난황형성전구체, 유약 호르몬, 인슐린 신호 및 여왕벌 수명 (논문)

[꿀벌나라]

Vitellogenin, juvenile hormone, insulin signaling, and queen honey bee longevity

난황형성전구체, 유약 호르몬, 인슐린 신호 및 여왕벌 수명

Research Article

연구 논문

Vitellogenin, juvenile hormone, insulin signaling, and queen honey bee longevity

난황형성전구체, 유약 호르몬, 인슐린 신호 및 여왕벌 수명

Miguel Corona, Rodrigo A. Velarde, Silvia Remolina, Adrienne Moran-Lauter, Ying Wang, Kimberly A. Hughes,

and Gene E. Robinson

저자 : 미겔 코로나, 로드리고 A 벨라르드, 실비아 레몰리나, 아드리아넨 모란로이터, 잉왕, 킴벌리 A. 휴즈,
        그리고 진 로빈슨

PNAS April 24, 2007 104 (17) 7128-7133;

Contributed by Gene E. Robinson, March 2007 (received for review November 23, 2006)

진 로진슨 기고, 2007 년 3 월 (2006년 11월 23일 검토를 위해 접수)

Abstract

요약

In most animals, longevity is achieved at the expense of fertility, but queen honey bees do not show this tradeoff. Queens

are both long-lived and fertile, whereas workers, derived from the same genome, are both relatively short-lived and normally sterile.

대부분의 동물에서, 장수는 번식력을 희생하여 달성되지만, 여왕벌은 이러한 거래를 나타내지 않다. 여왕벌은

수명이 길고 가임인 반면, 동일한 게놈에서 파생된 일벌은 수명이 짧고 일반적으로 불임이다.

It has been suggested, on the basis of results from workers, that vitellogenin (Vg), best known as a yolk protein synthesized in

the abdominal fat body, acts as an antioxidant to promote longevity in queen bees. We explored this hypothesis, as well as

related roles of insulin–IGF-1 signaling and juvenile hormone.

일벌들의 결과에 기반으로 하여, 복부 지방체에서 합성된 난황 단백질로 가장 잘 알려진 난황형성전구체 (Vg)가

여왕벌의 수명을 증진하는 항산화제 역할을 한다고 제안되었다. 우리는 인슐린 -IGF-1 신호 및 유약 호르몬의 관련된

역할 뿐만 아니라, 이 가설을 연구했다.

Vg was expressed in thorax and head fat body cells in an age-dependent with old queens showing much higher expression‎ than

workers. In contrast, Vg expression‎ in worker head was much lower. Queens also were more resistant to oxidative stress than workers.

Vg는 나이에 따라 흉부와 두부 지방 세포에서 발현되었고, 구왕은 일벌보다 훨씬 더 높은 발현을 나타냈다.

반면, 일벌 머리의 Vg 발현은 훨씬 낮았다. 여왕벌들은 또한 일벌들보다 산화 스트레스에 더 저항성있었다.

These results support the hypothesis that caste-specific differences in Vg expression‎ are involved in queen longevity. Consistent

with predictions from Drosophila, old queens had lower head expression‎ of insulin-like peptide and its putative receptors than

did old workers.

이러한 결과는 Vg 발현의 카스트의 특별한 차이가 여왕벌 장수에 관여한다는 가설을 뒷받침한다.

초파리의 예측과 일치하게, 구왕은 일벌 노봉보다 인슐린 유사 펩티드와 그 추정 수용체의 머리 발현이 낮았다.

Juvenile hormone affected the expression‎ of Vg and insulin–IGF-1 signaling genes in opposite directions. These results suggest

that conserved and species-specific mechanisms interact to regulate queen bee longevity without sacrificing fecundity. 

유약 호르몬은 Vg와 인슐린 -IGF-1 신호 전달 유전자의 발현에 반대 방향으로 영향을 주었다.  이러한 결과는 보존

및 종 특정 메커니즘이 번식을 희생하지 않고 여왕벌의 수명을 조절하기 위해 상호 작용함을 시사한다.

Honey bees (Apis mellifera) provide an attractive model to identify the molecular mechanisms regulating variation in lifespan.

Workers and queens develop from the same genome, but queen lifespan is ≈10-fold longer (1). Moreover, queen longevity is

achieved without the typical tradeoff between longevity and reproduction.

꿀벌 (서양종)은 수명의 변화를 조절하는 분자 메커니즘을 식별하는 매력적인 모델을 제공한다.  일벌과 여왕벌은

동일한 게놈에서 발달하지만, 여왕벌의 수명은 ≈10 배 더 길다 (1). 더욱이, 여왕벌의 장수는 장수와 번식 사이의

전형적인 거래 없이 달성된다.

Queens lay up to 2,000 eggs per day (2) and live for 1–3 years. Workers, in contrast, have limited fecundity and live for 3–6

weeks during spring and summer in temperate climates (1). Insulin–IGF-1 signaling (IIS) is a key integrative pathway regulating

aging, fertility and other important biological processes in vertebrates and invertebrates.

여왕벌은 하루에 최대 2,000 개의 알을 낳고  1-3 년 동안 산다.  반대로 일벌은 생식력이 제한되었고 온대

기후에서 봄과 여름에 3 ~ 6 주 동안 산다. 인슐린 -IGF-1 신호 (IIS)는 척추 동물과 무척추 동물의 노화, 생식력

및 기타 중요한 생물학적 과정을 조절하는 핵심 통합 경로이다.

Down-regulation of IIS is associated with increased longevity and decreased fertility in Caenorhabditis elegans and Drosophila

melanogaster (3). Although IIS functions are widely conserved, it is not known whether naturally occurring differences in

longevity also are a result of variation in this pathway.

IIS의 하향 조절은 예쁜꼬마선충(線蟲) 및 노랑초파리의 수명 증가 및 생식력 감소와 관련이 있다. IIS 기능은 널리

보존되어 있지만, 자연적으로 발생하는 수명 차이가 이 경로에 변화의 결과로 인한 것인지 알려진 바 없다.

Recent advances in insect molecular endocrinology have revealed connections between IIS and juvenile hormone (JH), a major

insect hormone with diverse influences on growth, reproduction, and longevity in many species (4). Studies with Drosophila

point to a connection between IIS and JH (5, 6).

최근 곤충 분자 내분비학의 발전으로 IIS 및 많은 종의 성장, 번식 및 수명에 다양한 영향을 주는 주요 곤충 호르몬인

유약 호르몬 (JH) 사이의 관련성이 밝혀졌다.

Because queens are both long-lived and reproductively active, the unique relationship between JH and vitellogenin (Vg) in

honey bees has attracted attention (7). Honey bee Vg is a 180-kDa glycolipoprotein(8) synthesized in fat body cells and

released to the hemolymph. Vg is best known as a yolk protein and is taken up by developing oocytes (9). JH is

a gonadotropin and regulates vitellogenesis in insects (10).

여왕벌은 수명이 길고 번식 활동이 활발하기 때문에, 꿀벌에서 유약호르몬과 난항형성전구체 (Vg)사이의 독특한

관계가 주목을 끌었다.  꿀벌 난황형성 전구체는 지방 세포에서 합성되어 혈강체액으로 방출되는 180kDa 당지질

단백질이다.  Vg는 난황 단백질로 가장 잘 알려져 있으며 난모세포가 발달함으로써 흡수된다.  JH는 성선 자극

호르몬이며 곤충의 난황형성을 조절한다

In most insects, JH and Vg titers are positively correlated (11). In honey bees, however, JH and Vg titers in general show an

inverse pattern (12–15). In workers, the JH titer is low during the first 2–3 weeks of adult life when performing tasks in the

hive such as brood care (“nursing”) and is high in foragers.

대부분의 곤충에서, JH와 Vg 역가는 분명히 상관 관계에 있다.  그러나 꿀벌에서, JH 및 Vg 역가는 일반적으로

역 패턴을 나타낸다.  일벌의 경우, JH 역가는 유충을 돌보는 ("내역")것과 같은 벌통내에서 업무를 수행하는 성봉

일생의 처음 2 ~ 3 주 동안 낮고 외역봉에서는 높다.

Vg hemolymph levels follow an opposite pattern (12). In queens, both JH and Vg hemolymph titers are elevated in emerging

virgin queens, but whereas JH drops and stays low thereafter (15), Vg remains high (12). Vg gene expression‎ agrees with

protein measurements (16–18) but has not been studied in old queens.

Vg 혈강체액 수준은 반대 패턴을 따른다. 여왕벌에서, JH와 Vg 혈강체액 역가는 출방하는 처녀 여왕벌에서 상승

하지만, 그러나 JH가 떨어지고 그 이후로 낮게 유지되는 반면, Vg는 높게 유지된다.  Vg 유전자 발현은 단백질

측정과 일치하지만 오래된 여왕벌에서는 연구된 것이 없다.

Recent results from studies using worker bees (7) suggest that the unique negative relationship between JH and Vg may be

important to our understanding of queen longevity. Vg has antioxidant functions in workers, which led to the suggestion

that Vg also operates to increase queen lifespan (7).

일벌을 사용한 최근 연구 결과 (7)는 JH와 Vg 사이의 독특한 부정적 관계가 여왕의 수명에 대한 이해에 중요 할

수 있음을 시사한다.  Vg는 일벌에게 항산화 기능을 가지고 있으며, 이는 Vg는 여왕의 수명을 늘리기 위해 작용

한다는 의견으로 이어졌다.

We measured Vg mRNA levels in workers and queens of different ages and in different tissues and also compared their

resistance to oxidative stress.  Male (drone) bees also were studied for comparative purposes; drones show a more

queen-like lifestyle, i.e., focused on reproduction, but they have a worker-like lifespan (2).

