RBM10 inhibits pancreatic cancer(췌장암의 발병억제제,치명적인 질병)- Xia Gao

[dhleepaul]

RBM10은 PD-1 발현을 통한 면역 회피를 억제하여 췌장암 발병을 억제합니다.

Xia Gao1,3#, Xiuqin Zhang2#, Junjie Huang1, Zhenyu Tan2, Jing Yang1, Liuhong Yuan2, Pengjun Wang1, Feier Chen2, Huiyan Wu2, Changyi Feng1, Hong Yu4,5

1. 중국 상하이 상하이 자오퉁 대학교 의과대학 퉁런 병원 병리학과.
2. 중국 상하이 퉁지대학교 의과대학 퉁지병원 병리학과.
3. 췌장 질환 연구소, 췌장 신생물을 위한 중개 연구의 상하이 핵심 연구소, 상하이 자오퉁 대학교 의과대학, 상하이 200025, 중국.
4. 병리학과, 난징 의과 대학 제휴 타이 저우 인민 병원, 타이 저우 225300, 장쑤 성, 중국.
5. 병리학과, Taizhou 임상 의학 대학, 난징 의과 대학, Taizhou 225300, Jiangsu, China.
# 동등한 기여.

✉ 교신저자: Kun Tao (taokun20119@163.com), Da Fu (fd12374@rjh.com.cn), Shisan Bao (profbao@homtail.com), Hong Yu (yuhong@njmu.edu.cn).

2025-2-3을 받았습니다. 수락됨 2025-6-21; 게시 날짜: 2025-7-4

Received 2025-2-3; Accepted 2025-6-21; Published 2025-7-4

Citation:

Gao X, Zhang X, Huang J, Tan Z, Yang J, Yuan L, Wang P, Chen F, Wu H, Feng C, Yu H, Bao S, Fu D, Tao K. RBM10 inhibits pancreatic cancer development by suppressing immune escape through PD-1 expression‎. J Cancer 2025; 16(10):3080-3093. doi:10.7150/jca.111459. https://www.jcancer.org/v16p3080.htm

인용:

Gao X, Zhang X, Huang J, Tan Z, Yang J, Yuan L, Wang P, Chen F, Wu H, Feng C, Yu H, Bao S, Fu D, Tao K. RBM10은 PD-1 발현을 통해 면역 탈출을 억제하여 췌장암 발병을 억제합니다. J 캔서 2025; 16(10):3080-3093. 도:10.7150/jca.111459. https://www.jcancer.org/v16p3080.htm

RBM10 inhibits pancreatic cancer development by suppressing immune escape through PD-1 expression‎

미주   메드라인   비텍스   참조관리자   리스(RIS)    다운로드 파일 가져오기 지침

RNA 결합 모티프 단백질-10(RBM10)은 췌장 선암종(PAAD)에서 중요한 역할을 하지만, 정확한 기전은 불분명합니다. 이번 연구는 RBM10이 췌장암 진행과 면역 조절에 미치는 역할을 조사하고 있다.

PAAD 환자의 췌장 조직에서 RBM10 발현은 웨스턴 블로팅(Western blotting), RT-qPCR 및 면역조직화학(immunohistochemistry)을 사용하여 평가되었으며, 인접 비암성 조직에 비해 췌장암 조직의 수치가 낮다는 것을 밝혔습니다. 이 결과는 췌장암 세포에서 RBM10 녹다운이 집락 형성, 이동 및 증식을 향상시킨 체외 실험과 일치하며, 이는 P-JAK1, P-JAK2 및 P-STAT3 수치 증가와 상관관계가 있습니다. 생물정보학(Bioinformatics)은 RBM10 관련 경로와 면역 변화를 확인했다. 더욱이, 암세포의 RBM10 결핍은 체외에서 자연살해세포(natural killer cell)의 PD-1 발현을 증가시켜 종양을 죽이는 능력을 감소시켰다. 그러나 JAK 경로 억제제를 사용한 치료AZD1480 암세포에 대한 NK 세포 독성을 회복시켰습니다.

마지막으로, RBM10의 높은 발현은 췌장암 환자에서 유리한 예후와 관련이 있었으며, 이는 RBM10이 NK 세포에서 PD-1 발현의 JAK-STAT 매개 조절을 통해 종양 면역 탈출을 억제함으로써 췌장암 진행을 억제하는 것으로 나타났습니다. 이 발견은 췌장암 관리에서 새로운 정밀 표적 치료법의 개발 가능성을 제공합니다.

키워드: PAAD, RBM10, JAK-STAT, PD-1, NK cell.

