosphomolbdate → 청색 ⋅NaCl : activator
	C. Amylase, Kinetic Method (Tietz법) amylase H2O + starch → Maltose ㄁-glucosidase H2O + Maltose → 2-glucose HK Glucose + ATP → Glucose-6-P +ADP 6-6-PDH G-6-P + NAD → 6-phosphogluconate + NADH2

Transaminase (GOT, AST 및 GPT, ALT)	A. Reitman Frankel법 Aspartic acid + ㄁-ketoglutaric acid GOT → oxalic acid + Glutamic acid Oxalacetic acid + DNPH → Hydrazone Hydrazone + NaOH → Brown (적갈색) 505nm ⋅Alanine + ㄁-ketoglutaric acid GPT → pyruvic acid + Glutamic acid ⋅pyruvic acid + DNPH → Hydrazone ⋅Hydragone + NaOH→Brown (acid에서 yellow) ⋅DNPH : 2,4-dinitrophenylhydrazine : 발색시약이며 정지시약 ⋅Osagone 반응
	B. Karmen법 ⋅GOT 반응동일 MDH Oxalacetic acid + NADH→Malic acid + NAD ⋅GPT 반응동일 LDH Pyruvic acid + NADH → Lactic acid + NAD *karmen unit 정의 : 혈청 1ml 가 25℃에서 1분간에 340nm에서 흡광도가 0.001 감소할 때 1unit
	C. 효소법 Glutamic acid + NAD GLDH → NADH + ㄁-ketoglutamic acid Diaphorase NADH + NTB → NAD + Formagan (청색) ⋅NTB : Nitrotetragolium blue ⋅⸁활성도가 높을때는 인산완충액에서 검체를 희석 ⸂Hemolysis AST, ALT 상승 ⸃Karmen unit ⁓ 0.48 = IU
Creatine phosphokinase (CPK)	A. CPK의 반응식 PH 9.0 → Creatine + ATP CPK Creatine phosphate + ADP ← PH 7.4
	B. Rosalki 변법 (효소법) CPK Creatine phosphate + APP → creatine + ATP HK ATP + Glucose → G-6-P + ADP G-6-PDH G-6-P + NADP → 6-Phosphogluconic acid + NADPH Diaphorase NADPH + NTB → NADP + Formagan (청색)
	C. Sigma법 CPK Phosphocreatine + ADP → creatine + ATP Creatine + ㄁-Naphthol + Diacetyl→color 520nm

※ 효소의 분류

1)산화 환원 효소 : LDH, GOD, MDH, POD, Uricase.

2)전이 효소 : GOT, GPT, OCT, CPK.

3)가수분해 효소 : Amylase, Lipase, ALP, ACP, Ech, Urease,

Arginase, Pepsin.

4)제거 효소 : Aldolase, Pyruvate decarboxylase.

5)이성화 효소 : Phosphohexose isomerase

6)합성 효소 : Acetyl - CoA - Synthetase

1. staphylococcus

1. 균의 분리 배양

1) 검체 - 농, 수포내용액, 관절액, 골수천자액, 객담, 혈액, 변, 구토물 등.

2) 배지

(1)비선택 배지-BAP : 흰색 ~ 황색, 2~3mm, 불투명, 평활,

버터같은 돌출의 집락, ㄂ 용혈 (S.aureus)

-NAP

-TSA

-TSB or BHI (호기성)

-Thioglycollate broth. (혐기성)

(2) 선택 배지 -Mannitol salt agar (MSA) : 7.5% NaCl, phenol red

mannitol 분해시 황색 (S.aureus)

-Staphylococcus 110 agar : 7.5% NaCl, Gelatin 액화능시험

mannitol

-Tellurite agar : pot tellurite 환원시 검은색 (S.aureus)

-PEA 혈액한천 (phenylethylalcohol blood agar)배지

: 그람양성 구균만 선택적 증식, 장내세균억제

2. 동정시험

1)catalase 시험

(1) 원리 : 2H₂O₂ + 세균(catalase) → 2H₂O + O₂ (거품)

(2) 시약 : 3% Hydrogen peroxidase (H₂O₂)

(3) 정도관리 -양성 : Staphylococcus

-음성 : Streptococcus

(4) 주의 -농(Pus)에서 위양성

-혈액이 섞이지 않도록.

2) 혈장응고 효소 (coagulase) 시험.

(1) 원리 : 혈장(plasma) + 세균(bound or free coagulase) → 세균응집

(2) 정도관리 -양성 : S.aureus

-음성 : S.epidermidis (CNS)

*병원성 ⁢, 비병원성 ⁣ 구별

3) Protein A : coagulase 와 비슷

4) DNase 시험

(1) 원리 : DNA + 세균(DNase) → nucleate salt + 1N HCl → 투명

(2) 정도관리 -양성 : S.aureus

-음성 : S.epidermidis

5) Novobiocin 감수성시험

(1) 원리 : S.saprophyticus는 novobiocin(5․ㄍg disk)에 내성

CNS는 감수성

6) 포도당 산화 - 발효시험.

광유덮은	광유 안덮은	대 사	세 균
⁢황	⁢황	발효	S.aureus, 장내세균
⁣녹	⁢황	산화	Micrococcus
⁣녹	⁣청	비산화	A.faecalis

7) S.aureus의 중요성상

⸁catalase +

⸂coagulase +

⸃DNase +

⸄Mannitold에서 산생성 +

2. Streptococcus 와 Enterococcus

1. 검체 : Throat swab, Pus, urine, CSF, Wound

2. 형태 및 염색성

1) Streptococci 와 Enterococci : Gram-positive cocci in chain

2) S.pneumoniae : Gram-positive lancet-shaped diplococci

3. 배양

1) 영양 요구도가 높아서 단순배지 (NAP) 발육하지 않거나 빈약.

2) 배지 증균배지 : Todd-Hewitt broth

비선택배지 : BAP

선택배지 : CNA(Colistin nalidixic acid) 와 PEBA 등.

3) 접종 : 백금이로 찔러서 배양하면 SLO 생성균주는 용혈을 촉진.

5~10% CO₂

4. 동정시험

1) S.pyogenes (GAS)

(1) 집락의 특성 - ㄂ 용혈

(2) Bacitracin 감수성시험 - 0.02~0.04 U disk (Taxo A)에서 억제대가

조금이라도 생기면 감수성

(3) Lancefield serological grouping test (확인동정)

-group A antiserum ⁢

(4) Disk test - 성홍열에 면역이 되었는지 알아보는 시험.

2) S.agalactiae (GBS)

(1) 집락의 특성 - 좁은 ㄂ 용혈.

(2) Hippurate 가수분해시험.

ⅰ) 원리 : Hippuric acid + 세균(hippuricase) → Benzoic acid + Glycine.

(3) CAMP 시험

ⅰ) 원리 : CAMP 인자 + 포도구균의 ㄂-lysin → 화살촉 모양의 용혈대.

(4) Lancefield serological grouping test

3) D군 연쇄구균과 Enterococcus

(1)집락의 특성 - ㄁, ㄂, ㄃ 용혈, 습윤.