우리는 다른 연령대와 조직이 다른 일벌과 여왕벌의 Vg mRNA 수준을 측정하고, 산화 스트레스에 대한 저항성을

비교했다. 수벌도 비교 목적으로 연구되었다 ; 수벌은 번식에 초점을 맞춘것 같은, 여왕벌과 더 유사한 생활양식을

보여 주지만, 일벌과 같은 수명을 가진다.

We also explored relationships between IIS, JH, and Vg in queens and workers by comparing mRNA levels of three genes in

the IIS pathway, AmILP-1, AmInR-1, and AmInR-2, and studying the effects of JH on the regulation of Vg and AmILP-1.

Results Tissue-Specific Vg mRNA Levels in Queens, Workers, and Drones: Quantitative RT-PCR (qRT-PCR).

또한 IIS 경로, AmILP-1, AmInR-1 및 AmInR-2에 있는 세 가지 유전자의 mRNA 수준을 비교하고, Vg 및 AmILP-1

의 규제에 대한  JH의 영향을 연구하여 여왕벌과 일벌의 IIS, JH 및 Vg 사이의 관계를 조사했다.

결과 여왕벌, 일벌 및 수벌에서 조직 특유 Vg mRNA 수준 : 정량적 RT-PCR (qRT-PCR).

Knockdown of Vg expression‎ in worker honey bees causes decreased resistance to oxidative stress (7), and Vg protein levels

are higher in queens than workers (12). We determined whether queens also show higher levels of Vg expression‎ than do

workers (and drones) and whether old queens have higher Vg expression‎ than do young queens.

일벌의 Vg 발현의 녹다운은 산화 스트레스에 대한 저항성을 감소시키고, Vg 단백질 수준은 일벌보다 여왕벌에서

더 높다. 우리는 여왕벌이 일벌 (및 수벌)보다 Vg 발현 수준이 또한 더 높게 보여 주는지 및 노왕이 신왕보다

Vg 표현이 더 높은지 여부를 결정했다.

Such a pattern might be expected on the basis of findings showing that experimental up-regulation of antioxidant expression‎

increases longevity in some (but not all) contexts (19, 20).  We analyzed head, thorax, and abdomen samples separately; Vg

synthesis in abdominal fat bodies has been well studied, but fat cells are also located in the head and thorax (21), and head

fat cells play an important role in regulating Drosophila lifespan (22).

이러한 패턴은 항산화 발현의 실험적 상향 조절이 일부 (전부는 아님) 맥락에서 수명을 증가시킨다는 것을

보여 주는 발견을 근거로 하여 예상 할 수 있다.  우리는 머리, 흉부 및 복부 샘플을 개별적으로 분석했다.

복부 지방체의 Vg 합성은 잘 연구되었지만, 지방 세포는 머리와 흉부에 위치하며, 머리 지방 세포는 초파리

수명을 조절하는데 중요한 역할을 한다.

We studied the following groups: queens, 1-day-old (QD), 1-week-old (QW), 1-month-old (QM), and 1-year-old (QY); workers,

1-day-old (WD), 1-week-old (WW), 1-month-old (WM); and drones: 1-day-old (DD) and 1-week-old (DW). QD and QW were

virgins, QM and QY were mated, WW were nurse bees, and WM were foragers.

우리는 다음 그룹을 연구했다 : 여왕벌, 1일령 (QD), 1주일령 (QW), 1 개월령 (QM) 및 1년령 (QY) ;

일벌, 1일령 (WD), 1주령 (WW), 1개월령 (WM); 그리고 수벌 : 1일령 (DD) 및 1주령 (DW). QD와 QW는

처녀 여왕벌, QM과 QY는 교미한, WW는 내역봉, WM은 외역봉이다.

In queens, the concentration of abdominal Vg mRNA was highest in QD and then dropped to ≈1/3 that level in QW, QM, and

QY (Fig. 1 A). In workers, Vg mRNA abdominal concentration was very low in WD, increased ≈25-fold in WW, and dropped

≈50-fold to just above detection limits in WM. In drones, Vg mRNA abdominal concentration was low in DD and undetectable

in DW [supporting information (SI) Fig. 9].

여왕벌에서, 복부 Vg mRNA의 농도는 QD에서 가장 높았고, QW, QM 및 QY에서 그 수준의 1/3로 떨어졌다

(그림 1A). 일벌의 경우, Vg mRNA 복부 농도는 WD에서 매우 낮았고, WW에서 ≈25 배 증가했으며 WM에서

검출 한계 바로 위로 ≈50 배 떨어졌다. 수벌에서 Vg mRNA 복부 농도는 DD에서 낮았고 DW에서 검출되지 않았다

[지원 정보 (SI) 그림 9].

Fig. 1.

그림 1

Tissue-specific analyses of Vg mRNA levels in queen and worker honey bees.

여왕벌과 일벌 꿀벌의 Vg mRNA 수준에 대한 조직 특유 분석.

(A–C) The y axis indicates the relative concentration of Vg mRNA in abdomen (A), thorax (B), and head (C). Queens are indicated

by solid bars. Workers are indicated by open bars. Equal concentrations of RNA were used for these analyses. Values were

calculated relative to the lowest group mean in each graph (WM) set as 1X. (D) Percentages of Vg mRNA per queen body

part segment.

 (A–C) y축은 복부 (A), 흉부 (B) 및 머리 (C)에서 Vg mRNA의 상대적 농도를 나타낸다. 여왕벌은 짙은색 막대로

표시된다. 일벌은 빈 막대로 표시됩니다. 이러한 분석에는 동일한 농도의 RNA가 사용되었다. 값은 1X로 설정된

각 그래프 (WM)에서 가장 낮은 그룹 평균을 비례하여 계산되었다. (D) 여왕벌 몸체 부분 마디 당 Vg mRNA의

백분율.

QD are indicated by solid bars. QY are indicated by open bars. Equal volumes of RNA were used, without equalizing

concentration, to obtain measures of total Vg mRNA per body part. Values depicted by each bar are given below each x axis.

Results of statistical analysis in text: n = 7–12 individuals per group.

QD는 짙은색 막대로 표시됩니다. QY는 빈 막대로 표시됩니다. 농도를 동일하게 하지 않고, RNA의 동일한

부피를 사용하여 신체 부위 당 총 Vg mRNA 측정값을 얻었다. 각 막대로 표시된 값은 각 x 축 아래에 제공된다.

텍스트의 통계상 분석 결과 : n = 그룹당 7-12 개체.

We also detected Vg expression‎ in both thorax and head, especially in queens (Fig. 1 B and C), which is previously unreported.

Queens showed an age-related increase in Vg thorax mRNA concentration. QY had ≈12-fold higher levels than QD and QW

and ≈ 900-fold higher levels than WW.

우리는 또한 ) 이전에 보고되지 않았던 특히 여왕벌의 경우에, 흉부와 머리 모두에서 Vg 발현을 감지했다.

여왕벌은 Vg 흉부 mRNA 농도에서 연령 관련 증가를 보였다. QY는 QD 및 QW보다 ≈12 배 더 높았고 WW보다

900 배 더 높았습니다.

Queens also showed an age-related increase in Vg head mRNA concentration; unlike in thorax, head Vg peaked in QM and

remained high in QY.  QM and QY had ≈5- to 10-fold higher head concentrations than QD and QW and ≈125- to 300-fold

higher head concentrations than workers. Workers had negligible Vg mRNA concentrations in head and thorax, and they

decreased with age. In drones, Vg mRNA concentration in DD and QW head or thorax was very low (SI Fig. 9).

여왕벌은 또한 Vg 머리 mRNA 농도에서 연령 관련 증가를 보여주었다.  흉부에서와 달리, 머리 Vg는 QM에서

정점에 도달했고 QY에서 높게 유지되었다.  QM 및 QY는 QD 및 QW보다 ≈5 ~ 10 배 더 높은 머리 농도를

보였고 일벌보다 ≈125 ~ 300 배 더 높은 머리 농도를 가졌다. 일벌은 머리와 흉부에서 Vg mRNA 농도가 무시할

만한 정도였으며 나이가 들면서 감소했다. 수벌에서 DD 및 QW 머리 또는 흉부의 Vg mRNA 농도는 매우 낮았다

(SI 그림 9).

To further assess the possible significance of Vg expression‎ in queen thorax and head, we calculated total amounts of Vg

mRNA per body part. Queen abdomen contains more fat body cells than does thorax or head (21), and abdomen contained

the most Vg RNA; however, head and thorax together contained almost as much Vg mRNA as in old queens (99.8%) (Fig. 1 D).

여왕벌 흉부와 머리에서 Vg 발현의 가능한 중요성을 추가로 평가하기 위해, 신체 부위 당 Vg mRNA의 총량을

계산했다. 여왕벌 복부에는 흉부나 머리 보다 더 많은 지방 세포가 들어 있고 (21), 복부에는 가장 많이 Vg RNA가

들어 있었다. 그러나, 머리와 흉부 모두는 늙은 여왕벌 (99. 8 %)에서 만큼 거의 많은 Vg mRNA 들어 있었다

(그림 1D).

In contrast, head and thorax Vg RNA together amounted to only 7% of abdominal levels for young queens. Additional

measurements across tissues and castes indicated that the proportion of Vg mRNA relative to total RNA was higher in queen

head and thorax relative to abdomen (SI Fig. 9).

대조적으로, 머리와 흉부 Vg RNA는 어린 여왕벌의 복부 수준의 7 %에 달했다.  조직과 카스트에 걸쳐서 추가의

측정은 전체 RNA에 대한 상대적인 Vg mRNA의 비율은 복부에 비해 여왕벌 머리와 흉부에서 더 높았다는 것을

나타냈다 (SI 그림 9).