소개

췌장암은 5년 생존율이 낮은 매우 치명적인 질병으로, 상대적으로 낮은 발병률에도 불구하고 암 관련 사망의 두 번째 주요 원인입니다[1]. 종종 모호한 증상을 나타내기 때문에 조기 진단이 어렵습니다. 이는 부분적으로 뚜렷한 증상이 없고 민감도와 특이도가 높은 신뢰할 수 있는 진단 마커가 없기 때문입니다[2].

현재 췌장암의 관리에는 수술, 방사선 요법 및 면역 요법이 포함됩니다[3]. 수술만이 유일하게 가능한 치료법이지만, 재발 위험은 여전히 매우 높음에도 불구하고 수술적 개입으로 상당히 좋은 결과를 얻을 수 있는 환자는 20%에 불과합니다[2, 4]. 최근에는 분자 생물학의 발전으로 췌장암의 발생 및 발달에 대한 통찰력을 얻을 수 있게 되었으며, 특히 표적 치료를 위한 주요 바이오마커에 중점을 두어 광범위한 관심을 받고 있습니다[5, 6].

RNA 결합 단백질(RBP)은 RNA 접합, 전좌, 국소화 및 번역에 관여하는 중요한 세포 내 조절자입니다[7]. 그 중 RNA-binding motif(RBM) 단백질 계열은 암 발병과 관련된 비정상적인 발현으로 접합, 번역 및 안정성을 포함한 다양한 RNA 대사 과정에 참여합니다[7]. 특정 RBM 단백질은 암에서 뚜렷한 역할을 나타냅니다. 예를 들어, RBM5 과발현은 Beclin1, NF-kB/P65 및 Bcl-2를 조절하여 자가포식을 유도하고 폐 선암을 억제합니다[8]. RBM38은 PTEN 3'UTR 및 miR-92a-3p와 상호 작용하여 결장직장암의 진행을 억제합니다[9]. RBM43은 cyclin B1 mRNA를 부정적으로 조절하여 간세포 암종 진행을 억제합니다[10]. 반대로, RBM4는 NF-kB 활성화를 통해 간세포암의 혈관신생을 촉진하고 VEGF-A의 상향 조절을 촉진하며[11], RBM7은 CDK1 mRNA를 안정화하여 유방암 증식을 향상시킵니다[12]. 이러한 발견은 RBM 단백질이 상황에 따라 종양 억제 인자 또는 촉진자 역할을 하는 등 차별적인 역할을 한다는 것을 시사합니다.

RBM10은 RBM 단백질군의 중요한 구성원입니다. 주로 선택적 스플라이싱을 통해 유전자 전사를 조절하고 증식 및 세포사멸과 같은 세포 과정에 영향을 미칩니다[13]. RBM10 유전자의 돌연변이는 TARP 증후군과 밀접한 관련이 있으며, 다양한 암에서 TARP 증후군이 중추적인 역할을 한다는 점을 강조합니다. RBM10은 폐선암에서 RAP1/AKT/CREB 신호전달 경로를 통해 세포 증식을 억제합니다[14]. RBM10 결실은 EGFR 돌연변이 폐암에서 EGFR 억제제에 대한 내성과 관련이 있는데, 이는 EGFR 억제제에 의해 유도된 세포사멸을 감소시키는 BclxS/BclxL 비율 감소에 기인하는 것으로 보입니다[15]. 폐선암 환자에서 RBM10 발현과 생존 사이에는 상관관계가 있습니다. RBM10 돌연변이는 EGFR 돌연변이와 자주 공존하며, 유전자 돌연변이 및 스플라이싱 조절을 통해 폐 선암 진행에 영향을 미칩니다. RBM10 결핍성 폐선암에서 스플라이소좀 억제제와 EGFR 티로신 키나아제 억제제(Osimertinib)를 병용하면 치료 효능이 향상되고 약물 내성이 감소하여 유망한 치료 전략을 제공할 수 있습니다[16, 17].

또한, RBM10은 전이성 결장직장암 환자에서 더 짧은 무진행 생존과 관련된 단일 유전자 체세포 돌연변이와 관련된 종양 억제제로 제안됩니다[18]. 악성 조직, 특히 진행성 종양에서 하향 조절된 RBM10은 간세포암 환자의 예후를 낮추는 것과 관련이 있습니다[19]. 마찬가지로, 낮은 RBM10 발현은 유방암의 생존율 저하와 관련이 있습니다. RBM10 결실은 유방암 증식 및 이동을 크게 향상시켜 in vivo 누드 마우스에서 종양 성장을 가속화합니다[20]. RBM10은 Bcl2 발현을 억제하고 카스파제-3 활성을 촉진하며 TNF 생산을 증가시켜 U2OS 세포(골육종)에서 세포사멸을 유도합니다[21]. RBM10의 과발현은 골육종 세포의 증식, 군집 형성, 이동 및 침입을 감소시킵니다[21].

