산 포스파타제염색(B1182), 수단불랙-B염색(B1183), 철염색(B1185), 퍼옥시다제염색(B1186), PAS염색(B1187), 비특이성 에스터라제염색(B1188), 등(B1189) 각각
--------------------------
1. 산 포스파타제 염색
(1) 검사목적 : 산 포스파타제 염색은 급성백혈병의 아형분류 및 진단에 필수적.
(2) 검사방법 : 조혈세포내의 산 포스파타제는 Hydroxynaphtholic Anilides을 다양하게 가수분해할 수 있고, Diazonium Salt와 결합하여 Acidic pH상태에서 효과적인 불용성 Naphthol 복합체를 유리시켜 다홍색의 침전물을 만든다.
② 미성숙 백혈병세포에서 염색된 세포의 수를 계수하고, 백혈병의 유형을 판정한다.
2. 수단블랙 B 염색
(1) 검사목적 : 수단블랙 B 염색은 급성백혈병의 아형분류 및 진단에 필수적.
(2) 검사방법 : 백혈구의 중성지방, 인지질, 스테로이드 등의 지방성분이 수단블랙 B와 결합하여 색소침전물을 형성한다.
3. 철염색
(1) 검사목적 : 골수내 저장철 정도를 판단하거나 또는 철적아구성 빈혈의 진단에 이용된다.
(2) 검사방법 : 골수천자된 도말에 주로 시행하며 이온화 철이 Acid Ferrocyanide와 반응하여 Ferric Ferrocyanide를 형성하여 파랗게 염색되는 것이 현미경 판독한다.
① 염색의 정도관리로서 적절히 염색이 되었는지 판정한다.
② 철적아구를 판독하여 백분율을 계산하고, 비정상적인 철적아구의 존재 유무를 판정한다.
4. 퍼옥시다제 염색
(1) 검사목적 : 퍼옥시다제 염색은 급성백혈병의 아형분류 및 진단에 필수적이다. 성숙과정의 과립구, 아우어 소체와 호산구는 정상적으로 양성반응을 보이나 림프구, 호염구, 골수적아구는 음성소견을 나타내므로 급성백혈병의 감별에 이용된다.
(2) 검사방법 : 백혈구의 퍼옥시다제는 Hydrogen Peroxide에 대해 여러 가지 기질들의 산화반응에 촉매역할을 하는 효소로 효소활성도에 따라 Greenish-Brown Color의 염색물질을 형성한다. 미성숙 백혈병세포에서 염색된 세포의 수를 계수하고, 백혈병의 유형을 판정한다.
5. PAS염색 (Periodic Acid-Schiff)
(1) 검사목적 : PAS염색 양성반응은 Glycogen의 존재를 시사하며 정상 성숙과정의 과립구는 모든 성숙관계에서 양성반응을 보이나 림프구 및 정적아구에서는 음성반응을 보인다. 급성림프구성백혈병 및 급성골수구성백혈병의 감별시 필수적으로 필요한 염색방법이다. 미성숙 백혈병세포에서 염색된 세포의 수를 계수하고, 백혈병의 유형을 판정한다. 림프아구에서는 양성으로 염색되는 물질이 블록을 형성하는 등 특이소견을 나타낸다.
(2) 검사방법 : 백혈구 및 적아구에 존재하는 당단백에서 Carbohydrate기가 Periodic Acid에 의해 산화되어 Aldehyde기를 생성하고, 이것이 Schiff시약과 반응하여 붉은 자주색을 띤다.
6. 비특이성 에스터라제 염색
(1) 검사목적 : 비특이성 에스터라제 염색은 급성백혈병의 아형 분류 및 진단에 필수적이다. 정상 검체에서는 T-림프구와 단구사이의 NaF에 대한 감수성과 반응양상의 차이 때문에 이들 세포의 감별에 이용한다.