We estimate that Vg transcription accounts for >25% of total transcriptional activity in queen head and thorax. These results

indicate that the head and thorax contribute significantly to the total Vg mRNA pool in QM and QY.

우리는 Vg 전사가 여왕벌 머리와 흉부에서 총 전사 활동의> 25 %를 차지한다고 추정한다. 이러한 결과는

머리와 흉부가 QM 및 QY에서 총 Vg mRNA 풀에 크게 기여한다는 것을 나타낸다.

전사(轉寫): DNA에서 메신저인 RNA가 만들어지는 과정.

Tissue-Specific Vg mRNA Levels in Queens, Workers, and Drones: In Situ Hybridization.

여왕벌, 일벌 및 수벌에서 조직 특유 Vg mRNA 수준 : 현장 교배.

In situ hybridization confirmed the qRT-PCR results. Old queens had much higher head expression‎ of Vg than young queens

(Fig. 2 A). Head fat cells were observed in queens, workers, and drones, with queen and drone more similar to one another

in density and location; workers in particular had relatively few head fat cells (Fig. 2).

현장 교배는 qRT-PCR 결과를 확인했다. 늙은 여왕벌은 젊은 여왕벌보다 Vg의 머리 발현이 훨씬 더 높았다

(그림 2A). 머리 지방 세포는 여왕벌, 일벌, 수벌에서 관찰되었으며, 여왕벌과 수벌은 밀도와 위치에서 서로 더

비슷했다 ; 특히 일벌은 머리 지방 세포가 비교적 적었다 (그림 2).

In queen head, transcript localization was limited to fat cells. Vg expression‎ was detected in head fat cells in young but not old

workers and also was not detected in drone head (Fig. 2 B). This finding shows that the high level of Vg mRNA found in the

heads of old queens is not a property of head fat cells in general in honey bees but a specific feature of the queen. Results

for thorax also were consistent with the above qRT-PCR analyses (SI Fig. 10).

여왕벌 머리에서, 전사체 부위는 지방 세포로 제한되었다. Vg 발현은 유봉의 머리 지방 세포에서 발견되었지만,

노봉에서는 발견되지 않았고 수벌 머리에서도 발견되지 않았다 (그림 2B). 이 발견은 늙은 여왕벌의 머리에서

발견되는 높은 수준의 Vg mRNA는 꿀벌에서 일반적으로 머리 지방 세포의 특성이 아니라 여왕벌의 특유한

특징임을 보여 준다. 위의 qRT-PCR 분석과 일치한다 (SI 그림 10).

As expected, we also detected populations of abdominal fat cells expressing Vg in queen and worker (Fig. 3). These in situ

results are consistent with qRT-PCR findings.

예상대로, 여왕벌과 일벌에서 Vg를 발현하는 복부 지방 세포 개체군도 발견했다 (그림 3). 이러한 현장 결과는

qRT-PCR 결과와 일치한다.

Fig. 2.

그림 2

Localization of Vg mRNA in queen, worker, and drone head. (A) Queens. Shown are QD (a and d), QM (b and e), and QY

(c and f). (a–c) Coronal sections show Vg mRNA in the fat cells of the dorsal and ventral sinus of the head capsule surrounding

the brain (see also (SI Fig. 11).

여왕벌, 일벌 및 수벌 머리에서 Vg mRNA의 부위. (A) 여왕벌. QD (a 및 d), QM (b 및 e) 및 QY (c 및 f)가 보여진다.

(a–c) 관상부는 뇌를 둘러싸고 있는 머리통의 등쪽과 앞면 부비강의 지방 세포에서 Vg mRNA를 보여준다

(SI 그림 11 참조).

(d–f) High-magnification images of fat cells reveal an age-related increase in cell size and Vg mRNA signal intensity. In QM

and QY, where staining was most intense, the fat cells were very large (up to 100 μm), exhibited a characteristic deformed

nucleus (52), and showed clear cytoplasmic expression‎ of Vg transcript.

(d–f) 지방 세포의 고배율 이미지는 노화와 관련된 세포 크기 및 Vg mRNA 신호 강도의 증가를 나타낸다.

QM과 QY에서, 염색이 가장 짙고, 지방 세포는 매우 크고 (최대 100μm), 특징적인 변형된 핵 (52), 그리고

Vg 전사체의 명확한 세포질 발현을 보였다.

(B) Workers and drones. Shown are WW (a), WM (b), and DW (c). In WW (nurse bees), Vg mRNA is detected in a small cluster

of fat cells (a Inset) but not in WM (b) or 2-week-old drones (c). (Scale bars: A a–c and B a–c, 400 μm; A d–f, 100 μm.)

(B) 일벌과 수벌. WW (a),  WM (b) 및 DW (c)를 보여 준다.  WW (내역봉)에서 Vg mRNA는 지방 세포의

작은 무리 (삽입 그림)에서 검출되지만 WM (b) 또는 2주령 수벌 (c)에서는 검출되지 않았다. (rlwns 막대 :

A a–c 및 B a–c, 400 μm; A d–f, 100 μm.)

Fig. 3.

그림 3.

Localization of Vg mRNA in queen and worker abdomen.

여왕벌과 일벌 복부에서 Vg mRNA의 부위.

Shown are QD (a and e), QY (b and f), WW (c and g), and WM (d and h). (Lower) Higher magnification images of the

corresponding (sagittal) section in the Upper images. QD (a) and QY (b) showed similar patterns of Vg mRNA localization

in fat cells adjacent to cuticle.

QD (a 및 e), QY (b 및 f), WW (c 및 g) 및 WM (d 및 h)이 보여 주고 있다.  (아래) 상단 이미지에서 해당

(시상矢狀) 섹션의 고배율 이미지. QD (a)와 QY (b)는 표피에 인접한 지방 세포에서 유사한 Vg mRNA 부위

패턴을 보였다.

Vg mRNA was detected in fat cells of WW (c and g), but not in WM (d and h). These are the expected patterns of distribution

on the basis of localization of Vg protein (12, 14) and serve to validate the more unexpected findings in Fig. 2. No

hybridization signal was observed in control sections hybridized with a Vg sense strand probe for every group and body part

analyzed.

mRNA는 WW (c 및 g)의 지방 세포에서 검출되었지만, WM (d 및 h)에서는 검출되지 않았다.  Vg이들은 Vg

단백질의 부위 (12, 14)를 기반으로한 예상되는 분포 패턴이며 그림 2에서 예상치 못한 결과를 입증하는 역할을

한다.  분석된 모든 그룹 및 신체 부위에 대해 Vg 센스 가닥 조사와 교배된 대조군 섹션에서 교배 신호가 관찰

되지 않았다.

Abdominal fat body is organized as a layer of fat cells (trophocytes and oenocytes) adjacent to the cuticle, mostly lining the

dorsal and ventral blood sinuses (51). Oenocytes were not present in QD fat bodies; they were present in QY, scattered among

trophocytes (f, arrows). Vg mRNA was detected in trophocytes (g, arrowheads), but not in oenocytes (g, arrows) in WW.

(Scale bars: a–d, 400 μm; e–f, 100 μm; g and h, 50 μm.

복부 지방은 표피에 인접한 지방 세포층 (영양 세포 및 난세포)으로 구성되어 있으며, 대부분 등쪽 및 복부 체액

부비강을 둘러싸고 있다.  다핵세포는 QD 지방체에 존재하지 않았다; 그들은 영양 세포 (f, 화살표) 사이에 흩어져 

QY에 존재하였다. Vg mRNA는 영양 세포 (g, 화살촉)에서 검출되었지만, WW의 편도세포 (g, 화살)에서는 검출

되지 않았다. (축척 막대 : a–d, 400 μm; e–f, 100 μm; g 및 h, 50 μm.

주) oenocytes 편도 세포(扁桃細胞)

one of the large straw-colored cells that are segmentally arranged in connection with the fat bodies and tracheae of most

insects and that may have important secretory functions.

대부분의 곤충의 지방체 및 기관과 관련하여 조각조각으로 배열되고, 중요한 분비 기능을 가질 수 있는 담황색 세포 중의 하나.

Vg Protein in Queen and Workers.

여왕벌과 일벌의 Vg 단백질.

Western blot analysis was used to further confirm‎ and extend the mRNA findings.  A well characterized anti-Vg antibody (23)

recognized a 180- to 190-kDa protein in samples of queen and worker abdominal, thorax, and head fat body. The tissue was

washed in saline to remove hemolymph, because we were interested in tissue-associated Vg.

특수 단백질 검출 검사 분석을 사용하여 mRNA 결과를 추가로 확인하고 확장했다. 잘 특성화된 항-Vg 항체 (23)는

여왕벌과 일벌 복부, 흉부, 두부 지방체의 샘플에서 180-190-kDa 단백질을 인지했다.

우리는 조직 관련 Vg에 관심이 있었기 때문에, 조직을 식염수로 씻어 혈림프(혈강체액)를 제거했다.

The identity of the protein recognized by the antibody in the queen head samples was confirmed by mass spectrometry as

Vg (SI Table 1). Vg protein was present in both worker and queen head, but Vg concentration was higher in QM than QD

(Fig. 4).

여왕벌 머리 샘플에서 항체가 인식한 단백질의 정체는 Vg로 질량 분석법으로 확인되었다 (SI 표 1).  

Vg 단백질은 일벌과 여왕벌 머리 모두에 존재했지만, Vg 농도는 QD보다 QM에서 더 높았다 (그림 4).