RBM10이 췌장암에서 항종양 역할을 하는 것으로 나타났지만[22, 23], 그 정확한 기전은 아직 잘 알려져 있지 않습니다. 따라서 우리는 췌장암에서 RBM10의 생물학적 기능과 그것이 작동하는 잠재적인 메커니즘을 조사하는 것을 목표로 했습니다.

재료 및 방법데이터 처리 및 분석

TCGA에서 178명의 췌장 선암(PAAD) 환자에 대한 mRNA 전사체 데이터 및 임상 정보를 다운로드하고, CPTAC에서 135명의 PAAD 환자에 대한 데이터를 다운로드했습니다. 우리는 112개의 유전자로 구성된 RBM 계열에 대한 유전자 세트를 컴파일했습니다. 종양 샘플은 RBM10 생존 분석의 최적 컷오프에 따라 RBM10 고발현 및 저발현 그룹으로 분류되었습니다. 차등적으로 발현된 mRNA(DEmRNA)는 P < 0.05 및 |FC| > 2. RBM10 발현과 임상 지표 간의 상관관계를 조사하기 위해 TCGA의 임상 데이터도 분석했습니다.

시료 채취

우리는 상하이 자오퉁 의과대학 루이진 병원(Ruijin Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine)에서 30명의 PAAD 환자로부터 암 및 신생물 조직 샘플을 수집했습니다. 포함 기준: 1. PAAD의 병리학적으로 확인된 진단을 받은 18-75세; 2. 다른 악성 종양의 조합이 없습니다. 배타적 기준: 1. 자가면역 질환을 앓고 있는 자가면역 질환을 앓고 있는 경우; 2. 면역억제 요법을 받고 있습니다. 수술 전에 각 환자로부터 사전 동의를 얻었으며, 환자는 진단 목적 외에도 일부 샘플이 비식별화 방식으로 의료 연구에 사용될 것임을 알렸습니다. 연구 프로토콜은 설명된 대로 Shanghai Jiao Tong University School of Medicine의 Ruijin 병원 윤리 위원회의 승인을 받았습니다[24].

RNA 추출 및 Real-time 정량 역전사 PCR(RTq-PCR)

조직 또는 세포로부터의 총 RNA는 SteadyPure Rapid RNA Extraction Kit(Accurate Biology, 중국)를 사용하여 추출하였다. RNA 순도 및 농도를 측정한 후 qPCR용 HiScript III All-in-one RT SuperMix Perfect(Vazyme, China)를 사용하여 RNA를 cDNA로 역전사했습니다. qPCR 분석은 ChamQ SYBR qPCR 마스터 믹스(Vazyme, 중국)를 사용하여 수행했습니다. 프라이머 서열은 표 S1에 제공되어 있다.

웨스턴 블로팅

웨스턴 블롯은 앞서 설명한 대로 수행되었습니다[25]. 간략히, 프로테아제 및 포스파타제 억제제를 함유한 RIPA 완충액(Epizyme Biomedical, 중국)으로 세포를 용해하여 총 단백질을 추출했습니다. 단백질을 SDS-PAGE로 분리하여 PVDF 멤브레인으로 옮기고 4°C에서 1차 항체와 함께 밤새 배양했습니다. TBST로 세척한 후 2차 항체를 도포하고 실온에서 1시간 동안 배양하였다. 단백질 띠는 Tanon-5200 화학발광 시스템(중국 Tanon)을 사용하여 검출했으며, ImageJ 소프트웨어를 사용하여 그레이 스케일 분석을 수행했습니다. 1차 항체 세부 정보는 표 S2에 나와 있습니다.

세포 배양

PANC-1 및 PATU-8988(인간 췌장암 세포주) 및 HEK-293T(인간 배아 신장 세포주)는 중국과학원 상하이 생명공학연구소 세포자원센터에서 구입했습니다. NK96MI (NK 세포주) 세포는 HyCyte (Suzhou, China)로부터 수득하였다. PANC-1, PATU-8988 및 HEK-293T 세포를 10% 소 태아 혈청과 1% 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 DMEM 배지에서 배양했습니다[26]. NK96MI 세포는 특수 완전 배지(HyCyte, China)에서 배양되었습니다[27]. 모든 세포는 5% CO₂를 함유한 가습 인큐베이터에서 37°C로 유지되었습니다.

