4학년 미생물 실험 정리한거 자료인데 멜로 보내달라는 사람들 주소 잃어버렸다. 여기서 보시오.^^;;

[⑨⑥바보상용이]

미생물 실험과정(모두 만점 받으시오............^^**)

1.protease분해효소가 분비 될만한 토양에서 흙 50g채취.
--->채취한 흙을 저울에 1g달아서 그 다음 과정으로 거거!!

2. 현탁과정(생리식염수:saline=0.85%)
시험관 5개에 생리 식염수를 넣어 준비한 다음저울에 단 1g을 시험관에 넣고 단계희석을 한다.->요기 시험관에는 생리 식염수가 얼마나 들어가느냐 9ml들어가 있지요.
*생리 식염수(saline)-이 놈이 우리 중간고사때 아주 골치거리였죠 잊지 마시고용. 만드는 법은 소금 0.85g을 달아 물100cc에 넣어서 만들어 오토클레이브에 돌려서 순수분리하는 것이지요..그라죠~~~
*단계 희석- 이거 말 그대로 단계적으로 흙에 붙은 세균을 각각의 시험관을 옮겨가면서 세균의 양을 줄이는 것이지요.. 뭐 좋은 말은 아닌거 같지만 실험 수업 시간에 사용하는 말로 간단히 하자면 시험관 첫 번째에 sample 1g을 넣고 볼텍싱을 하는 겁니다.(마구 흔드는 것이지요.) 5분간 가만히 놔두면 이놈의 세균이 Nacl속에 섞여서 위로 뜹니다.(한마디로 세균을 정신없게 만드는 것이지요. 흔들리는 거 보니까 어지러울 거 같기도 하지만..^^*) 그놈의 시험관에서 1ml를 그 다음 시험관에 넣고 또 다시 넣고 이 과정을 반복하는 것입니다. 점점 세균의 양이 희석 되겠지요.

3. 이제 현탁과정이 끝이 났습니다. 쉽지요 ㅋㅋ 다음 과정으로 넘어 갑니다. 5개의 시험관 중 3개를 선택해서 마이크로 피펫을 이용하여 시험관의 0.1g을 amp-배지에 넣고 sperader(도말봉)을 이용하여 골고루 펴주는 겁니다.
*주의 : clean bench에서 실험 하시는거 아시져=>여타 세균의 오염을 방지하기 위해서 sperader(도말봉)으로 도말을 하는 이유는 콜로니들의 중복 방지.

4.이렇게해서 만들어진 3개의 샬레를 뒤집어서 인큐베이터(37 c) 안에서 오버나이트 시키고 다음날 실험하기 전까지 콜드챔버(세균 증식을 일정상태로 정지 시켜주는 기능)에 보관을 합니다.

5. 배양된 콜로니에 1번~50번까지 번호를 매깁니다.

6.카세인(casein) 배지를 준비하고 50번까지 씌어 있는 종이를 배지 뒤에 대고 각각의 표시된 번호의 중앙에 이쑤시게를 이용하여 순서대로 배지 찍어나 갑니다. *주의: 이쑤시게를 집을 때마다 멸균한 핀셋을 이용하여 조심스럽게 집어서 사용...^^*

7.이 작업이 다 끝난 카세인 배지를 인큐베이터에 넣고 오버나이트~~시킨다음 plaque가 가장 큰 세균을 찾습니다. *plaque(용균반):주변의 단백질을 분해하여 생긴 커다란 투명환.

8. 선택된 콜로니 하나를 백금이(platinum loop)를 이용하여 띄어낸다음 amp-배지에 지그제그로 (말로 쓰기 힘드네용...)살살 펴고 세균이 뭉치치않게 옆쪽에서도 지그 제그로 즉 서고 닿지 않게 긋는 것입니다. 이렇게 골고루 펴주는 작업을 한 종류의 세균이 나올 때까지 샬레를 옮겨가면서 반복합니다. 이렇게 해서 순수분리가 끝이 났습니다....

9. 그 다음은 해본 것은 이렇게 해서 나온 단일 콜로니를 이쑤시게를 이용하여 띄어낸 다음 slant 배지에 세균을 넣은 다음 water bath(37 c)에서 오버나이트~~ 그러면 단백질을 분해하는 세균만 마니마니 증식이 됩니다.---->3ml culture라고 하는데 미리리터인지 영어가 맞는지는 잘 모르겠습니다..^^;;

10.그 다음 DNA분리 과정인데 이 과정은 못 해 봤습니당...
그냥 보관하는 작업을 했는데 에펜도르프 튜뷰인지 하는 작은 튜뷰에 글리세롤0.2g과 배양된 세균 0.2g을 넣어 볼텍싱 한 다음 보관 창고로 갔습니다.......끝~~~~~


*** 정의 한것처럼 짤막하게 쓸려니 그게 말이 더 안만들어져 이렇게 썻습니다. 이 다음 정리는 가져 가져들 열 쉼~~~히 하시게들... 그리고 틀린게 있다거나 추가된 내용있다 하믄 아무나 알려줘 ..~!!! 혼자만 알려하지 말거ㅋㅋㅋ 공유하는 행복한 세상에 살고 싶퍼라...~~~

*** 잠아 어여 오거나 오후에 넘 잤는지 잠이 안온당...

*** 명윤아 명희도 보내달랬던거 같던데 이거라도 보게해라 나 혼나기 싫탕...^^;;

[96보현]

나 일등으로 가져간다 상용아~~~ 너의 기대에 부흥하여 꼭 만점 받으마~~~~

[96보현]

상용아 ~~~ 다른것도 올려줘~~~~~ 아님 따로 나를 주던지~~~~~

[97대처리]

후후 저더 가져가여~~~ 잘보께여... 움..근데 만점 받을수 있을까? ㅋㅋㅋ

[장나라♥짱]

허허 내가 다닐때 시험 문제 아닌가 이것은....ㅋㅋㅋ 참 재밌는 실험이었지... 지금은 하나두 기억이 안나지만

[[95]진섭]

보현, 대철..쉰내들.. 한발늦었군..삼용아 나두 만점~

[⑨⑥바보상용이]

그림은 못 올리겠다... 그림하고 같이보면서 하믄 딱일게야 그림은 가지고 있는거보시오..~~

[00현진이*^^*]

오빠 그냥 e-tube라고 하면되여~

[⑨⑥바보상용이]

땡쓰..^^현진아 조류학은 메일로 보냈는데 메일 확인 안하니...? 몇개는 없드라 쏘리용~~

[00현진이*^^*]

확인 했어요~ 고맙습니다~ 오빠글구여 보관은 -20도 예여~ 하나더 피펫은 그람을 잴수 없어요~ 100마이크로 도말이예여~ 백급이로 세균을 떼어 내는게아니구요 이쑤시게로 콜로니를 딴다은 카세인배지에긋고 난다음 백급이로 그어주는 거예요~

[⑨⑥바보상용이]

오~~중요한 지적이야....굿 다른 사람들이 봐야 할텐데...현진아 고마버..~~