The total amount of Vg per tissue was highest in ovary, as expected (SI Fig. 12A ). QM had higher total amounts of Vg in

head and thorax than QD (SI Fig. 12A ). In workers, the greatest amount of Vg was detected in abdomen, less in thorax,

and even less in head (SI Fig. 12B ).

조직 당 Vg의 총량은 예상대로 난소에서 가장 높았다 (SI 그림 12A). QM은 QD보다 머리와 흉부에서 Vg의 총량이

더 높았다 (SI 그림 12A). 일벌의 경우 가장 많은 양의 Vg가 복부에서, 흉부에서 더 적게, 머리에서 더 적게 검출

되었다 (SI 그림 12B).

Fig. 4.

그림 4

Queen anti-Vg Western blot analysis.

여왕벌 항-Vg  특수 단백질 검출 검사 분석.

Two micrograms of total protein were loaded per lane onto a SDS/10% PAGE gel; results thus reflect Vg protein concentration.

Additional experiments were made without normalizing protein amount, thus providing a measure of total Vg per tissue

(SI Fig. 12).

레인 당 2마이크로 그램의 총 단백질을 SDS / 10 % PAGE 겔로 실었다; 따라서 결과는 Vg 단백질 농도를 반영한다.

단백질 양을 정상화하지 않고 추가 실험을 수행하여 조직 당 총 Vg 측정한다 (SI 그림 12).

Shown for QM are head (MH), thorax (MT), abdominal fat body (MA), and ovary (MO); Shown for QD are head (DH), thorax

(DT), abdominal fat body (DA), and ovary (DO). Size marker bands are 192, 117, 99, 54, 37, and 29 kDa, respectively.

Queen–Worker Differences in Resistance to Oxidative Stress.

QM의 경우 두부 (MH), 흉부 (MT), 복부 지방체 (MA) 및 난소 (MO)가 표시된다. QD는 머리 (DH), 흉부 (DT),

복부 지방체 (DA), 난소 (DO)로 표시된다. 마커 밴드 크기는 각각 192, 117, 99, 54, 37 및 29 kDa이다.

산화 스트레스에 대한 저항성에서는 여왕벌- 일벌 차이.

Queens have higher circulating Vg protein levels than workers (11), so if Vg acts as an antioxidant to promote longevity,

then queens should be relatively more resistant to oxidative stress. Paraquat-injected queens had significantly higher survival

than paraquat-injected workers (log-rank test: χ2 = 81.7, P < 0.0001)(Fig. 5).

여왕벌은 일벌 보다 순환하는 Vg 단백질 수치가 높으므로 (11), Vg가 수명을 향상시키는 항산화제 역할을 한다면,

여왕벌은 상대적으로 산화 스트레스에 더 저항할 수 있다 (로그 순위 테스트 : χ2 = 81.7, P <0.0001) (그림 5).

The effect of paraquat on queen survival was weaker than on worker survival (log-rank test: χ[1] 2 = 138.1, P < 0.0001;

proportional hazards: χ2 = 22.5, P < 0.0001). These results indicate that queens are more resistant to oxidative stress than

workers.

여왕벌의 생존에 대한 파라콰트의 효과는 일벌 생존 보다 약했다 (로그 순위 테스트 : χ [1] 2 = 138.1, P

<0.0001; 비례 위험 : χ2 = 22.5, P <0.0001). 이 결과는 여왕벌이 일벌 보다 산화 스트레스에 더 잘 저항한다는

것을 나타낸다.

Fig. 5.

그림 5.

Queen–worker differences in resistance to oxidative stress.

산화 스트레스에 대한 저항성의 여왕-일벌 차이

Paraquat-injected queens had significantly higher survival than paraquat-injected workers. Paraquat reduced the median

survival of workers from 359 to 35 h (log-rank test, χ2 = 43.2, P < 0.0001) and reduced the 800-h survival of queens from

92% to 52% (log-rank test, χ2 = 5.1, P = 0.02). Median survival time was not estimable because >50% of queens were alive

at the time the experiment ended.

파라콰트(제초제)를 주입한 여왕벌은 파라콰트 주입한 일벌보다 생존율이 훨씬 높았다.

파라콰트는 일벌의 중간 생존 시간을 359에서 35 시간으로 줄였고 (로그 순위 테스트, χ2 = 43.2, P

<0.0001) 여왕벌의 800 시간 생존을 92 %에서 52 %로 줄였습니다 (로그 순위 테스트, χ2 = 5.1). , P = 0.02).

실험 종료 시점에 여왕벌의 50 % 이상이 살아 있었기 때문에 중앙 생존 시간은 추정할 수 없었다.

Queen–Worker Differences in Insulin Signaling.

인슐린 신호의 여왕벌-일벌 차이.

Old queens had lower head expression‎ of AmILP-1 (insulin-like peptide) and its putative receptors (AmInR-1 and AmInR-2)

than did old workers (Fig. 6 A–C). This result is consistent with predictions from Drosophila, in which experimental

down-regulation of IIS extends lifespan (5, 24).

구왕은 노봉 일벌 보다 AmILP-1 (인슐린 유사 펩타이드)과 추정 수용체 (AmInR-1 및 AmInR-2)의 머리 발현이

낮았다 (그림 6 A–C). 이 결과는 IIS의 실험적 하향 조절이 수명을 연장함에 있어 초파리의 예측과 일치합니다

(5, 24).

AmILP-1 expression‎ showed an age-dependent decrease in queens. In workers, by contrast, AmILP-1 was up-regulated in the

older group. WM, the group with the shortest expected lifespan, had ≈10-fold higher AmILP-1 levels than WW and QM and

5-fold higher levels than QY.  Expression‎ of the genes encoding the two putative insulin receptors was not significantly

different within queen age groups and young workers(WD, WW), but was lower than for WM (Fig. 6 B and C).

AmILP-1 발현은 여왕벌의 연령에 따라 감소하는 것으로 나타났다. 반면에 일벌의 경우, AmILP-1은 늙은

그룹에서 상향 조절되었다.  예상 수명이 가장 짧은 그룹인, WM은 WW 및 QM보다 AmILP-1 수준이 ≈10배

높았고 QY보다 5배 높았다.  두 개의 추정 인슐린 수용체를 암호화하는 유전자의 발현은 여왕 연령 그룹과

유봉 (WD, WW)에서 크게 다르지 않았지만, WM보다 낮았다 (그림 6B 및 C).

Fig. 6.

그림 6

Caste-specific differences in the expression‎ of AmILP-1 (A), AmInR-1 (B), and AmInR-2 (C) in queen and worker head.

여왕벌과 일벌 머리에서 AmILP-1 (A), AmInR-1 (B), AmInR-2 (C)의 발현에 있어서 카스트 별 차이.

Sample notation is as in Fig. 1. Queens are indicated by open bars. Workers are indicated by closed bars. Results of statistical

analysis in text: n = 7–12 individuals per group. The y axes are as in Fig. 1.

샘플 표시는 그림 1과 같다. 여왕벌은 열린 막대로 표시된다.  일벌은 닫힌 막대로 표시된다. 텍스트의 통계

분석 결과 : n = 그룹당 7-12 개체.  y 축은 그림 1과 같다.

Effects of Methoprene on Vg and IIS Gene Expression‎.

Vg 및 IIS 유전자 발현에 대한 메토프렌의 효과.

주) 메토프렌 : 합성 유약호르몬

Virgin QW were treated topically with 200 μg of the JH analog methoprene (in 5 μl of acetone) and sampled 24 h later.

This dose is active in workers (25). Queens were either placed individually in small (≈1,000 adult bees) colonies

(“colony queens”) or caged individually and held in the same otherwise queenless colony (“banked queens”).

처녀 QW는 200μg의 유약호르몬 유사체 메토프렌 (아세톤 5μl)으로 국소 처리하고 24 시간 후에 견본으로

실험했다. 이 투여량은 일벌에게 활성입니다 (25). 여왕벌은 개별적으로 약군 (약 1,000 마리의 성봉) 봉군

(“봉군 여왕”)에 배치되거나, 개별적으로 케이지에 두고 다른 여왕벌이 없는 동일한 봉군 (“맡겨진 여왕”)에

두었다.

These manipulations were done to explore possible environmental influences on the impact of the hormone treatment; 

IIS is known to be nutritionally sensitive (26). Banked queens were expected to be fed more poorly than colony queens,

and in workers, starvation induces higher rates of JH biosynthesis (27).

이러한 조작은 호르몬 치료의 영향에 대한 가능한 환경 영향을 조사하기 위해 이루어졌다.  IIS는 영양상으로

민감한 것으로 알려져 있다 (26).  맡겨진 여왕벌은 봉군 여왕벌보다 더 잘 먹지 않을 것으로 예상되며, 일벌의

경우, 기아는 유약호르몬 생합성 비율을 더 높인다 (27).

Banked queens do have higher JH titers than colony queens (15), suggestive of a nutritional effect in banked queens, but this

has not yet been measured directly.  Methoprene caused a significant decrease in head Vg mRNA in both colony and banked

queens (Fig. 7 A), with a stronger effect on banked queens. In workers, where head Vg levels are just above background (Fig. 1),

no differences were detected (data not shown).

맡겨진 여왕벌은 봉군 여왕벌 (15)보다 유약 호르몬 역가가 더 높아서,  맡겨진 여왕벌의 영양상의 영향을 시사

하지만, 아직 직접 측정되지 않았다.  메토프렌은 봉군과 맡겨진 여왕벌 모두에서 머리 Vg mRNA를 현저히 감소

시켰으며 (그림 7A), 맡겨진 여왕벌에 더 강한 영향을 끼쳤다.