Cell Transfection 및 안정적인 세포주 생성

HEK-293T 세포를 6-well plate에 파종하고 세포 confluence가 ~70%에 도달하면 배지를 well당 새로운 2mL의 DMEM complete medium으로 교체했습니다. 형질주입 혼합물(3:2:4 + 4μL Lipo8000™ 형질주입 시약, Beyotime, 중국의 PMD2G:psPAX2:target plasmid ratio에서 125 μL DMEM + 2.5 μg DNA)을 제조하고, 부드럽게 혼합하고, 각 웰에 첨가하였다. 배지는 8시간마다 새로 고쳐졌습니다. ~50% confluence에서 파종된 PATU-8988 및 PANC-1 세포를 웰당 1mL의 상층액, 1mL의 DMEM 완전 배지 및 2μL 폴리브레렌(Beyotime, China)으로 형질주입했습니다. 현미경으로 transfection 효율을 관찰한 후, 배지를 교체하고 설명된 대로 선택을 위해 puromycin을 첨가했습니다[28]. 플라스미드 서열은 표 S3에 제공되어 있습니다.

CCK-8 분석

형질주입된 세포를 1 x 10³ 세포/웰의 밀도로 100μL의 DMEM 완전 배지에 재현탁시키고 96웰 플레이트에 시딩했습니다. Cell Counting Kit-8(CCK-8, Meilunbio, China)을 사용하여 24시간마다 세포 생존율을 평가했습니다. 37°C에서 2시간 동안 CCK-8 시약으로 세포를 배양한 후 마이크로플레이트 리더를 사용하여 450nm에서의 흡광도를 측정했습니다. 측정은 설명된 대로 5일 연속으로 매일 기록되었습니다[29].

집락 형성 분석

형질주입된 세포를 6-well 플레이트에서 1×10³ cells/well에 파종하고 7-14일 동안 배양하며, 배지 변화 및 3일마다 세포 모니터링을 수행했습니다. 콜로니 형성 시, 세포를 PBS로 세척하고, 30분 동안 4% 파라포름알데히드로 고정하고, 10분 동안 1mL의 크리스탈 바이올렛으로 염색하고, 물로 헹구고, 공기 건조하고, 콜로니 카운팅을 위해 사진을 찍었습니다.

Transwell Migration Assay

형질주입된 세포를 분해, 원심분리 및 1×10⁵ cells/mL의 농도로 무혈청 DMEM에 재현탁시켰습니다. 웰당 500μL의 DMEM 완전 배지로 24웰 플레이트를 준비한 후 코닝 챔버(챔버당 300μL의 세포 현탁액)를 삽입했습니다. 24시간 배양 후, 세포를 4% 파라포름알데히드로 30분 동안 고정하고, PBS로 세척하고, 10분 동안 크리스털 바이올렛으로 염색하였다. 내부 챔버 표면의 잔류 얼룩을 면봉으로 제거하고 챔버를 공기 건조했습니다. 그런 다음 현미경으로 세포를 관찰하고 설명된 대로 계수를 위해 사진을 찍었습니다[29].

세포독성 분석

종양 세포는 NK92MI 세포와 공동 배양되었으며, 설명된 바와 같이 세포독성 LDH Assay Kit(MCE, USA)를 사용하여 세포 독성을 평가했습니다[30]. 각 그룹에는 6개의 복제 웰이 포함되었으며, GraphPad Prism(버전 8.3.0)을 사용하여 결과를 분석하고 플로팅했습니다.

DemRNA의 기능 강화 분석

TCGA 및 CPTAC 데이터베이스의 PAAD 환자는 RBM10 발현이 높거나 낮은별로 그룹화되었습니다. 차등 유전자 분석은 역치가 |FC|>2 및 P<0.05. 결과 유전자 목록은 R 패키지 "ggplot2"로 시각화된 유전자 온톨로지(GO) 및 KEGG 경로 분석을 위해 DAVID 데이터베이스에 업로드되었습니다. RBM10의 유전자 세트 농축 분석(GSEA)도 R을 사용하여 수행 및 시각화했습니다.

동물

RBM10fl/fl/Pdx1-cre 마우스 및 C57BL/6J 마우스는 Model Organisms Centre(중국 상하이)에서 구입했습니다. 마우스는 SPF 조건에서 24°C의 온도, 35%의 상대 습도를 가진 케이지(케이지당 6마리의 마우스)에 수용되었습니다. 모든 실험 절차는 상하이 자오퉁 대학교 의과대학 퉁런 병원 윤리 위원회의 승인을 받았습니다.