(2)동정시험

시험	Enterococcus	Group D streptococci
Bile esculin	⁢	⁢
6.5% NaCl 내성	⁢	⁣
SF broth (Sod. azide)	⁢	⁣
Pot. tellurite 환원	⁢	⁣
Mannitol 분해	⁢	⁣
ADH	⁢	⁣

(3) 혈청군 시험

4) S.pneumoniae 와 Viridans streptococci

(1) 집락의 특성 - 모두 ㄁ 용혈

S.pneumoniae - Small : 볼록 → Plate → 오목

Large : 크고 점 조성

(2)	시험	S.pneumoniae	Viridans streptococci
	자가용해 집락	⁢	⁣
	Optochin(EHC)감수성	⁢	⁣
	담즙 용해	⁢	⁣
	혐막 팽화(quelling)	⁢	⁣
	Inulin 분해	⁢	⁣

(3) Optochin 감수성 시험

- 6mm 디스크 ~14mm 이상 억제대 양성.

-10mm 디스크 ~16mm 이상 억제대 양성.

(4) Bile 용해시험

ⅰ) 원리 : Bile + S.pneumoniae → 용해

(5) Mouse vimlence 시험 : S.pneumoniae ⁢

(6) 협막팽화 시험

-폐렴구균의 항원형 결정.

-S.pneumonia type Ⅲ antiserum + S.pneumonia + methylene blue

→ 3~5분후 1000X

3. Neisseria 와 Moraxella

1. 직접검사.

-Gram-negative kidney bea-shaped diplococci

-Report Intrasellular(extracellular) gram ㅸ diplococci

4+ > 30 ⋅pus cell ~

3+ 6 ~ 30 ⋅epithelial cell ~

2+ 1 ~ 5 ⋅GNID ~

1+ < 1

2. 배양

-3~7% CO₂, 35℃ (검체 냉장보관 ⁓)

3. 배지

1) Chocolate agar : GC agar base + Hb powder + 성장촉진(iso-vitalex)

2) Thayer - Martin medium : Chocolate agar + VCN or VCNT

* Vancomycin : inhibit gram-positive cocci

* Colistin : inhibit gram-negative rod

* Nystatin : inhibit yeast fungi

* Trimethoprim lactate : reduce growth and

swarming of proteus spp.

3) Modified Thayer-Martin : TM + 1% agar + 0.15% dextrose

4) ML, NYC

4. 동정시험

시험	N.gonorrhoeae	N.meningitidis
Gram stain	G ㅸ diplococci	G ㅸ diplococci
MTM에서 증식	Growth	Growth
Oxidase	⁢	⁢
Catalase	⁢	⁢
Glucose발효(CTA)	⁢	⁢
Maltose발효	⁣	⁢
병원성	임질	수막염
검체	요도분비물, 자궁경내분비물	CSF

1) Oxidase

(1) 시약

ⅰ) Tetramethyl-ρ-phenylenediamine dihydrochloride - 청색(+)

ⅱ) Dimethyl-ρ-phenylenediamine dihydrochloride - 분홍 → 검은색(+)

2) 항균제 감수성 시험

(1)PPNG (Penicillinase producing, N.gonorrhoeae)

(2) ㄂-lactamase 시험

⋅디스크법 Nitrocefin(BBL) 황 → 적 (+)

⋅㄂-lactamase 생성균 : N.gonorrhoeae

H.influenzae

Moraxella

Brannameliv

3) M.catarrhalis

- 객담, glucose에서 산생성 ㅸ, oxidase ㅳ, DNase ㅳ.

4. Aerobic gram-positive bacilli

1. Corynebacterium diphtheriae.

1) 직접검사 - Gram stain : Gram ㅳ plaomorphic rod

- Albert stain : metachromatic granule

(Loeffler serum 배지) 이염소체 (Toluidine blue, Malachite green)

2) 배지 -BAP : 1~3mm, ㄂ 용혈.

-Loeffler's serum medium

-CTBA 선택배지 (Cystine tellurite blood agar) : 검은색 집락.

-Tinsdal agar : 검정집락 주변에 갈색 달무리.

3) 동정시험

(1) Catalase : ⁢

(2) Nitrate reduction : ⁢

(3) Urease : ⁣

(4) Glucose, maltose, sucrose : ⁢, ⁢, ⁣

4) Toxigenicity시험.

(1) 동물시험 - guinea pig

(2) 시험관법 - Elek gel diffusion법.

- 세균과 항혈청(항독소) 여과지 사이에

45⁗각도로 침강선이 생기면 양성.

5) Schick test

-성홍열에 면역이 되었는지 알아보는 시험.

-면역이 되었으면 음성.

2. Listeria monocytogenes

1) 직접검사 - Gram positive short rod

2) 배지 - BAP : 좁은 ㄂ 용혈, 반투명.

- 선택배지 : LPM agar

PLCAM agar

3) 동정시험

(1) Catalase : ⁢

(2) Motility : 25℃ ⁢

37℃ ⁣

tumbling motility (구르는 모습)

(3) Bile esculin : ⁢

(4) MR/VP test : ⁢.⁢

(5) H₂S : ⁣

(6) 4℃ 증식 : ⁢

(7) Glucose, Mannitol, Salicin : ⁢.⁣.⁣

(8) CAMP test : ⁢

3. Erysipelothrix

-Gram positive rod, Nonmoile

⸁ Catalase : ⁣

⸂ H₂S : ⁢

⸃ Esculin : ⁣

⸄ Glucose, Mannitol, Salicin : ⁢.⁣.⁣

4. Lactobacillus

5. Bacillus

시험	B.anthraeis	B.subtilis	B.cereus
병명	탄저병	고초균	식중독
병원성	⁢	⁣	⁣
Capsule	⁢(Vivo)	⁣	⁣
r-phage	용해	비용해	비용해
Spore	중앙재	중앙재	중앙재
Motility	⁣	⁢	⁢

5. Nocardia 와 Nocardiform 세균

1. Gram-positive rod-shaped, aerial hyphae

2. 감염 - 토양의 상재균, 페감염.

3. 직접검사

1) Wet mount (습표본) : 분지된 사상형 검사.

2) Gram stain : Gram-positive branching filament to cocci

3) Acid fast stain : N.asteroides, N.brasiliensis, N.caviae

4. 배양.

1) 호기성

2) Media -SDA(sabouraud dextrose agar) PH 5.6, 25~30℃, 37℃, 45℃

-Thioglycollate broth (Nocardia, Actinomyces)

-2주까지 배양

6. Mycobacterium

1. 개요 및 분류

1) 항산성균

-세포벽에 lipid가 많기 때문에 보통 염색으로 쉽게 안되며 일단

염색이 되면 acid나 alkali에 탈색되지 않는 항산성 성질의 간균을

acid-fast bacilli

2) 형태 및 염색성

- Slightly curred or straightrods

- Gram-positive.

3) 분류.

(1) NonRunyon group

결핵균군 : M.tuberculosis (인형결핵균), M.bovis (우형결핵균)

배양불능균 : M.leprae (나균)

(2) Runyon group

ⅰ) Photochromogen. 광발색균 : 광선에 노출시키면 노란색소 생성

예) M.kansasii, M.marinum, M.simiae

ⅱ) Scotochromogens, 암발색균 : 어두운 곳에 배양해도 노란색소 생성.

예) M.scrofuraceum

ⅲ) Nonchromogen 비발색균 : 색소생성 ⁓

예) M.avium complex (M.avium, M.intracellulae) 약제내성균주 多

ⅳ) Rapid grower, 신속발육균 : 1주일 이내 자람.

예) M.fortunitum

2. 검체

-객담, 요, 척수액, 간, 골수 등.