머리 Vg 수준은 배경 바로 위에 있는 일벌 (그림 1)에서는 차이는 발견되지 않았다 (데이터는 표시되지 않음).

By contrast, methoprene caused an increase in AmILP-1 expression‎ in both castes, although in queens this effect was only

significant in colony queens (Fig. 7 B). A similar effect was seen for treatment with JH III (data not shown), the endogenous

hormone in honey bees.

대조적으로, 메토프렌은 두 카스트 모두에서 AmILP-1 발현을 증가 시켰지만, 여왕벌에서는 이 영향이 봉군

여왕벌에서만 상당했다 (그림 7B).  꿀벌의 내생적 호르몬인 JH III (데이터는 표시되지 않음)로 처리에 대해

유사한 영향을 보였다.

These results suggest that JH affects the expression‎ of Vg and IIS genes in opposite directions. Effects vary by environment

(colony type), which possibly reflects nutritional conditions.

이러한 결과는 JH가 반대 방향으로 Vg 및 IIS 유전자의 발현에  영향을 미친다는 것을 시사한다.  영향은 환경

(봉군 유형)에 따라 다르며, 아마 영양 상태를 나타낸다.

Fig. 7.

그림 7

Effects of methoprene on Vg (A) and AmILP-1 (B) expression‎ in heads of QW and WW.

QW 및 WW의 머리에서 Vg (A) 및 AmILP-1 (B) 발현에 대한 유약 호르몬의 효과.

Queens were either placed individually in small colonies (“colony”) or caged individually in a specially modified colony

(“queen bank”). Queen and workers treated with methoprene or acetone vehicle (control) are indicated as Q-M and W-M or

Q-C and W-C, respectively. Results are of statistical analysis in text. n = 7–12 individuals per group. The y axes are as in Fig. 1.

여왕벌은 개별적으로 작은 봉군 ("봉군")에 배치되거나 특별히 줄여진 봉군 ("여왕벌 은행")으로 개별적으로

케이지에 넣어졌다. 유약 호르몬 또는 아세톤 매개체 (대조군)로 처리된 여왕벌과 일벌는 각각 Q-M 및 W-M 또는

Q-C 및 W-C로 표시된다.

Discussion

토론

There are striking differences in Vg expression‎ between queen and worker honey bees. These findings, together with previous

results showing that Vg acts as an antioxidant in workers (7) and the results of our queen–worker paraquat tests, support the

hypothesis (7) that caste-specific differences in Vg are involved in queen longevity.

여왕벌과 일벌의 Vg 표현에는 현저한 차이가 있다. 이러한 발견은, Vg는 일벌(7)의 항산화제 역할을한다고 보여

주고 여왕벌-일벌 파라콰트 테스트의 결과와 함께, Vg의 카스트별(別) 차이가 여왕의 장수에 관여한다는 가설 (7)을

뒷받침을 한다.

Abdominal Vg mRNA measurements were mostly consistent with previous results (16–18). Our in situ findings revealed that

Vg expression‎ occurs primarily or entirely in fat cells, and not in the ovaries, in contrast to previous Northern blot results (17);

we suspect this discrepancy might be due to the presence of surrounding fat cells in their ovary samples (see Tissue Samples

in Methods). Vg in ovarian follicle cells (9) likely is taken up from the hemolymph.

복부의 Vg mRNA 측정은 대부분 이전 결과 (16-18)와 일치했다. 우리의 현장 발견은 Vg 발현이 이전의

노던법 결과와는 대조적으로, 난소가 아닌 지방 세포에서 주로 또는 전적으로 발생한다는 것이 밝혀졌다 :

우리는 이러한 불일치는 난소 샘플에 주변 지방 세포가 존재하기 때문일 수 있다라고 생각한다

(방법에서 조직 샘플 참조). 난소 여포 세포 (9)의 Vg는 혈림프(혈강체액)에서 흡수될 가능성이 높다.

 주) follicle cell : 여포 세포(濾胞細胞)

 주) Northern blot <생물> 노던법 ((RNA 검출 방법의 하나))

We found Vg expression‎ in parts of the body not previously known to produce this yolk protein in insects (11); expression‎

in worker head fat body also has recently been detected (28), consistent with our results. The age-related expression‎ profile

of Vg in queen head and thorax contrasted sharply with the abdomen profile.

우리는 이전에 곤충에서 이 난황 단백질을 생산하는 것으로 알려지지 않은 신체 부위에서 Vg 발현을 발견했다. 

일벌의 두부 지방체의 발현도 최근에 발견되었으며 (28), 결과와 일치한다. 여왕벌 머리와 흉부에서 Vg의 연령 관련

발현 윤곽은 복부 윤곽과 뚜렷하게 대조되었다.

Abdomen Vg mRNA peaked early in adult life, but increased with age in head and thorax. Vg transcript in head and thorax

accounts for a surprisingly large amount of the total Vg mRNA pool in old queens. These results suggest that the high Vg

circulating titers observed throughout adult queen life (12) could be the result of the total and perhaps coordinated

regulation of Vg expression‎ throughout the body.

복부 Vg mRNA는 성봉 일생의 초기에 정점에 이르렀지만, 나이가 들면서 머리와 흉부에서 증가했다. 머리와 흉부의

Vg 전사체는 늙은 여왕벌에서 총 Vg mRNA 풀의 놀랍도록 많은 양을 차지한다.

이러한 결과는 성봉 여왕벌 생애를 통하여 관찰된 높은 Vg 순환 역가 (12)가 신체 전체에 걸쳐 Vg 발현의 전체 및

아마도 조정된 조절의 결과일 수 있음을 시사한다.

Perhaps it is the total circulating pool of Vg throughout the body, independent of tissue of origin, that is important for

longevity. Alternatively, perhaps tissue-specific expression‎ is important; Vg expression‎ was very high in queen head fat cells,

cells that in Drosophila play an important role in regulating lifespan (22). There currently is insufficient information to

discriminate between these possibilities.

아마도 그것은 장수에 중요한 것은,기원 조직과 관계없이 몸 전체에 순환하는 Vg의 전체 풀일 것이다.

그대신에, 조직 특이 발현이 중요하다 : Vg 발현은 여왕 머리 지방 세포에서 매우 높았으며, 초파리에 있는 세포는

수명 조절에 중요한 역할을 한다(22). 현재 이러한 가능성을 식별할 수 있는 정보가 충분하지 않다.

Vg's antioxidant effect in honey bees has been attributed to its zinc-binding capacity (7), but other possibilities exist, including

binding to iron (29, 30), a metal that catalyzes the generation of highly reactive hydroxyl radicals during the Fenton reaction (31).

꿀벌에서 Vg의 항산화 효과는 아연 결합 능력에 기인하지만, 펜톤 반응 중에 반응성이 높은 히드록실 래디칼 생성을

촉진시키는 금속인, 철에 결합하는 다른 가능성이 있다. 

An earlier study (32) suggested that the Vg ortholog Vit-6 has antioxidant properties in C. elegans on the basis of its

carbonylation activity in aged individuals, but Vit-2 and Vit-5 appear to promote aging in this species (33). Honey bees

apparently lack genes encoding functional extracellular peroxidases (34), and queen longevity is not associated with higher

expression‎ of intracellular antioxidant genes (35).

이전 연구에서는 Vg ortholog Vit-6가 늙은 개체의 카르보닐化 활성의 기준으로 선충류에서 항산화 특성을 가지고

있지만, Vit-2와 Vit-5가 이 종에서 노화를 촉진하는 것으로 나타났다. 꿀벌은 기능성 세포 밖의 과산화 효소를

암호화하는 유전자가 없는 것으로 보이며 (34) 여왕의 수명은 세포 내 항산화 유전자의 높은 발현과 관련이 없다.

꿀벌은 기능적인 세포 밖의 과산화 효소를 암호화하는 유전자가 분명히 없는 것으로 보이며, 여왕벌의 수명은

세포 내의 항산화 유전자의 더 높은 표현과 관련이 없다.

Perhaps Vg functionally replaces the traditional antioxidants to some extent, and queens have other mechanisms to minimize

free radical damage, including decreased production of reactive oxygen species (35).

아마도 Vg는 기능적으로 기존의 항산화제를 어느 정도 대체하고, 여왕벌은 활성 산소 種의 생산 감소를 포함하여

자유 래디칼 손상을 최소화하는 다른 메커니즘을 가지고 있다.

An insulin-like peptide and two insulin receptor genes were down-regulated in old queens relative to old workers. This finding

parallels results from C. elegans and Drosophila, in which inactivation of InR genes enhances lifespan but, in contrast to queens,

also decreases fertility (5, 36). However, effects of InR genes on longevity and fertility can be experimentally uncoupled (37, 38).

인슐린 유사 펩타이드와 두 개의 인슐린 수용체 유전자는 노봉 일벌에 비해 구왕에서 하향 조절되었다.

이 발견은 예쁜꼬마 선충과 초파리의 결과와 일치하고,  InR 유전자의 비활성화는 수명을 향상시키지만, 여왕벌은

대조적으로, 번식력도 감소된다. 그러나, InR 유전자가 수명과 생식력에 미치는 영향은 실험적으로 분리될 수 있다.

JH and Vg have been studied extensively in honey bees and other social insects, but experimental analysis linking them to IIS

is thus far limited to Dipteran insects (4–6). We showed that JH affects the expression‎ of at least one IIS gene. This result,

plus those from Drosophila (5, 6), demonstrates reciprocal effects of these two hormone-signaling pathways.

JH와 Vg는 꿀벌과 다른 군거성의 곤충에서 광범위하게 연구되었지만, 그러나 IIS에 연관되는 실험적 분석은 지금

까지 쌍시류의 곤충으로 제한되었다. 우리는 JH가 적어도 하나의 IIS 유전자의 발현에 영향을 미친다는 것을 보았다.