면역 관련 분석

RBM10 발현과 종양 면역 사이의 관계를 조사하기 위해 CIBERSORTx(https://cibersortx.stanford.edu/)를 사용하여 22개 면역 세포의 침투를 분석하고[31] R 소프트웨어로 결과를 시각화했습니다. RBM10과의 상관관계를 평가하기 위해 Sangerbox(http://sangerbox.com/)에서 "StromalScore", "ImmuneScore" 및 "ESTIMATEScore"를 포함한 면역 점수를 얻었습니다[32]. RBM10과 면역조절 및 면역 관문 유전자 간의 관계는 각각의 분석 모듈을 사용하여 조사되었습니다. 또한 TIMER(https://cistrome.shinyapps.io/timer/)를 사용하여 RBM10 유전자 복제 수와 면역 세포 침투 사이의 연관성을 분석했습니다[33].

면역조직화학(IHC)

수집된 조직을 4% 파라포름알데히드에 24시간 동안 고정하고 파라핀에 묻고 4μm 두께의 절편으로 절단했습니다. IHC는 앞서 설명한 바와 같이 수행되었습니다[34-36]. 면역 표지된 슬라이드를 현미경으로 관찰하고 이미지를 캡처했습니다.

멀티플렉스 면역조직화학(mIHC)

다중 면역조직화학(Multiplex immunohistochemistry)은 기술된 바와 같이 수행되었다[37]. 간단히 파라핀을 제거한 절편을 처리하고, 4°C에서 하룻밤 동안 1차 항체를 배양하였다. 다음날, 2차 항체를 첨가하여 실온에서 30분 동안 배양한 후 플루오레세인을 20분 동안 첨가했습니다. 항원 복구 후 차단 용액을 실온에서 2시간 동안 다시 배양한 후 1차 항체를 교체하고 4°C에서 밤새 배양했습니다. 3일째에는 2차 항체를 적가하여 실온에서 30분 동안 배양한 후 플루오레세인을 대체하여 실온에서 20분 동안 배양한 후 DAPI 염료 함유 실러(Beyotime, China)를 적가하여 밀봉 처리를 하였다. 염색 결과는 형광 현미경으로 관찰하고 이미지를 기록했습니다. 다중 형광 염색 키트(AiFang biological, 중국)를 사용했습니다.

통계 분석

통계는 설명된 대로 수행되었습니다[34-36, 38]. 미분 발현은 R 소프트웨어(4.3.1) 및 GraphPad Prism(8.3.0)을 사용하여 분석했습니다. 그룹 차이를 평가하기 위해 쌍체를 이루지 않은 t-검정, 일원 분산 분석 및 카이제곱 검정을 적용했으며, P < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.

결과RBM10은 PAAD에서 낮게 발현되며 환자의 예후가 양호합니다.

TCGA 데이터베이스의 PAAD 환자 178명의 데이터 세트를 사용하여 R 소프트웨어(CUTOFF > 0, P < 0.05)에서 계산된 최적 컷오프 값으로 생존 분석을 수행하여 12,126개의 후보 유전자를 식별했습니다. CPTAC 데이터베이스에서 135명의 PAAD 환자 데이터 세트에 동일한 방법을 적용하여 6,285개의 후보 유전자를 식별했습니다. 이 두 데이터 세트는 RBM 계열 유전자 세트(112개 유전자 포함)와 교차하여 표적인 RBM10의 최종 선택으로 이어졌습니다(그림 1A). RBM10 발현에 대한 최적 컷오프 값은 R 소프트웨어에서 계산되었으며 종양 샘플은 RBM10 높은 발현 그룹과 낮은 발현 그룹으로 나뉘었습니다. 생존 분석에서는 RBM10 발현이 낮은 환자의 생존율이 더 나쁜 것으로 나타났습니다(P < 0.05)(그림 1B, C).

TCGA 데이터베이스에 있는 PAAD 환자의 데이터를 사용하여 RBM10 발현은 환자의 T 병기, 임상 병기 및 연령(모두 P < 0.05)과 관련이 있는 것으로 밝혀졌지만(그림 1D-F), 림프절 전이, 원격 전이 또는 성별과는 관련이 없는 것으로 나타났습니다(그림 S1).

PAAD 환자의 암 및 준암 조직에 대한 웨스턴 블롯 분석은 암 조직에서 RBM10 발현이 감소된 것을 보여주었습니다(그림 1G). RBM10의 단백질 발현 수준은 14쌍의 환자 암 및 주암성 조직에 대한 RT-qPCR 분석과 일치했으며, PAAD 조직의 RBM10 mRNA 수준이 주암성 조직(P < 0.01)보다 낮다는 것을 보여주었습니다(그림 1H).

또한, PAAD 환자의 암 및 부암 조직 30쌍에 대한 IHC 염색은 췌장암 조직에서 RBM10 발현이 주암성 조직에 비해 약 15% 감소하는 것을 보여주었습니다(P < 0.05)(그림 1I, J).