3. 도말표본의 검사와 AFB염색.

1)직접도말

2)농축도말

3)Acid-fast stains (상피세포 10 ↓, 백혈구 25 ↑)

(1) Carbolfuchsin : basic fuchsin + phenol

⸁ Ziehl - Noelsen (hot stain) : Carbolfuchsin, Acid-alcohol, Methylene blue

⸂ Kinyoun (cold stain)

(2) Fluorochrom stain

: auramine O, fluorochrome. 250~400X

(3) Reporting

1 to 2 in entire smear 다시 다른 검체

3 to 9 per slide Rare(+)

10 to more per slide Few(++)

<100X> 1 or more per oil immersion field Numerous(+++)

4. 배양

1) 검체의 오염제거와 농축

(1) 4% NaOH : 오염제거와 점액의 균질화.

(2) n-Acetyl-L-cysteine (NALC)+NaOH

-NALC : 담의 점액녹임.

-2% NaOH : 오염제거

(3) 5% oxalic acid

(4) Trisod, phosphate 13% 등등.....

2) 원심분리 : 3000rpm

3) 배지

(1) 액체배지 : Dubos Tween-albumin broth (TAB)

(2) 한천배지 (감수성시험) : Middlebrook 7H10 agar

: Middlebrook 7H11 agar

(3) 계란배지 -Loewenstein-Jensen배지

-Petragnani 배지. 심히 오염된 검체

-1% ogawa 배지. NaOH 처리 검체를 중화(2N HCl)

-3% ogawa 배지. NaOH 처리 검체를 중화하지않고 접종, 응고멸균

(4) 선택배지 -Loewenstein-Jensen 배지 : Gruft 배지

4) 배양조건

(1) M.tuberculosis : 37℃

(2) 배양기간 : 4~8주. 매주 1회씩 관찰하고 집락이 생기면 항산성 세균 확인.

5. 동정

1) 지적 증식온도와 속도.

2) 색소생성.

*M.tuberculosis : 담황색이지만 색소는 아님.

3) Niacin 시험.

(1) Niacin 양성 : M.tuberculosis, M.simiae <노란색>

Aniline + cyanogen bromide + Niacin

4) 질산염환원.

- M.tuberculosis ⁢

5) Catalase 시험.

- M.tuberculosis ⁢

6) T₂H 의 증식억제.

- M.tuberculosis 증식.

6. Tuberculin 반응 및 면역.

1) Koch의 old tuberculin 반응

2) Seibert의 PPD (purified protein derivative) 반응.

: 지연형 allergy 반응, 균체 단백성분 이용. 10mm↑ 이면 ⁢

3) BCG (Bacillus of Calmette and Gueriu)

: 약독화 생균이용, 인공능동면역, M.bovis 이용.

4) Mantoux (가장 정확한 피내 주사법)

10mm 이상 ⁢

7. 나균 (M.leprae or Hansen's bacillus)

-나병 원인균, 인공배양이 되지 않는다.

-lepromin 반응 양성시 예후가 좋다.

7. Enterobacteriaceae

1. 일반 특성.

1) Gram-negative straight rods.

2) 통성혐기성

3) Macconkey's media에서 잘 자람.

4) Glucose를 분해 산 생성.

5) Nitrate 환원.

6) Oxidase 음성.

7) 병원성 : Salmonella, Shigella, Yersinia 등.

8) 비운동성 : Shigella, Klebsiella.

2. 배양.

1) 검체 - 변, 토물.

2) 수송배지 - Cary-Blair, Stuart, Amies 10ml + 변1g

3) 변이외 검체 - 호흡기, 창상 등.

4) 배지 - 선택배지

배지	억제물질	기질	지시약	반응
Macconkey agar	Crystal violet Bile salt	Lactose	Neutral red	*적색 : lactose 분해 *무색 : lactose 비분해
EMB agar	Eosin Y Methylene blue	Lactose	Eosin Y Methylene blue	*진한청색 : lactose 분해 *투명 : lactose 비분해 *E.coli : 금속성광택.
SS agar	Bile salt Brilliant green	Lactose Sod. thiosulfate	Neutral red Ferric citrate	*적색 : lactose 분해 *무색 : lactose 비분해 *검은색 : H2S 생성
XLD agar	Sod. dexycholate	Xylose Sucrose Lactose	Phenol red	*황색 : 산 생성 *무색 : 산 생성 無
		Lysin	Phenol red	*적색 : laysin 탈탄산
		Sod. thiosulfate	Ferric ammonium citrate	*검은색 : H2S 생성
BS agar	Bismuth sulfite Brilliant green	Glucose	Bismuth sulfite	*검은색 : 산생성
HE agar	Bilt salt	Lactose sucrose salicin	Acid fuchsin Thylmolblue	*분홍색 : 산생성 *청록색 : 산생성 無 *진놀 : 산생성 無
		Sod. thiosulfate	Ferric ammonium citrate	*검은색 : H2S 생성

5) 기타배지

(1)TSI 와 KIA - 당분해, Gas생성, H₂S 생성

배지	Lactose 1%	Sucrose 1%	Dextrose 0.1%
KIA	⁢	⁣	⁢
TSI	⁢	⁢	⁢

(2) MIO - 운동성, indole, ODC

(3) SIM - H₂S 생성, indole, 운동성.

(4) Muller-Hinton - 감수성 검사배지, Neisseria 증균.

3. 생화학적 시험.

1) 탄수화물 발효시험.

⸁ 원리 : phenol red broth base PH 7.4

purple broth base PH 6.8

cystine tryptic agar base PH 7.3

Sugar + 세균 → acid + 지시약 → color

2) ONPG (㄂-galactosidase) 시험.

⸁ 원리 : 세균(㄂-galactosidase)+ONPG(무색)

→Galactose+O-nitrophenol(황색)

⸂ 목적 : lactose를 천천히 분해하는 균을 신속하게 감별하기 위해.

3) IMvic 반응.

(1) Indol 시험.

⸁ 원리 : *Tryptophan + 세균(tryptophanase)

<탈아미노화반응>

→ Indole + pyrubic acid + Ammonia

<가수분해반응>

*Kobac 시약 + Indole → 적색(⁢)

⸂ 목적 : P.mirabilis (⁣) 와 P.vulgaris (⁢) 감별.

⸃ tryptophan이 많이든 peptone을 써서 만든 배지 이용. (SIM, MIO)

(2) Methyl red test

⸁ 원리 : Gluxose + 세균 → Mixed acid (PH 4.4 이하)

Mixed acid + Methyl red 지시약 → 적색 (⁢)

⸂ 재료 : MR-VP broth (Glucose, Phosphate buffer)

(3) Voges-Proskauer 시험.

⸁ 원리 : Glucose + 세균 → Acetoin

Acetoin + 40% KOH + O₂ → Diacethyl

Diacethyl + ㄁-naphthol or creatine (촉매제) → 적색 (⁢)

⸂ 재료 : MR-VP broth

(4) Citrate 시험.

⸁ 원리 : 질소원, 탄소원, 이용 + 세균 → 알카리 + BTB 시약 → 청색

⸂ 재료 : Simmons citrate agar PH 6.8

4) 요소분해 효소 (urease) 시험

⸁ 원리 : urea +2H₂O + 세균 (urease) → Ammonia

Ammonia + Phenol red 지시약 → 적색 (⁢)

⸂ 목적 : ⋅Klebsiella pneumoniae (⁢), E.coli (⁣)

⋅Proteus (⁢), Morganella (⁢), Y.enterobacter (⁢).