이 결과와 더불어 초파리(5, 6)의 결과는 이 두 호르몬 신호 경로의 상호간 효과를 입증한다.

The finding that JH affects Vg and ILP-1 expression‎ in opposite directions suggests the possibility of a regulatory feedback

loop between these elements (as discussed below). A similar feedback loop, without IIS intermediates, was previously proposed

to explain interactions between Vg and JH (39).

JH가 Vg 및 ILP-1 발현에 반대 방향으로 영향을 미친다는 발견은 이러한 요소 사이의 조절 피드백 고리(회로) 가능성을

시사한다 (아래에서 논의 됨). IIS 중간체가 없는, 유사한 피드백 회로가, 이전에 Vg와 JH 간의 상호 작용을 설명하기

위해 제안되었다 (39).

We speculate that the unique negative relationship between JH and Vg in honey bees, shown in refs. 40 and 41 and extended

in this study to the transcriptional level, might contribute to changes in IIS functioning in queens to allow for both high

fertility and extended lifespan.

우리는 참고문헌 40과 41에 나타나 있고, 본 연구에서 전사적 수준으로 확장된, 꿀벌의 JH와 Vg  사이의 독특한

부정적인 관계가 높은 번식력과 수명 연장을 위해 여왕벌에서 기능하는 IIS의 변화에 기여할 수 있다고 추측한다.

Studies with Drosophila also have revealed a connection between JH and resistance to oxidative stress. JH treatments decrease

lifespan and increase sensitivity to oxidative stress (5, 42), suggesting that JH may down-regulate the expression‎ of genes

encoding antioxidant proteins in Drosophila.

초파리에 대한 연구에서도 JH와 산화 스트레스에 대한 저항성 사이의 연관성이 밝혀졌다.

JH 처리는 수명을 줄이고 산화 스트레스에 대한 민감성(쉽게 걸림)을 증가시킨다 (5, 42). 이는 JH가 초파리에서

항산화 단백질을 코드화하는 유전자의 발현을 하향 조절할 수 있음을 시사합니다.

In honey bees, however, JH titers (12–15) and expression‎ of antioxidant genes (35) are positively correlated; they are both low

in queens and high in forager (worker) bees. These patterns, if functionally significant, would suggest another change in

regulatory relationships involving JH besides the above-mentioned negative relationship between JH and Vg.

그러나 꿀벌은, JH 역가(12–15)와 항산화 유전자의 발현(35)은 긍정적으로 관련이 되어 있으며, 여왕벌에서는

낮고 외역봉은 높다. 이러한 패턴은 기능적으로 중요하다면, 위에서 언급한 JH와 Vg 사이의 부정적인 관계

외에도 JH와 관련된 규제 관계의 또 다른 변화를 암시한다.

Interest in understanding how interactions among JH, Vg, and IIS affect a variety of different phenotypes in social insects is

increasing (7, 43–45). We propose a verbal model to explain how Vg interacts with JH and IIS to regulate the striking

differences in longevity between worker and queen honey bees (Fig. 8).

JH, Vg 및 IIS 간의 상호 작용이 군거성 곤충의 다양한 표현형에 어떻게 영향을 미치는지 이해하는데 대한 관심이

증가하고 있다 (7, 43–45). 우리는 일벌과 여왕벌 사이의 현저한 수명 차이를 조절하기 위해 Vg가 JH 및 IIS와

어떻게 상호 작용하는지 설명하는 구두(口頭) 모델을 제안한다 (그림 8).

This model differs from those in refs. 44 and 45 in highlighting how both conserved and species-specific regulatory

mechanisms can interact to regulate longevity without sacrificing fecundity; roles of Vg and JH in this context have been

considered earlier (7).

이 모델은 참조문헌의 모델과 다르다. 44 및 45는 보존 및 종별 규제 메커니즘이 어떻게 상호 작용하여 생식력을

희생하지 않고 수명을 조절할 수 있는지 강조합니다. 이 맥락에서 Vg와 JH의 역할은 이전에 고려되었다 (7).

Our model starts with the premise that queens have higher nutritional status than workers, which has been shown

throughout the social insects (46). In honey bees, queens have greater abdominal lipid reserves and a richer diet: royal

jelly, a proteinaceous exocrine secretion, instead of nectar and pollen (2).

우리의 모델은 여왕벌이 일벌 보다 더 높은 영양 상태를 가지고 있다는 전제로 시작하는데, 이는 군거성 곤충

전체에서 보여졌다 (46). 꿀벌에서, 여왕벌은 더 많은 복부 지질 저장과 더 풍부한 식단을 가지고 있다 : 꽃꿀과

화분 대신, 단백성 외분비선 분비물인 로얄 젤리이다 (2).

cytoplasm : 세포질, nucleus : 세포핵, allatostatic : 곤충의 신경펩티드 호르몬  Ovary : 난소

Ecdysone  :곤충이 번데기가 되고 허물을 벗는 것을 촉진하는 전흉선(前胸腺) 호르몬.

Fig. 8

그림 8

In this state, FOXO does not repress JH synthesis, as proposed for Drosophila (4). High JH represses vitellogenesis, resulting

in low Vg titers. Low Vg stimulates insulin secretion by a feedback loop mechanism. High nutritional status (blue) results in

opposite effects, including decreased IIS activity, FOXO nuclear translocation, low JH, and high Vg.

이 상태에서, FOXO는 초파리 (4)에 제안된대로, JH 합성을 억제하지 않는다. 높은 JH는 난황형성을 억제하여

Vg 역가를 낮춘다. 낮은 Vg는 피드백 회로 메커니즘에 의해 인슐린 분비를 자극한다. 높은 영양 상태 (파란색)는

IIS 활동 감소, FOXO 핵 전위, 낮은 JH 및 높은 Vg를 포함한, 반대 효과를 초래한다.

주) translocation : 자리옮김, 전위(轉位), 전좌(轉座), 전치(轉置). 다른 곳으로의 이동.

[유전학] 유전학에서는 한 염색체의 분절 혹은 단편이 상동염색체 혹은 비상동염색체의 다른 부위로 이동된 것을 말한다. 

D군염색체와 21염색체 사이의 전위는 Down증후군을 일으킨다.

In addition to its antioxidant function, Vg might promote queen longevity by FOXO-mediated mechanisms, as in Drosophila

and C. elegans (3, 4, 22, 33).

항산화 기능 외에도 Vg는 초파리 및 선충류 (3, 4, 22, 33)에서와 같이, FOXO 매개 메커니즘에 의해 여왕벌의

수명을 증진할 수 있다.

The model includes both known and hypothesized elements from honey bee (39–40), and is supported by Fig. 7 results on

the effects of JH on Vg and ILP gene expression‎, findings showing that knockdown of Vg by RNAi causes an increase in

circulating JH titers (41) and AmILP-1 and 2 up-regulation by both Vg RNAi and starvation (M.C. and G.E.R., unpublished

results).

이 모델은 꿀벌 (39-40)의 알려진 요소와 가정된 요소를 모두 포함하며, 그림 7에서 Vg 및 ILP 유전자 발현에

대한 JH의 영향에 대한 결과를 뒷받침하며, RNAi에 의한 Vg의 녹다운은 RNAi 및 기아에 의해 순환하는 JH

역가 (41) 와 AmILP-1 및 2 상향 조절에 증가를 유발한다는 결과를 보여 준다.  (MC 및 GER, 미공개 결과).

The model provides an explanation for differences in longevity between queens and workers and also can be used to explain

differences in worker lifespan that relate to the in-hive and foraging phases of activity.

이 모델은 여왕벌과 일벌 간의 수명 차이에 대한 설명을 제공하며, 내역 및 외역 활동 단계와 관련된 일벌 수명의

차이를 설명하는데도 사용할 수 있다.

The key elements of this model are: (i) IIS is hypothesized to play a prominent role in the regulation of longevity in honey bees

as a conserved mechanism, but the traditional relationship between nutrition and IIS is reversed.

이 모델의 핵심 요소는 다음과 같다. (i) IIS는 보존된 메커니즘으로 꿀벌의 장수를 규제하는데 중요한 역할을한다고

가정하지만, 영양과 IIS 간의 전통적인 관계는 반대이다.

High nutritional status inhibits the secretion of insulin-like peptide, but the core of the IIS pathway in honey bees is

hypothesized to be conserved.

높은 영양 상태는 인슐린 유사 펩타이드의 분비를 억제하지만, 꿀벌의 IIS 경로의 핵심은 보존될 것으로 가정된다.

(ii) The traditional positive relationship between JH and Vg is inverted in honey bees, as noted above; JH inhibits Vg expression‎

(40). (iii) The effects of JH on IIS are hypothesized to be mediated by Vg; this would render Vg a central signaling molecule as

suggested in refs. 39 and 41.

(ii) 위에서 언급 한 바와 같이 JH와 Vg 사이의 전통적인 긍정적 관계는 꿀벌에서 반전된다. JH는 Vg 발현을 억제

합니다 (40). (iii) IIS에 대한 JH의 효과는 Vg에 의해 매개되는 것으로 가정된다. 이것은 참고문서 39 및 41에서

제안된 바와 같이 Vg를 중심 신호 전달 분자로 만들 것이다. 

This model raises several interesting questions, including the following: How were these traditional signaling relationships

reversed, how might they relate to social evolution, and what are the functional consequences and tradeoffs?

이 모델은 다음과 같은 몇 가지 흥미로운 질문을 제기한다. 어떻게 이러한 전통적인 신호 관계는 역전되었고,

어떻게 군거성의 진화와 관련될 수 있으며, 기능적 결과 및 절충점은 무엇인가?