(2) 검사방법 : 백혈구의 에스터라제는 Naphthalene 유도합성물을 가수분해하여 Naphthol 복합체를 만드는데, 이것이 Diazonium Salt와 결합하여 색소 침전물을 형성한다.
7. 아미로이드(Amyloid) 염색
(1) 검사목적 : 일차성 또는 이차성 Amyloidosis의 진단시 꼭 필요한 염색방법.
(2) 검사방법 : 골수생검 또는 Clot Section으로 Thick Section을 만들어 Congo Red염색을 한 후, 광학현미경하에서는 Orange 색상을 나타내고 편광현미경하에서는 초록색상을 나타내는 것을 관찰한다.
8. 지방 염색
(1) 검사목적 : 급성림프아구성백혈병의 아형 결정시 필요한 특수염색법이다. 급성림프아구성백혈병의 아형 중 L3형에서 지방염색에 양성반응을 보이므로, 이를 감별하기 위하여 실시한다. 이 염색이 양성인 경우 예후가 매우 나쁘다.
(2) 검사방법 : Oil-Red O 염색법
9. 콜라겐 염색 & 레티클린 염색
(1) 검사목적 : 골수섬유화증 진단시 필수적인 특수염색법이다.
(2) 검사방법 : Masson's trichrome 법, Gomori 법, 레티클린의 증가 정도를 판독하여 골수섬유화의 진행 정도를 판정한다. 골수섬유화의 진행 정도 뿐 아니라 골수 섬유화가 레티클린 섬유화인가 콜라겐 섬유화인가 또는 일차성 섬유화인가 이차성 섬유화인가 등을 감별한다.
10. 톨루이딘블루 염색
(1) 검사목적 : 급성백혈병 중 호염기구성백혈병의 진단을 위하여 실시한다.
(2) 검사방법 : 호염기구와 비만세포의 Acid Muco Polysaccharide는 염기성 색소와 반응하므로서 Metachromatic 복합체를 형성한다. 호염기구성 백혈병은 일반 염색소견 만으로는 급성림프아구성백혈병과의 감별이 안되므로 본 염색을 실시하여 감별하여야 한다.
11. 특이성 에스터라제 염색
(1) 검사목적 : 급성백혈병의 아형분류 및 진단에 필수적이다.
(2) 검사방법 : 특이성 에스터라제에 의하여 기질인 Naphthol AS-D Chloroacetate는 가수분해되고, 이것이 Diazonium Salt와 결합하여 색소 침전물을 형성한다.
--------------------------
1. 골수천자 생검시마다 일률적으로 나-118(혈액특수염색)의 5종(비특이성에스터라제 염색, PAS염색, 퍼옥시다제염색, 수단블랙 B염색, 철염색)실시는 바람직하지 아니하며 상병에 따라 선택적으로 (2-3종 정도) 실시함을 원칙으로 함.
[임상병리과분위, 1986/12/04]
2. 골수검사는 적혈구계통의 빈혈, 백혈구계통의 골수기능장애 등이 의심될 때, 혈소판 계통의 자반증의심 등이 있을 때, 종양의 화학, 광선요법 등의 안정성을 검토하기 위해서도 실시함.
(1) 골수천자를 한후 일반골수검사를 한 경우에는 나-111(골수검사)의 소정금액만 산정함.
(2) 일반골수검사를 실시하고 골수로 조직절편을 제작하여 관찰한 경우에는 나-111-주-1(조직절편제작시 50% 가산)에 의거 나-111(골수검사)의 소정금액 150%에 해당하는 금액을 산정함.
(3) 골수검사 후 조직절편을 제작하여 관찰한 후에도 특수염색을 하여 관찰할 경우에는 나-111(골수검사)의 소정금액의 150%에 해당되는 금액과 나-118(혈액특수염색)의 소정금액을 염색종목에 따라 각각 산정할 수 있으나 반드시 필요한 종목만 선택적으로 실시하여야 함. [급여 31510-8544호, 1987/03/23]