RBM10 결핍은 췌장암 세포의 증식과 이동을 촉진합니다.

췌장암에서 RBM10의 역할을 탐구하기 위해 췌장암 세포주에서 RBM10 knockdown을 수행했습니다. 이러한 조작된 세포에 대한 RT-qPCR 및 웨스턴 블롯 분석은 RBM10의 발현이 다른 암 세포주에 비해 PATU-8988 및 PANC-1 췌장암 세포에서 더 높다는 것을 보여주었습니다(그림 1). 2 개A, B)입니다. 따라서 후속 실험을 위해 PATU-8988 및 PANC-1 세포를 선택했습니다. 세포의 성공적인 형질주입은 RT-qPCR 및 웨스턴 블롯에 의해 확인되었으며, 효과적인 RBM10 녹다운을 보여주었습니다(그림 1). 2 개C, D)입니다. CCK-8 분석은 RBM10 knockdown 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포의 생존율이 약 1.5배까지 유의하게 증가한 것으로 나타났으며, 이는 성공적인 knockdown 및 췌장암 세포 증식 촉진을 시사합니다(P < 0.05)(Fig. 2 개E). 군집 형성 분석은 RBM10 녹다운 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포에 의해 형성된 집락의 수가 약 1.8배 현저하게 증가했음을 보여주었다(P < 0.05)(그림 1). 2 개F). Transwell Migration Assay는 RBM10 knockdown 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포의 이동이 대조군에 비해 거의 1.5배 유의하게 향상되었음을 보여주었습니다(P < 0.05)(그림 1). 2 개G).

그림 1 

RBM10은 PAAD에서 낮게 발현되며 환자의 예후가 양호합니다.답. TCGA 및 CPTAC 데이터베이스에서 PAAD 관련 생존 분석 결과와 RBM 단백질 패밀리 유전자의 교차점을 보여주는 벤 다이어그램; 나. TCGA 데이터베이스에서 PAAD 환자의 RBM10 발현을 기반으로 한 전체 생존의 Kaplan-Meier 곡선; C. CPTAC 데이터베이스에서 PAAD 환자의 RBM10 발현을 기반으로 한 전체 생존의 Kaplan-Meier 곡선; 디에프. TCGA 데이터베이스에서 RBM10 발현과 관련된 PAAD의 임상병리학적 특징: T 단계(D), 임상 단계(E), 연령(F); 사. 6명의 PAAD 환자의 암 및 준암성 정상 조직에서 RBM10 발현의 웨스턴 블롯 검출; 아. 14명의 PAAD 환자의 암 및 준암 조직에서 RBM10 발현의 RT-qPCR 검출; I-J. PAAD 환자의 암 및 준암 조직에서 RBM10의 IHC 염색에 대한 대표적인 이미지 및 정량적 결과. 기준자: 20 μm.

그림 2 

RBM10의 결실은 췌장암 세포의 증식과 이동을 촉진합니다. 에이브. RT-qPCR(A) 및 웨스턴 블롯(B)에 의해 측정된 일반적인 췌장암 세포주에서 RBM10의 발현 수준; C-D. RT-qPCR(C) 및 웨스턴 블롯(D)으로 평가한 PATU-8988 및 PANC-1 세포의 RBM10 녹다운 검증; 마. PATU-8988 및 PANC-1 세포에서 RBM10 녹다운 후 세포 생존율을 보여주는 CCK-8 분석; 에프. PATU-8988 및 PANC-1 세포에서 RBM10 녹다운 후 집락 형성 분석; 사. PATU-8988 및 PANC-1 세포에서 RBM10 knockdown 후 트랜스웰 이동 분석.

PAAD의 RBM10 관련 기능 강화 분석

췌장 선암에서 RBM10의 역할을 이해하기 위해 TCGA 및 CPTAC 데이터베이스의 췌장 선암종 샘플을 사용하여 RBM10 관련 유전자의 기능 농축 분석을 수행했습니다. TCGA 데이터베이스에서 28건의 사례에서 높은 RBM10 발현을 보인 반면, 150건의 사례는 낮은 RBM10 발현을 보임으로써 568개의 차등 유전자(|FC| > 1, P < 0.05)를 포함하여 406개의 현저하게 상향 조절된 유전자와 162개의 현저하게 하향 조절된 유전자를 포함한다(그림 3A). CPTAC 데이터베이스에서 76건의 사례에서 높은 RBM10 발현을 보였고 59건의 사례에서 낮은 RBM10 발현을 보여 28개의 차등 유전자(|FC| > 1, P < 0.05), 그 중 5개는 유의하게 상향 조절되었고 23개는 유의하게 하향 조정되었습니다(그림 3B).