The JH system already is known to be involved in regulating two aspects of the honey bee's intricate social life, queen-worker

caste determination, and division of labor among workers (10).

JH 시스템은 꿀벌의 복잡한 사회 생활, 여왕벌-일벌 계급 결정, 일벌 사이 노동 분업의 두 가지 측면을 조절하는데

이미 관여하는 것으로 알려져 있다 (10).

The novel functions of Vg in honey bees may have evolved before the evolution of caste differentiation, because there are novel

functions in both queen and worker honey bees (7). This suggests that it would be fruitful to study the functions of Vg in other

members of the Hymenoptera, both social and nonsocial.

여왕벌과 일벌 모두에 새로운 기능이 있기 때문에, 꿀벌에서 Vg의 새로운 기능은 카스트 차별화가 진화하기 전에

진화했을 수 있다. 이것은 사회적 및 비사회적 벌목(目)의 다른 구성원에서 Vg의 기능을 연구하는 것이 유익할

것이라는 것을 시사한다.

<아래 실험 내용 안 읽어도 됨. 얻을 것 없슴>

Methods

방법론

Bees.

Bees were from colonies maintained at the University of Illinois Bee Research Facility, Urbana, IL, and were derived from

populations of a mixture of European subspecies of Apis mellifera. WD were obtained by removing frames of pupae from

typical field colonies and placing them in an incubator (34°C and 80% relative humidity).

꿀벌은 일리노이 대학 꿀벌 연구 시설 (일리노이주 어바나)에서 관리하는 봉군에서 가져 왔으며, 서양종 꿀벌의

유럽 아종의 잡종 개체군에서 파생되었다. WD는 전형적인 현장 봉군에서 번데기 벌집을 제거하여 취득하였고

인큐베이터 (34 ° C 및 80 % 상대 습도)에 배치하였다.

Workers and queens of known age were obtained as in ref 34. Briefly, WW were collected while working in the hive; WM were

collected while returning to the hive as foragers after ≈2 weeks of flight/foraging activity; QW were confined to the laboratory

to prevent mating, and QM and QY mated naturally and headed colonies before sampling.

알려진 연령의 일벌과 여왕벌은 참고문서 34에서와 같이 획득되었다. 간단히 말하면, 벌통에서 작업하는 동안

WW(내역봉)를 수집했다. WM(외역봉)은 약 2 주간의 비행 / 외역 활동 후 외역봉으로 벌통으로 돌아가는 동안

수집되었다. QW는 짝짓기를 방지하기 위해 실험실에 국한되었고, QM과 QY는 샘플로 실험하기 전에 자연적으로

짝짓기하고 봉군으로 향했다.

DD were obtained as above; after emergence, they were kept in cages in the laboratory (25°C) and nourished by young workers

that were fed with honey and pollen.

DD는 상기와 같이 얻어졌다; 출방 후, 그들은 실험실 (25 ° C)의 케이지에 보관되었고 꿀과 화분으로 먹이를 먹은

유봉들에 의해 영양분을 공급 받았다.

Tissue Samples.

조직 샘플

Separate qRT-PCR analyses were performed on abdomen, thorax, and head/brain samples from each individual. Head samples

for Vg analysis were initially prepared as dissected brains (35).

각 개체의 복부, 흉부 및 머리 / 뇌 샘플에 대해 별도의 qRT-PCR 분석을 수행했다. Vg 분석을 위한 머리 샘플은

초기에 해부 된 뇌로 준비 되었다 (35).

However, results from in situ hybridization demonstrated that Vg expression‎ is localized in fat cells surrounding the brain and

not in the brain itself or anywhere else in the head.

그러나, 현장 교배에서 나온 결과는 Vg 발현이 뇌 자체 또는 머리의 다른 곳이 아닌 뇌를 둘러싼 지방 세포에 국한

된다는 것을 보여주었다.

Subsequent analyses of Vg were performed by using whole heads. qRT-PCR analyses of dissected brains for Vg expression‎ gave

results (data not shown) that were not significantly different from what we present here (Fig. 1 and SI Fig. 9). Dissected brains

were used for experiments in which AmILP-1 (GB17332-PA), AmInR-1 (GB15492-PA; XP_394771), and AmInR-2

(GB18331-PA; XP_001121597) mRNA was measured.

Vg의 후속 분석은 전체 머리를 사용하여 수행되었다. Vg 발현을 위한 해부된 뇌의 qRT-PCR 분석은 우리가 여기에

제시한 것과 크게 다르지 않은 결과 (데이터는 표시되지 않음)를 제공했다 (그림 1 및 SI 그림 9). 해부된 뇌는

AmILP-1 (GB17332-PA), AmInR-1 (GB15492-PA; XP_394771) 및 AmInR-2 (GB18331-PA; XP_001121597)

mRNA를 측정하여 실험에 사용되었다.

Real-Time qRT-PCR.

mRNA quantification was performed with an ABI Prism 7900 sequence detector, sequence-specific primers, and dual-labeled

probes (SI Table 2). PCR assays were performed in two ways. We determined the mRNA concentration for each gene by using

for each sample cDNA synthesized with 12 ng/μl RNA (Figs. 1 A–C, 6, and 7).

mRNA 정량화는 ABI Prism 7900 서열 검출기, 서열 특이적 프라이머 및 이중 표지 프로브를 사용하여 수행되었다

(SI 표 2). PCR 분석은 두 가지 방법으로 수행되었다. 우리는 12 ng / μl RNA로 합성된 각 샘플 cDNA를 사용하여

각 유전자의 mRNA 농도를 결정했다 (그림 1 A–C, 6 및 7).

We also determined the total amount of Vg mRNA per tissue by using cDNA synthesized with equal volumes of RNA

(5 μl, 1/10 the total volume in which each RNA sample was eluted) (Fig. 1 D).

우리는 또한 동일한 부피의 RNA (5μl, 추출된 각 RNA 샘플에 총 부피의 1/10)로 합성된 cDNA를 사용하여 조직 당

Vg mRNA의 총량을 결정했다 (그림 1D).

All PCR assays were performed in triplicate.  qRT exogenous Arabidopsis thaliana RNA controls spiked during RNA

extraction (XCP2, NM_101938) and cDNA synthesis (RCP1, NM_121758). XCP2 and RCP1 transcripts were synthesized

in vitro by using the MEGAscript kit (Ambion, Austin, TX) and specific primers (SI Table 2).

모든 PCR 분석은 삼중으로 수행되었다. qRT 외인성(外因性)인 애기장대 RNA 대조군은 RNA 추출

(XCP2, NM_101938) 및 cDNA 합성 (RCP1, NM_121758) 중에 핀으로 고정했다. XCP2 및 RCP1 전사체는

MEGAscript 키트 (Ambion, Austin, TX) 및 특정 프라이머 (SI 표 2)를 사용하여 시험관 내에서 합성되었다.

Transcript quantification calculations were performed by using the 2−ΔΔCt (47) or absolute quantification methods (48).

전사 정량화 계산은 2-ΔΔCt (47) 또는 절대 정량화 방법 (48)을 사용하여 수행되었다.

In Situ Hybridization.

현장 교배에서

Methods were as in ref. 49. Vg antisense and sense probes were prepared from PCR products generated by using Vg specific

primers with T7 promoters attached to 5′ ends. We used 10-μm frozen sections.

방법은 참조문헌 49. 5 '말단에 부착된 T7 프로모터로  Vg 특유 프라이머를 사용하여 생성된 PCR 산물로부터

Vg 역배열 및 한쪽 방향 프로브를 준비했다. 10μm 냉동 섹션을 사용했다.

Western Blot Analysis.

웨스턴 블롯 분석

Tissues were dissected, washed three times with 1 ml of PBS, and homogenized in 400 μl of PBS plus protease inhibitor mixture

set I (no. 539131; Calbiochem, San Diego, CA). Measurements were made in two different ways by using either 2 μg of protein

(Fig. 4 A) or 1 μl of each sample independent of protein concentration (Fig. 4 B).

조직을 해부하고, 1ml의 PBS로 3 회 세척하고, 400μl의 PBS와 프로테아제 억제제 혼합물 세트 I

(No. 539131; Calbiochem, San Diego, CA)에서 균질화하였다. 2 μg의 단백질 (그림 4 A) 또는 단백질 농도와

무관한 각 샘플의 1 μl (그림 4 B)를 사용하여 두 가지 다른 방법으로 측정을 하였다.

Material was boiled in Laemmli buffer and analyzed by SDS/10% PAGE. Anti-Vg1 antibodies (23) were obtained from

K. Hartfelder (Universidade de São Paulo, Ribeirao Preto, Brazil) and were used at 1:25,000.

Anti-rabbit antibodies conjugated to peroxidase (A0545; Sigma, St. Louis, MO) were used at 1:10,000. Detection

of protein was performed with Amersham Biosciences (Piscataway, NJ) ECL reagents (no. RPN2106).

재료를 Laemmli 버퍼에서 끓여서 SDS / 10 % PAGE로 분석했다. 항 -Vg1 항체 (23)는 K. Hartfelder

(Universidade de 상 파울로, 리베이라오, 프레토, 브라질)에서 얻었으며 1 : 25,000에서 사용되었다. 퍼락스데이스

(A0545; Sigma, St. Louis, MO)에 접합된 항-토끼 항체는 1 : 10,000에 사용되었다. 단백질 검출은 Amersham

Biosciences (Piscataway, NJ) ECL 시약 (no. RPN2106)으로 수행되었다.

주) [생화학] peroxidase (페르옥시다아제) : 동식물 조직에 있으며 구아이아콜을 산화하는 효소.