5) 탈탄산 분해 효소 (decarboxylase) 시험.

⸁ 원리 Amino acid + LDC, ODC, ADH → Amino + CO₂

<혐기적 환경>

⸂ 3가지 amino acid 반응.

ⅰ) Lysine + LDC → Cadaverine + CO₂

ⅱ) Ornithine + ODC → Putrescine + CO₂

ⅲ) Arginine + ADH → Citrulline + NH₂

⸃ 목적

ⅰ) LDC - Salmonella (usually ⁢), shigella(⁣), C.freundii(⁣)

ⅱ) ODC - Enterobacter (usually ⁢), Klebsiella (⁣)

Salmonella SPP (⁢), S.typhi (⁣)

P.mirabilis (⁢), P.vulgaris (⁣)

M.morganii (⁢), P.rettgeri (⁣)

C.freundii (⁣), Salmonella (⁢)

ⅲ) ADH - E.cloacae (⁢), Enterobacter SPP (usually ⁣)

⸄ 재료.

ⅰ) MIO - 시험관 밑이 자색(⁢)

ⅱ) LIA (lysine iron agar) - H₂S, LDC, lysine deaminase 시험.

⋅자색/노란색 - K/A (LDC ⁣) ⋅자/자 - K/K (LDC ⁢)

⋅적/노 - Red/A (LDA ⁢)

ⅲ) Lysine broth, Ornithine broth, Arginine broth

6) Phenylalanine deaminase (PAD) 시험.

⸁ 원리

Phenylalanine + 세균 (phenylalanine deaminase) + O₂

→ Phenylpyruvic acid (PPA) + ammonia

Phenylpyruvic acid + FeCl₃ → 녹색 (⁢)

⸂ 목적 - Proteeae 균족 즉 Morganella, Proteus 및 Providencia (⁢)

Enterobacteriaceae (⁣)

7) 황화수소 (H₂S) 생성.

⸁ 원리 ⅰ) Sod.thiosulfate + 세균 → H₂S ↑(무색)

H₂S + ferric ions → ferrous sulfide ↓(검은색)

ⅱ) Cystein, cystine, methionine, peptone + 세균 → H₂S ↑(무색)

H₂S + ferric ions → ferrous sulfide ↓(검은색)

ⅲ) Lead acetate + H₂S → pbs ↓(검은색)

⸂ 목적 - P.mirabilis, P.vulgaris (⁢), M.morganii (⁣)

Salmonella (usually ⁢)

⸃ 재료-BS (가장예민), DCA, LIA, KIA, TSI, LAA, SS, SIM, XLD, HE 배지

8) Motility 시험.

⸁ 원리 - Hanging drop method

Semisolid stabmethod (0.2~0.5% agar)

Flagella stain

⸂ 목적

35℃ 배양 - Enterobacter (⁢), Klebsiella (⁣)

- S.pullorum (⁣), S.gallinarum (⁣), Salmonella (⁢)

22℃ 실온배양 - L.monocytogenes (⁢), Corynebacterium SPP (⁣)

- Y.pseudotuberculosis (⁢), Y.enterocolitica (⁢), Y.pestis (⁣)

⸃ 재료 - Motility test 배지 0.4% agar

- SIM 배지

- MIO 배지

9) Gelatin 가수분해 시험.

⸁ 원리 - Gelatin + 세균 (gelatinase) → liquefy

4. 균종별 특성.

1) Salmonella

(1) 검체에 따른 양성률

ⅰ) 발병 첫주 : 혈액배양

ⅱ) 발병 2주 : 요

ⅲ) 발병 3주 : 변

ⅳ) 2주부터 혈청중 응집항체가 상승.

(2) S.typhi의 항원 3가지

ⅰ) O 항원 (균체)

ⅱ) H 항원 (편모)

ⅲ) Vi 항원 (협막)

(3) 형태 및 염색성

ⅰ) Gram-negative rod

ⅱ) Motile flagella

(4) 배지

ⅰ) 증균배지 - selenite F broth

- GN broth (4~h안에 S.S 4 H.E 에 subculture)

- Tetrathionate broth (12~24h 안에 S.S 4 B.S)

ⅱ) 선택배지 - Macconkey agar

- EMB -DCA, Endo agar

ⅲ) 고농도 선택배지 - S.S agar - H.E agar

- XLD agar - B.S agar

(5) Biochemical test

	S.typhi	S.paratyphi-A	S.paratyphi-B
KIA	K/A H2S	K/A G	K/A G H2S
MIO	⁢/⁣/⁣	⁢/⁣/⁢	⁢/⁣/⁢
urea agar	⁣	⁣	⁣
LIA	K/K	K/A G	K/K H2S
IMvic	⁣⁢⁣⁣	⁣⁢⁣⁣	⁣⁢ ⁣⁢

(6) 슬라이드 응집시험 (항혈청 시험)

ⅰ) O-antisera - 다가 항혈청 응집후 A-E O항혈청 시험.

ⅱ) H-antisera

ⅲ) Vi-antisera

(7) Widal test

ⅰ) O항체가 증가 : 활동성 감염

ⅱ) H항체가 증가 : 회복기. 과거 예방주사

ⅲ) Vi항체가 증가 : 보균자

2) Shigella

- Gram-negative rod, 균혈증이 드물다. 무편모

(1) Shigella의 생화학 및 혈청학적 동정.

시험	S.dysenteriae	S.flexneri	S.boydii	S.sonnei
Mannitol 발효	⁣	⁢	⁢	⁢
ONPG	V (40%)	⁣	V (10%)	⁢
ODC	⁣	⁣	⁣	⁢
KIA	K/A	K/A	K/A	K/A
Urease	⁣	⁣	⁣	⁣
LIA	K/A	K/A	K/A	K/A
Serogroup	A	B	C	D
IMvic	for ⁣/⁢⁣⁣			⁣⁢⁣⁣

3) Klebsiella

시험	Klebsiella	Enterobacter	Hafnia	Serratia
Motility	⁣	⁢	⁢	⁢
ODC	⁣	⁢	⁢	⁢
DNase	⁣	⁣	⁣	⁢
Lipase(Tween80)	⁣	⁣	⁣	⁢
LIA	K/K	K/K, K/A G		K/K
Urea agar	Weak pos	⁣		⁣
KIA	A/A G	A/A G	A/A G	K/AorK/A G
TSI	A/A G	A/A G	A/A G	A/AorA/A G
IMvic	⁣⁣⁢⁢	⁣⁣⁢⁢	⁣⁣⁢⁣	⁣⁣⁢⁢

4) Genus Enterobacter

시험	E.aerogenes	E.cloacae	E.agglomerans
LDC	⁢	⁣	⁣
ODC	⁢	⁢	⁣

5) Genus Proteus

(1) plate media - BAP 무색

- Mac 무색

- peptone-glycerol agar 3일후 적색색소.

6) Genus Escherichia

(1) Biochemical test

⋅KIA : A/A G

⋅MIO : ⁢⁢⁢

⋅urea agar : ⁣

⋅LIA : K/K

⋅IMvic : ⁢⁢⁣⁣

⋅Mac : Red colony

7) Genus Proteus

(1) plate media - BAP-유주현상

- Mac-무색.