두 세트의 차등 유전자를 결합하여 DAVID 웹사이트(https://david.ncifcrf.gov/)를 사용하여 관련 GO 및 KEGG 경로를 분석했습니다. 이러한 차등 유전자는 주로 세포-세포 상호 작용 및 면역 반응과 관련된 생물학적 과정과 관련이 있으며(그림 3C), 세포 외 영역 및 원형질막과 같은 세포 구성 요소(그림 3D) 및 단백질 결합과 관련된 분자 기능(그림 3E)과 관련된 분자 기능에서 주목할 만한 변화가 있었습니다. KEGG 경로 분석은 여러 염증 및 면역 관련 경로에서 농축을 밝혔습니다(그림 3F).

그림 3 

췌장 선암에서 RBM10 관련 기능의 농축 분석. A. TCGA 데이터베이스의 췌장 선암 환자에서 높은 RBM10 발현 그룹과 낮은 RBM10 발현 그룹 간의 차등 유전자 발현에 대한 화산 플롯. 나. CPTAC 데이터베이스의 췌장 선암 환자에서 높은 RBM10 발현 그룹과 낮은 RBM10 발현 그룹 간의 차등 유전자 발현에 대한 화산 플롯. 기상청. 차등 유전자의 유전자 온톨로지(GO) 분석: 생물학적 과정(C), 세포 구성 요소(D) 및 분자 기능(E). 에프. 차등 유전자의 KEGG 경로 분석. 사. 높고 낮은 RBM10 발현 그룹의 유전자 세트 농축 분석.

또한 R 소프트웨어를 사용한 GSEA 분석은 JAK-STAT 신호 경로, PD-L1 발현 및 PD-1 체크포인트 경로, 케모카인 신호 경로를 포함한 여러 암 및 면역 관련 신호 경로에서 농축을 확인했습니다(그림 3G).

RBM10 결핍은 췌장에 영향을 미칩니다.

생체 내에서 RBM10의 역할을 탐구하기 위해 췌장 특이적 RBM10 녹아웃 마우스 모델을 생성했습니다. RBM10 유전자의 엑손 3 측면에 있는 비암호화 영역에 LoxP 부위를 삽입하여 RBM10 조건부 녹아웃 마우스를 생성하고, 이어서 췌장 특이적 Pdx1-Cre 마우스와 교배하여 췌장 특이적 RBM10 녹아웃 마우스(RBM10fl/fl; Pdx1-CREr)를 참조하십시오(그림 4A, B). RT-qPCR(그림 4C) 및 웨스턴 블롯(그림 4D)은 췌장 조직에서 RBM10의 특이적 결실을 확인했으며, 이는 IHC 염색을 통해 추가로 검증되었습니다(그림 4E).

그림 4 

RBM10 결실은 췌장에 영향을 미칩니다. ᅡ. RBM10 조건부 녹아웃 모델의 개략도; 나. RBM10fl/fl의 개략도; Pdx1-cre 마우스 구성물; 다. RBM10fl/fl의 다양한 기관에서 RBM10 mRNA 발현; Pdx1-cre 마우스 및 WT 마우스; 디. RBM10fl/fl의 다양한 기관에서 RBM10 단백질 발현; Pdx1-cre 마우스 및 WT 마우스; 마. RBM10fl/fl의 다양한 기관에서 RBM10 발현; Pdx1-cre 마우스 및 WT 마우스; 에프. RBM10fl/fl에서 췌장 조직의 형태학적 구조; 다른 시점의 Pdx1-cre 마우스; 사. RBM10fl/fl에서 다양한 기관의 형태학적 구조; Pdx1-cre 마우스 및 WT 마우스; 눈금 막대 : 20μm.

RBM10fl/fl 마우스의 췌장에 대한 조직병리학적 분석은 생후 7개월에 경미한 섬유증 및 염증성 세포 침투를 동반한 acinar 세포의 국소적 감소와 관 상피 세포의 증가를 보여주었습니다. 이러한 증상은 9개월까지 진행되었지만, 관샘의 구조와 핵 대 세포질 비율은 정상으로 유지되어 RBM10 결실이 췌장 조직에 부정적인 영향을 미친다는 것을 시사합니다(그림 4F).

RBM10fl/fl의 다른 주요 기관에서는 유의한 병리학적 변화가 관찰되지 않았다. Pdx1-Cre 마우스와 야생형 마우스(그림 4G) 비교. 이는 RBM10의 부재가 주로 췌장에 영향을 미쳐 특정 병변의 발생으로 이어진다는 것을 나타냅니다.