Verification of Vg by Mass Spectrometry.

질량 분석법에 의한 Vg 검증.

The band corresponding to Vg was excised from the gel, digested with trypsin (Promega, Madison, WI), and analyzed on a

Waters (Milford, MA) Q-ToF equipped with an ultra performance liquid chromatography (UPLC)

(column: Atlantis C-18 nanoACQUITY, 75 um × 20 cm; trap: Symmetry C-18, 200 μm × 2 cm).

Vg에 해당하는 밴드를 겔에서 잘라 내고, 트립신 (Promega, Madison, WI)으로 분류하고, 초 수행 액체 색층분석표

(UPLC)가 장착된 Waters (Milford, MA) Q-ToF에서 분석했다 (컬럼 : Atlantis C-18 nanoACQUITY, 75 um×20cm;

트랩 : 대칭 C-18, 200 μm×2cm).

A linear gradient of water to 50% acetonitrile running at 250 nl/min was used to elute the peptides from the column. Data

were analyzed with ProteinLynx Global Server 2.2.5 (Waters), Mascot (Matrix Sciences, London, U.K.) and PEAKS 4.0

(Bioinformatics Solutions, Ontario, Canada)

250 nl / min에서 실행되는 50 % 아세토니트릴에 대한 물의 선형 경도를사용하여 컬럼에서 펩티드를 추출했다.

데이터는 ProteinLynx Global Server 2.2.5 (Waters), Mascot (Matrix Sciences, 런던, 영국) 및 PEAKS 4.0

(Bioinformatics Solutions, Ontario, Canada)으로 분석되었다.

주)  [화학] acetonitrile (아세토니트릴) : 무색·유독·수용성의 액체, 합성·용제로 쓰임

Paraquat Treatment.

파리쿼트처리

주)Paraquat : (라콰트) 맹독성 제초제

Twenty-day-old workers were obtained by marking them with a paint dot and placing them in an indoor flight until collection.

Mated queens (≈1-month-old) were obtained from BeeWeaver (Navasota, TX) and maintained in an otherwise queenless

colony with young workers (“queen bank”) for 1 week.

20일령 일벌은 페인트 점으로 표시하여 확보하여 수집할 때까지 실내 비행 방에 배치하였다. 교미한 여왕벌

(≈1 개월 령)은 BeeWeaver (텍사스 주 나바소타)에서 얻었고, 그렇지 않으면 1주일 동안 유봉과 함께 여왕벌이

없는 봉군 (“퀸 뱅크”)에서 부양되었다.

Each queen was then placed in a Plexiglas cage with five attendant workers and maintained at 34°C on a 50% sucrose diet.

Marked workers were placed in identical cages (n = 20). Workers were injected with paraquat (1,1′-dimethyl-4,4′-bipyridinium

dichloride; N,N'-dimethyl-4,4′-bipyridinium dichloride) (Ultra Scientific, Hope, RI) to obtain a dose-response curve.

그런 다음, 각 여왕벌을 5마리의 일벌이 있는 플렉시글라스 케이지에 넣고 50 % 자당 식단으로 34°C를 유지했다.

표시된 일벌은 동일한 케이지에 두었다 (n = 20). 일벌에게 파라콰트 (1,1'-dimethyl-4,4'-bipyridinium dichloride;

N, N'-dimethyl-4,4'-bipyridinium dichloride) (Ultra Scientific, Hope, RI)를 주입하여 복용량 반응 곡선을 얻었다. 

We used a dose of 15 μg/μl (×10 higher than in ref. 7), which was the dose that resulted in greatest mortality over 3 days

(Fig. 5). This protocol minimizes stress due to long-term confinement.

우리는 15 μg / μl (참고문헌 7보다 10 배 높음)의 복용량을 사용했고, 이는 3일 이상 가장 큰 사망률을 기록한

복용량이었다 (그림 5). 이 프로토콜은 장기적 감금으로 인한 스트레스를 최소화한다.

To correct for differences in mass, queens were injected with a dose 70% > workers (25.5 μg/μl). Injections were made between

the second and third abdominal tergites (10 μl of flexifil microsyringe, UltraMicroPump II, and Micro4 microsyringe pump

controller; World Precision Instruments, Sarasota, FL).

질량의 차이를 수정하기 위해, 여왕벌에게 70% 이상의 일벌 (25.5μg / μl) 용량을 주사했다. 두 번째 및 세 번째

복부 등판(背板)(플렉시 필 마이크로 시린지, UltraMicroPump II 및 Micro4 마이크로 시린지 펌프 컨트롤러 10μl;

World Precision Instruments, Sarasota, FL) 사이에 주사를 했다.

Controls were injected with saline. n = 34 queens and 45 workers (paraquat); n = 12 queens and 15 workers (control).

Cages were censused every 4 h for the first 424 h and every 24 h thereafter. The experiment ended at 800 h.

대조군에는 식염수를 주입했다. n = 34 마리의 여왕벌과 45 마리의 일벌 (파라콰트); n = 12 마리의 여왕벌과

15 마리의 일벌 (대조군). 케이지는 처음 424 시간 동안 4 시간마다 조사하였고 이후 24 시간 마다 조사하였다.

실험은 800 시간에 끝났다.

JH Analog Treatment.

JH 유사체 치료.

One-week-old workers from a typical colony were treated topically on the dorsal abdomen with 200 μg of methoprene per

5 μl of acetone or 50 μg of JHIII per 5 μl of acetone and collected 24 later. This dose is known to be active in honey bees (25).

전형적인 봉군의 1주령 일벌 등쪽 복부에 아세톤 5μl 당 합성 유약호르몬 200μg 또는 아세톤 5μl 당 JHIII 50μg

으로 국소 처리하고 24 시간 후에 수집했습니다. 이 복용량은 꿀벌에서 활동적인 것으로 알려져 있다 (25).

One-week-old virgin queens were treated the same way and collected 24 h later. Queens were either placed individually in

small (≈1,000 adult bees) colonies (“colony queens”) or caged individually and held together in a queen bank, both of which

were in the field. All queens were derived from one queen inseminated with semen from one male.

1주일령 처녀 여왕벌은 같은 방식으로 처리하여 24 시간 후에 수집하였다. 여왕벌은 작은 (약 1,000 마리의 성봉)

봉군 ("봉군 여왕")에 개별적으로 배치되거나, 개별적으로 케이지에 넣어 두 마리 모두 들판에 있는 여왕벌 은행에

함께 보관되었다. 모든 여왕벌은 한 수벌의 정액으로 수정된 한 여왕에서 파생되었다.

Statistical Analyses. qRT-PCR.

통계 분석. qRT-PCR.

Analyses were performed on ΔΔCT values by using SAS version 8.2 for Linux (50).

Linux 용 SAS 버전 8.2 (50)를 사용하여 ΔΔCT 값에 대한 분석을 수행했다.

Paraquat treatment.

파라콰트 처리

Bees alive at 800 h were “right-censored” at that time. We compared Kaplan–Meier survival estimates among treatment groups

with both log-rank tests and Wilcoxon tests (SAS PROC LIFETEST). Results of both tests were consistent, so we report only the

P values given by the log-rank tests.

800 시간에 살아있는 꿀벌은 당시“우측 검열”을 받았다. 로그 순위 테스트와 Wilcoxon 테스트

(SAS PROC LIFETEST)를 사용하여 치료 그룹 간의 Kaplan–Meier 생존 평가를 비교했다. 두 테스트의 결과는

일관성이 있었으므로, 로그 순위 테스트에서 제공 한 P 값만으로 보고한다.

Effects of paraquat on queen and workers were analyzed with contrast coding within the parametric regression procedure

(SAS PROC LIFEREG) and the Cox proportional hazards procedure (PROC PHREG). For parametric models, we used the

generalized gamma distribution, which was supported by likelihood-ratio tests that compared different survival distributions.

여왕벌과 일벌에 대한 파라콰트(제초제)의 효과는 한계 회귀 절차 (SAS PROC LIFEREG) 및 Cox 비례 위험 절차

(PROC PHREG) 내에서 대조 코드화로 분석되었다. 한계 모델의 경우, 다양한 생존 분포를 비교하는 우도 비

테스트에서 지원되는 일반화된 감마 분포를 사용했다.

Acknowledgments

감사의 말

We thank K. Pruiett and T. Newman for expert assistance in the field and laboratory, respectively; D. B. Weaver (Weaver

Apiariaries, Navasota, TX) for queens; Victor Chan for tissue preparation; K. Hartfelder for Vg antibody; Peter M. Yau

(University of Illinois at Urbana–Champaign Proteomics Facility) for mass spectroscopic analysis; G. Amdam for advice; and

C. Kenyon and members of the K.A.H. and G.E.R. Laboratories for reviewing the manuscript. This work was supported by

National Institutes of Health/National Institute on Aging Grant AG022824 (to G.E.R. and K.A.H.).

우리는 각각 현장과 실험실에서 전문가의 도움을 주신 K. Pruiett와 T. Newman에게 감사드린다. 여왕벌을 대해 

D. B. Weaver (Weaver Apiariaries, Navasota, TX); 조직 준비를 위한 Victor Chan; Vg 항체에 대한 K. Hartfelder;

질량 분광 분석을 위한 Peter M. Yau (일리노이 대학교 Urbana–Champaign Proteomics Facility); G. Amdam의

조언; 그리고 C. Kenyon 및 K.A.H. 및 G.E.R. 원고 검토를 위한 실험실. 이 작업은 국립 보건원 / 국립 노화 보조금

AG022824 (G.E.R. 및 K.A.H.)에 의해 지원되었다.