*유주현상 억제

⸁ 4~7% agar ⸅ salt free

⸂ Bile agar ⸆ Sod.azide 1/5,000~100,000

⸃ 0.1% chloral hydrate ⸇ Boric acid 0.1%

⸄ Phenylethylalcohol (PEA) ⸈ ρ-nitrophenyl glycerol 0.2m mol

(2) 탈아미노화 반응.

⋅PPA 반응 : 녹색 (⁢)

⋅IPA 반응 : 갈색 (⁢)

⋅Lysine deamination 반응 : 적색 (⁢)

(3) 항원

⋅Proteus OX 19 발진티푸스, 발진열

⋅Proteus OX 2

⋅Proteus OX K 쯔쯔가무시병

(4) 생화학적 감별.

시 험	P.vulgaris	P.mirabillis	M.morganii
PPA	⁢	⁢	⁢
IPA	⁢	⁢	⁢
LIA(R/A)	⁢	⁢	⁢
Swarming	⁢	⁢	⁣
urease	⁢	⁢	⁢
MIO	⁢⁢⁣	⁢⁣⁢	⁢⁢⁢
TSI	A/A G H2S	K/A G H2S	K/A G
KIA	K/A G H2S
IMvic	⁢⁢⁣d(⁣)	⁣⁢dd(⁢)	⁢``⁢

8) Citrobacter

⋅KIA : A/A G H₂S (K/A G, K/A G H₂S, A/A G)

⋅LDC : ⁣ (Salmonella 와 구별)

⋅Growth in KCN broth : ⁢

⋅ONPG : ⁢

9) Yersinia

(1) 형태 및 염색성 : 그람음성 간균 혹은 구간균

Wayson 염색시 양극성 염색

(2) 배양 : ⋅CIN 배지 (Mannitol, neutra red) : 분홍색

⋅Mac or SS : colorless

(3) 생화학적 성상

⋅Motility : 35℃ (⁣), 25℃ (⁢)

⋅Ureas : ⁢

⋅VP(25℃) : ⁢

⋅Sucrose : ⁢

⋅TSI : A/A

⋅KIA : K/A

※ 주요 그람음성간균의 TSI 성상 ※

성 상	균 종
A/A	Y.enterocolitica
A/A G	E.coli, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Proteus, Hafnia
A/A G H2S	Citrobacter freundii, P.vulgaris
K/A	Shigella, S.typhi, Morganella, P.reltgeri
K/A G	S.paratyphi-A, Morganella, Aeromonas
K/A H2S	Salmonella, Citrobacter
K/A G H2S	P.mirabilis, Salmonella, Citrobacter
K/K	Pseudomonas, Alcaligenes, Acinetobacter, Flavobacter

⋄

참고 :

은 TSI와 KIA 성상이 다른균

8. Vibrio

1. Vibrio의 특성

1) Gram-negative comma shaped rod

2) Polar flagella

3) Halophilic (호염성) : 1~3% 식염. (단, V.cholerae, V.mimicus 제외)

4) Oxidase (⁢), motility (⁢)

2. 배양.

1) 장외검체 - BAP : oxidase ⁢, hemolysis

- TCBS : yellow colony (V.cholerae, V.alginolyticus)

green colony (V.vulnificus, V.parahemolyticus, V.mimicus)

2) 변검체

Stool → APW (PH8.4) → 5~8h → TCBS (PH 8.6)

→ oxidase(⁢) → 혈청⋅생화학적 시험

⋅APW (Alkaline peptone water) : 증균배지

⋅TCBS (thiosulfate citrate bile sucrose) : 선택배지, 지시약 BTB, 가압멸균 ⁓

⋅Kit (APl 20E) 사용시 균액 0.85~1% NaCl 용액으로

3. 임상검체에서 분리되는 Vibrio균종

1) V.cholera O1

(1) 혈청형.

⋅V.cholerae serovar. Ogawa A,B 항원.

⋅V.cholerae serovar. Inaba A,B 항원.

⋅V.cholerae serovar. Hikojima A,B,C 항원.

(2) V.cholerae serogroup O1 생물형의 감별

성 상	Biovar
	Classical (Asian)	El-Tor
Voges-Proskauer	⁣	⁢
Polymyxin B(50u) 억제대	⁢S	⁣R
면양적혈구 용혈	⁣	⁢
닭적혈구 응집	⁣	⁢
String 시험	⁢	⁢
Cholera-red 반응 (indol)	⁢	⁢

⸁String 시험

⋅시약 0.5% Sod.deoxycholate 실처럼 따라올라옴.

⸂Cholerae-red 반응

⋅배지-Nitrate peptone broth

⋅시약-C-H₂SO₄

(3) 면역학적 반응

⋅용균 (bacteriolysis) 또는 pfeiffer 현상

⋅원리, 항원 (V.cholerae) + 항체 (면역혈청) + 보체 (Guinea pig)

= V.cholerae의 lysis

(4) V.cholerae O1 과 나머지 Vibrio 의 생화학적 성상.

시험	V.cholerae	V.parahemolyticus	V.vulnificus
TSI, KIA	A/A, K/A	K/A	K/A (24h), A/A (48h)
Oxidase	⁢	⁢	⁢
ONPG	⁣	⁣	⁢
0%, 6%, 8%, NaCl	⁢⁢⁣	⁣⁢⁢	⁣⁢⁣
L, A, O	⁢,⁣,⁢	⁢,⁣,⁢	⁢,⁣,⁢or⁣
병원성	법정전염병	장염 vibrio	패혈증

(5) 항균제 감수성 시험 - tetracycline에 감수성

9.Aeromonas 와 Plesiomonas

1. Aeromonas

-물속에 많다. 대개 1개의 극성편모, gram-negative rod

-Oxidase 와 Catalase ⁢

(1) Vivrio 와 Aeromonas 의 감별

균주	0/129가 증식 억제
Vibrio	⁢S
Aeromonas	⁣R

(2)Aeromonas 와 Plesiomonas 의 감별.

시험	Aeromonas	Plesiomonas
TSI	A/A G (A/A or K/A)	K/A
Oxidase	⁢	⁢
MIO	⁢⁢⁣	⁢⁢⁢
L,A,O	⁣⁢⁣	⁢⁢⁢
0%, 6%, NaCl	⁢⁣	⁣
Gas from glucose	⁢	⁣
Mannitol	⁢	⁣
Sucrose	⁢	⁣
Lactose	⁣	⁢(48h)
Esculin	⁢	⁣
DNase	⁢	⁣
Beta-hemolysis	⁢	⁣
0/129	R	S

10. 포도당 비발효 그람음성 간균

(Glucose nonfermenting gram-negative

bacillius, GNFB)

1. GNFB 의 공통점.

1) Aerobic

2) Non-spore-forming

3) Gram-negative bacilli or coccobacilli

4) Incapable of utilizing carbohydrate or oxidation

2. 탄수화물의 Oxidation 과 fermentation

1) EMP (Embden-Meyerhof-Parnas) : anaerobic

2) ED (Enter-Douder off) : aerobic phathway

3) HMP (Warburg-Dickens Hexose monophosphate)

: facultative anaerobic phathway

3. 동정.

1) GNFB 의 단서

(1) TSI 나 KIA : K/K (예외 Shewanella puterfaciens는 K/H₂S)

(2) Oxidase : ⁢ (Acinetobacter는 ⁣)

(3) Grow on BAP but not on MacConkey agar

2) Biochemical tests

(1) TSI : K/K

(2) O-F test

⸁ Glucose OF medium

Hugh and Leifson's OF basal medium + glucose + BTB 지시약

(peptone 0.2%) (1%)

⸂ OF 빈응

ⅰ) 산화(O) : P.aeruginosa, A.anitratus

ⅱ) 발효(F) : 장내세균과. Staphylococcus

ⅲ) 비산화(⁣) : Alcaligenes, Moraxella

(3) Indophenol oxidase

(4) Pyocianin 생성

⸁ P.aeruginosa 만생성 (GNFB 중 가장많이 분리)

⸂ Mueller Hinton agar에서 청색

⸃ Pyocyanin 색소를 보기위한 배지 : King A (Pseudomonas P agar)

⸄ 수용성, chloroform에 추출

(5) Fluorescein 생성

⸁ Pyoverdin (Fluorescein) : 황색 색소, 자외선등 아래서 형광

⸂ 수용성, chloroform에 불용성

⸃ 배지 : King B (Pseudomonas F agar)

⸄ 생성균주 : P.aeruginosa, P.fluorescens, P.putida

(6) 42℃에서 증식

⸁ P.aeruginosa 가 증식

(7) Nitrate reduction test

(8) ADN, LDC, OPC

(9) DNase 시험

(10) 운동성

⸁ Hanging drop method

⸂ Semisolid stab method

⸃ 염색

(11) Flagella morphology (3가지 형태)

⸁ 단모성 극성 편모 : P.aeruginosa

⸂ 총모균, 1~6개 편모 : P.fluorescense

⸃ 주모균 : faecalis

4. 주요균종.

시험	P.aeruginosa	Acinetobacter
KIA or TSI	K/K	K/K
MIO	⁢⁣⁣	⁣⁣
Citrate	⁢	⁢
Urea agar	⁣	⁣
Oxidase	⁢	⁣
Nitrate reduction	⁢	⁣
O-F reaction	O	O
Pigment	⁢	⁣

1) P.aeruginosa의 중요성상

⸁ 포도당 비발효 ⸂ Oxidase

⸃ 냄새-포도향 ⸄ Pyocyanin or 형광색소 42℃ 증식

2) Acinetobacter anitratus 의 중요성상

⸁ Gram-negative cocobacilli

⸂ Motility : ⊖

⸃ Oxidase : ⊕

⸄ 포도당 산화

3) Moraxella

⸁ Oxidase : ⊕

⸂ Sensitive to penicillin

4) Shewanella putrefaciens

⸁ TSI : K/H₂S

⸂ Oxidase : ⊕

5) Flavobacterium

⸁ Yellow bacterium

⸂ Nonmotile

⸃ Oxidase ⊕, Indole ⊕

6) Alcaligenes

⸁ A.faecalis - 주모성 편모, oxidase ⊕, 대부분 ⊖

11. Campylobacter

1. 변검체에서의 Campylobacter 검사

1) 배양 (selective media, 미호기성, 42℃)

(1) 선택배지

⸁ Skirrow

⸂ Camp-BAP (Blaser)

⸃ Butzler

Blood agar base+Selective supplement+Growth supplement+5% Blood

(2) 배양

⸁ Microaerophilic (미호기성)

⸂ Candle jar, Gas-Pak jar (촉매제 제거), Camp Pak, Camp Pouch

⸃ 42~43℃, 48h

2) 동정

⸁ 선택배지와 42℃ 증식 관찰

⸂ Colony : 비용혈, 회백색, Small

⸃ Gram-negative curved rod (갈매기모양)

⸄ Oxidase & Catalase ⊕

⸅ Cephalothin (30㎍) : R

⸆ Nalidixic acid (30㎍) : S

⸇ Hippurate hydrolysis : ⁢

2. Helicobacter pylori

1) Gastric specimen

⸁ 위생검조직 바로 Urease 시험

⋅urea + urease → ammonia + CO₂ ↑ (highly motility)

⋅Giemsa stain

⋅Warthin-Starry 도은법

2) 배양

(1) 비선택배지

⸁ Chocolate

⸂ Burcella agar with 5% sheep blood

(2) 선택배지

⸁ SKirrow's agar

⸂ MTM

⸃ BH 1 agar

Iso vitalex

Antibiotics

(3) 배양 - 1주일, 습기, 미호기성, 35~37℃

3) 동정

(1) Oxidase ⁢

(2) Catalase ⁢

(3) Rapid urease ⁢

4) 항균제 감수성시험

-erythromycin

3. Spirillum minus <나선균>

⸁ 서교열.

⸂ Helical organism

⸃ 암시야현미경, Giemsa or Wright stain 그람염색 안됨.

12. Haemophilus

1. 분류

1) 형태 및 염색성

(1) Gram-negative small, pleamorphic coccobacillus or rod.

(2) Nonmotile, nonspore forming, encapsulated H.influenzae type b.

*협막을 가진균 -- S.pneumonia

-- K.pneumonia

-- H.influenzae

-- C.neopomans (효모진균)

2) Growth factor

(1) X factor - 내열성, hemin <혈액의 hemoglobin에>

(2) V factor-이열성, coenzymeⅠ(NAD):nicotinamide adenosine dinucleotide)

- Staphylococcus, Neisseria, Pneumococcus에 있는 인자.

3) 분류 및 특징.

Species	X	V	Hemoysis	특 징
H.influenzae	⁢	⁢	⁣	수막염, Pfeiffer간균, 위성현상.
H.aegyptius	⁢	⁢	⁣	Pink-eye원인균, Koch-Weeks bacillus
H.hemolyticus	⁢	⁢	⁢	㄂-hemolytic streptococcus와 감별
H.aphrophilus	⁢	⁣	⁢
H.ducreyi	⁢	⁣	⁢	성병의 연성하감
H.para influenzae	⁣	⁢	⁣
H.para hemolyticus	⁣	⁢	⁢

2. 배양

1) Chocolate agar (증균배지)

⸁ GC agar base + growth supplement (V인자)

⋅2%hemoglobin (X인자) (supplement B or C : Difco IsoVitale X : BBL)

⸂ 상재균이 없는 검체 : CSF, 관절액

2) Staphylococcus 획선법.

(1)위성현상 (satellitism)

⸁ 원리 - S.aureus가 V인자를 생성하여 S.aureus집락주변에 이슬방울처럼

Haemophilus 균이 자람.

⸂ 방법 - BAP 배지에 먼저 검체를 접종하고 난후 S.aureus를

획선으로 그어준다.

3) 배양조건

- 35℃, H.ducreyi(9일까지 배양)

4) 동정

(1) V인자와 X인자 요구성 시험.

- Mueller-Hinton agar 와 Paper Strips

(2) Porphylin 시험 : X인자 요구시험을 정확이 할 수 있다.

⸁ 원리 -Porphobilinogen synthase 효소를 가진 세균은 ㄄-aminolerulinic acid

로 부터 porphobilinogen 이나 porphyrin으로 전환할 수 있는데 이

세균은 X인자를 필요로 하지 않는다. 그러나 X인자를 필요로 하는

세균은 이러한 반응을 일으키지 못한다.

-Heme 합성 경로와 porphyrin 시험

: ㄄-aminolerulinic acid → Porphobilinogen

(Kovac 시약 or Ehrlich 시약 적색)

→ Porphyrin → Protoporphyrin → Heme

-⊕ X인자 요구하지 않는 균 -⊖ X인자 요구 균

3. 항균제 감수성 시험 - Ampicillin 내성 : 15~25%

13. Legionella

1. 분류

⋅Gram-negative rod, aerobic,

L-cysteine-HCl and iron salts are requined for growth

⋅Habitat : 주호물, 담수, 냉각탑

2. 감염

1) 재향군인벽, CDC에서 L.pneumophila 분리됨.

2) Legionellosis

⸁ 재향군인병 : 폐렴이 주 소견, 면역억제자, 중년이상.

⸂ Pcntiac fever (폴티악열) : 인플루엔자같은 소련, 젊은사람, 사망률↑

3)냉각탑, 샤워 등에서 생긴 aerosol 흡입시 감염.

3. 세균검사

1) Direct fluorescent antibody (DFA) test

-직접형광 항체법 : 항원 ⁢(항체+형광)

2) 배양

(1) aerobic

(2) Media

⋅BYCE agar (Buffered charcoal yeast extract)

-Legionella agar base + L-cystein HCl, ferric pyrophosphate

(꼭필요, Enrichment)

⋅35℃, 3~4 days to zweeks, 습기.

⋅BAP 나 Legionella agar base에서 증식 無

(3) 동정 : Catalase ⊕

3) 혈청학적 진단.

4. 항균제 감수성 검사

-erythromycin (Intracellular infection : 결핵균, Legionella)

14. The unusual gram-negative bacillus

(그밖의 그람음성 세균)

1. 배양

1) 배지

⸁ BAP, chocolate agar - Candle jar or CO₂ 항온기 24h

⸂ Enriched media, L-cystine blood - dextrose agar : Francisella tularensis

⸃ Bordet-Gengou (BG) agar : Bordetella pertussis

: Potato + 15~20% sheep cell + glycerol

2. 주요균종

1) 주요균종의 특성

Species	특 성
Eikenella corrdoens	⋅Gram-negative straight rod ⋅Nonmotile ⋅통성혐기성이며 Pitting or Corroding colony ,표백분냄새 ⋅Mac : no growth
Gardnerella vaginalis	⋅비뇨기계 상재균 ⋅Gram-negative Pleomorphic rod ⋅nonmotile ⋅Clue cell ⋅HBA (human blood tween agar) ㆈhuman blood : ㄂-hemolytic ㆙sheep blood : nonhemolytic ⋅Catalase and oxidase - negative ⋅Hippurate hydrolysis
Calymmato bacterium granylomatis	⋅서혜부 육아종 ⋅Wright or Giemsa stain : Donovan body가 histocyte안에
Pasteurella multocida	⋅동물, 사람 감염 ⋅BAP : mushroom like odor (버섯냄새) ⋅Oxidase : ⁢ ⋅Bipolar staining
Brucella	⋅Gram-negative coccobacilli, Nonmotile ⋅동물의 유산, 사람의 파상열, CO2배양.
Bordetella pertussia	⋅백일해 ⋅Bordet-Gengou (BG) agar, Regan-Lowe agar ⋅백일해 발정 3단계 Catarrhal phase : 발병 1-3주 → 95% 양성율 Paroxysmal phase : 4주 → 5% 양성율 Convalescent phase : 5주 → 드물게 양성 ⋅검체 채취법 - Cough plate법 Nasopharyngeal swab

2) Brucella의 분류

성상	B.abortus	B.melitensis	B.suis
5% CO2 필요	⁢/⁣	⁣	⁣
Thionin 배지 a	⁣	⁢	⁢
Basic fuchsin 배지	⁢	⁢	⁣
병원성	소의 파상열	면양의 파상열	돼지의 파상열

3) Francisella tularensis : 야토병, 양극성 염색

4) Streptobacillus monilifermis : 서교열 (rat-bito fever)

15. Spirochete (나선균)

1. 나선균 종류 및 특성.

Species	나선상	병원성	매개체
Leptospira interogans	군단이 갈고리 모양, 의문부호 모양	Weil's disease	설치류 와 가축. (쥐소변) 접촉
Treponema pallidum		Syphilis (매독)	성접촉
Borrellia recurrentis B.burgdorferi		재귀열 라임병	이 진드기

2. Leptospira

1) 직접검사 - 암시야법 (혈액, 복수, 요), 도은법 (silver, 조직)

형광항체법 (동물의 요나 조직)

2) 배양

⸁ Aerobic

⸂ 28~30℃, 6주배양.

⸃ Media - a) Fletcher semisolid media

b) stuart's broth

c) EMJH media

⸄ 접종 - 발병 1주 : 혈액이나 척수액 (항응고제 : heparin, Sod.oxalate)

1주일 이후 : 요

3) 혈청학적 진단 - 배양이 어려워 많이 쓰임.

- Microscopic aggultination test (MAT) : 감도, 특이도↑

3. Treponema.

1) 직접검사 - 암시야법

2) 배양 - 인공배양 안됨, 가토를 사용

3) 혈청학적 진단

⸁ Nontreponemal test : Wasserman 항체 즉 reagin 검사, 초기진단

a) VDRL : 현미경 100X, CSF

b)RPR : 비동화 하지 않음.

c) Khan, Hinton, Kline 등.

⸂ Treponemal test : Treponema 항원에 대한 특이항체 검출, 잠재시기 진단.

a) FTA - ABS

b) TPI

c) TPHA

4. Borrelia

1) 미생물학적 진단.

⸁ 발열기 혈액에서 70% 검출

⸂ 혈액 1방울 + Sod.citrate 1방울 → 섞은 후 cover glass 암시야법

⸃ Leishman, Giemsa, May-Gruenwald, Wright 염색

⸄ 동물 계태아배양, 항원성이 변하기 때문에 혈청검사가 어렵다.

16. 혐기성 세균

1. 혐기성 세균의 분리와 동정

1) 산소가 있으면 왜 자라지 못하나?

(1) Catalase 설

H₂O₂ + catalase → H₂O + O₂↑

독성

(2) Oxidation and reduotion potential (산화 환원 전위)

- 혐기성은 낮은 산화 환원 전위에서 증식

- Eh : ⁢180mv ~ ⁣420mv

- Thioglycollate broth는 Eh가 낮다. (산소가 있으면 높아짐)

(3) Superoxide O₂^- (초산화 음이온)

- 산소분자 한 개의 전자를 받아서 생긴것 (독작용이 더 많다)

(4) 배지중의 과산화물

- 오래된 배지에는 과산화물이 생김 (자라지 않음)

- 방지법 ⸁ fresh : 신선한 배지 사용

⸂ 환원된 배지 : N₂, 혐기성 조건에서 Over night 시킨 배지

2) 혐기성 세균의 분류

(1) Gram-negative bacilli

Bacteroides, Fusobacterium, Porphyromonas, Bilophila

(2) Gram-positive cocci

Peptostreptococcus (chain), Peptococcus (cluster), Streptococcus

(3) Gram-negative cocci : Veillonella

(4) Gram-positive bacilli

⋅Spore formed : Clostridium

⋅Spore not formed : Bifidobacterium, Propionibacterium, Eubacterium

Lactobacillus, Actinomyces, Arachnia

3) 혐기성 배양

(1) 비선택배지

⸁ GAM agar

⸂ Blood agar base

(2) 선택배지

⸁ Phenylethyl alcohol blood agar (PEBA)

⸂ Kanamycin-vancomycin-laked blood (KVLB) : 대부분의 통성세균증식 억제

⸃ Bacteroides bile esculin agar (BBE) : B.fragilis group의 신속분리

(3) 증균배지

⸁ Enriched thioglycollate medium - Hemin, Vitamin K₁ 꼭 넣어야함

⸂ Chopped meat glucose broth - Clostridium의 배양 보존

⸃ Prereduced anaerobically sterilized (PRAS) broth

(4) 혐기성 방법

⸁Anaerobic jar method (혐기성 단지법)

ⅰ) Gas Pak jar

원리 : 2H₂ + O₂ → 2H₂O

Palladium(촉매제)

재료 : ⋅Gas Pak 봉지 (물 10ml)

⋅촉매제 (catalyst) : Palladium을 입힌 alumina입자

⋅지시약 : methylene blue - 호기성 blue, 험기성 무색

Resazulin - 호기성 pink, 혐기성 무색

⸂ Anaerobic chamber (혐기성 상자법)

원리 : 혼합 가스 (N₂ 85%, H₂ 10%, CO₂ 5%)

⸃ Roll streak method

원리 : 시험관 안에 PRAS 배지를 만들어 CO₂ 가스를 넣음으로 접종.

⸄ Anaerobic culture set method (혐기성 주머니법)

- Gas Pak Pouch (MB), Bio-Bag

⸅ 배양기간

-35℃, 최소 48hr, 3~4일

-clostridium 근괴사 의심시 6~12시간 후

4) 혐기성 세균의 동정

(1)간이동정

⸁ 집락형태 : 크기, 형태, 색

⸂ 색소생성 : Prevotella (Bacteroides) melaninogenia (검은색)

⸃ 용혈 : 이중용혈 (Clostridium perfrigens)

⸄ Pitting : B.ureolyticus (혐기성), Eikenella corrodens (통성혐기성)

⸅ 형광 : Prevotella melaninogenia

⸆ Catalase ⊕ : B.frogilis

Catalase ⊖ : Clostridium 등.

(2) 확인동정

⸁ 생화학적 시험용 기초배지

⸂ Kit법

⸃ Gas liquid chromatography

(3) 전통적 감별시험

⸁ Gram stain

⸂ Biochemical identification test

ⅰ) Lecithinase 시험 (Nagler reaction)

a) 배지 ⋅난황 한천배지 ( egg yolk agar)

⋅Nagler reaction

b) C.perfrigens type A antitoxin + lecithinase → Clear

Half plate without antitoxin + lecithinase → Spread (turbid)

→ Lecithinase 양성

c) egg yolk agar ⋅Lecithinase

⋅Lipase : 집락표면 진주층

⋅proteolysis : 집락주변 투명

(4) Rapid test

⸁ B.fragilis group

⋅20% bile - growth well

⋅Colistin 10㎍ disc - resistant

⸂ Fusobacterium nucleatum (방추형)

⋅20% bile - no growth

⋅Colistin 10㎍ disc - Susceptible

⋅Indole + Fusiform

⸃ Veillonella Parrula

⋅Gram-negative cocci inclusters

⋅Wood lamp : 적색형광

⸄ Peptostreptococcu asacchalolyticus

⋅Carbohydrate fermentation : negative, Indole ⊕

(5) Actinomyces

⋅혼합감염 : 호기성과 같이 감염되어야 잘자람 (대사산물 이용)

⋅방선균증 : 유황과립 (Sulfur granule)

⋅집락 : 엽상인 어금니 모양 (molar tooth) 7일간 배양

Micro-spider-like colony (24~48h)

(6) Clostridium

⸁ 분류 & 특징

Species	Group	감염 및 특성
C.perfrigens	Ⅰ	C.welchii 가스괴저
C.tetani	Ⅱ	파상풍, Swarming 현상
C.botulinum	Ⅲ	보툴리누스 중독증(통조림 시중독)
C.difficile	Ⅳ	항균제 유발 설사와 위막성 대장염

⸂ 배지 - BAP

- PEBA

- Egg yolk agar (lecithinase, lipase, proteolysis)

- CCFA (cycloserine cefoxitin fructose agar : C.difficile)

- Cooked meat medium : 아포를 보기위해

⸃ 예비동정

C.perfrigens	C.difficile	C.tetani
1. 이중용혈 2. 아포가 잘 보이지 않는다. 3. 운동성 ⊖ 4. Lecithinase ⊕ 5. Reverse CAMP 6. Stormy fermentation	1. 2~3일후 아포형성 잘됨. 2. isocaproicacid 생성 3. 자외선 등-녹색대 형광 4. CCFA-노란색 집락	1. 유주현상 2. Terminal spore 3. indole ⊕

⸄ 동정.

17. Rickettsia, Chlamydia, Mycoplasma.

1. Rickettsia

1) 특징

⸁ DNA, RNA 공유, 세포벽 가짐.

⸂ 이분열

⸃ 생세포 증식

⸄ 다형태성, 그람음성 구간균

⸅ 항생물질 (tetracycline)에 감수성

⸆ 이, 진드기, 벼룩이 매개체, 발진성, 열성 질환

⸇ 광학현미경 관찰가능 : 비여과성

2) 감염

감염증	병원체	Weil-Felix test
발진티푸스	R.prowazekii	Proteus OX19
발진열	R.typhi	혹은 Proteus OX2
쯔쯔가무시병	R.tsutsugamushi	Proteus OXK

2. Chlamydia

1) C.pasittaci

-폐렴과 전신감염, 앵무병 또는 비둘기병 원인균.

2) C.trachomatis의 4가지 병

⸁ 트라코마 - 결막염과 실명

⸂ 성적접촉의 클라미디아병 - 비임균성 요도염, 자궁경관염 (NGU)

⸃ 봉임체 결막염

⸄ 성병성 림프 육아종 (LGV)

3) 특성

⸁ 생세포생성

⸂ 여과성

⸃ 광학현미경 관찰 가능

⸄ 그람염색 음성

⸅ 2분열 증식

⸆ Tetracycline과 erythromycin에 감수성

⸇ 세포벽 가지며 RNA, DNA 공유

⸈ C.trachomatis의 봉입체는 glycogen을 함유. iodine으로 염색

3. Mycoplasma (PPLO, Pleuropneumonia like organism)

1) 특성

⸁ 여과성 병원체

⸂ 세포벽 없다.

⸃ ㄂-lactam의 항성물질에 완전내성

⸄ 다형태성

⸅ 그람음성 Giemsa염색함.

⸆ L-form과는 달리 세포벽을 가진 모세포로 돌아가지 않는다.

⸇ 발욱에 혈청이나 복수중 Cholesterol 필요

⸈ 고형배지에서 1~2주에 집락형성

⸉ 통성혐기성 (M.pneumonia만 호기성)

2) M.pneumoniae

⸁ 원발성 비정형 폐렴원인균 "Walking pneumonia"

⸂ Mycoplasma agar

Enrichiment-Steroid + Serum + Penicillin G

⸃ ㄂ 용혈

⸄ Fired egg colony

⸅ Dienes method (집락확인)

-Methylene blue ⇒ 청색염색

⸆ 혈청학적 시험

Cold agglution, 보체결함반응, IFA, ELISA 등.

3) Ureaplasm urealyticum, M.homis - 생식기감염 (NGU)