PAAD에서 RBM10의 면역학적 특성 분석

RBM10과 췌장 선암(PAAD)에서 면역 침윤 사이의 관계를 이해하기 위해 TCGA 데이터베이스의 PAAD 데이터를 분석했습니다. CIBERSORTx 온라인 도구(https://cibersortx.stanford.edu/)를 사용하여 면역 세포 침투를 평가하고 R 소프트웨어를 사용하여 결과를 시각화했습니다. 이 분석을 통해 RBM10 발현이 NK 세포, 수지상 세포(DC), 비만 세포, 호중구 및 CD4+ T 세포의 침투와 관련이 있음을 밝혔습니다(그림 5A). 이들 세포 중에서도 NK 세포 침투의 차이가 가장 두드러졌는데, RBM10 발현이 높은 그룹이 RBM10의 저발현 그룹에 비해 훨씬 더 높은 침투율을 보였습니다(그림 5A).

또한 Sangerbox(http://sangerbox.com/)의 면역 침투 분석 모듈을 사용하여 "StromalScore", "ImmuneScore" 및 "ESTIMATEScore"를 얻었습니다. RBM10 발현은 세 가지 점수 모두와 유의하게 음의 상관관계가 있는 것으로 나타났습니다(그림 5B-D).

그림 5 

PAAD에서 RBM10의 면역학적 특성화. A. RBM10 발현과 다른 면역 세포의 침투 사이의 상관관계. 나. RBM10 발현과 기질 점수 간의 상관 관계. 다. RBM10 발현과 면역 점수의 상관관계. 라. RBM10 표현식과 ESTIMATE 점수 간의 상관 관계. 마. RBM10 유전자 변형(예: 복제 수 변이)과 면역 세포 침투 간의 상관관계는 TIMER를 사용하여 분석되었습니다. 에프. RBM10 발현과 면역 관문 유전자 간의 상관관계. 사. RBM10 발현과 면역조절 유전자 사이의 상관관계.

다음으로 온라인 도구인 TIMER(https://cistrome.shinyapps.io/timer/)를 적용하여 PAAD에서 RBM10 유전자 복제 수와 면역세포 침투의 관계를 분석했습니다. 그 결과, RBM10 복제 수 변화와 여러 면역 세포 유형의 침투 수준 사이의 상관관계가 입증되었습니다(그림 5E).

마지막으로, RBM10 발현과 면역 관문 유전자 및 면역 조절 유전자 간의 관계를 조사하여 두 범주 모두에서 여러 유전자와 유의미한 상관관계를 확인했습니다(그림 5F, G).

낮은 RBM10 발현은 NK 세포의 PD-1 발현에 영향을 미쳤습니다.

면역침투 분석은 PAAD 샘플에서 높은 RBM10 발현과 NK 세포 침투 증가 사이에 유의미한 연관성이 있음을 밝혔습니다(그림 5A). 이 데이터는 CD56과 RBM10 발현 사이의 상관관계를 밝혔습니다: RBM10 발현이 낮은 PAAD 환자의 조직에서 RBM10 발현이 높은 환자에 비해 CD56 발현이 감소했습니다(그림 6A).

다음으로, RBM10-knockdown PAAD 세포를 NK92MI(NK 세포주) 세포와 공동 배양했습니다. PAAD 세포에 대한 NK92MI 세포의 사멸 효과는 대조군에 비해 RBM10 녹다운 후 현저히 약화(~20%, P < 0.05)되었습니다(그림 6B). 또한 RT-qPCR과 웨스턴 블롯을 사용하여 공동 배양 후 NK92MI 세포에서 PD-1 발현 수준을 측정하여 공동 배양 후 NK92MI 세포에서 PD-1 발현이 상향 조절되었음을 보여주었습니다(그림 6C, D).

낮은 RBM10 발현은 JAK-STAT 경로를 통해 NK 세포 고갈을 촉진했습니다.

GSEA 분석에서 관찰된 JAK-STAT 경로의 유의미한 변화를 감안하고, JAK1 및 JAK2의 활성화가 PD-L1 발현을 상향 조절하여 NK 세포에 대한 종양 세포 감수성을 억제한다는 점을 고려하여[39], RBM10 녹다운 세포주에서 JAK-STAT 신호 전달 경로의 변화를 조사했습니다. 웨스턴 블롯 분석은 RBM10 knockdown 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포 모두에서 P-JAK1, P-JAK2 및 P-STAT3의 발현이 상향 조절되는 것을 보여주었습니다(그림 7A).

JAK-STAT 경로의 조절이 필수적인지 여부를 결정하기 위해 in vitro에서 RBM10-knockdown 췌장암 세포의 배양 배지에 JAK 경로 억제제 AZD1480를 추가했습니다. 그 결과, RBM10 녹다운에서 관찰된 세포 증식 및 이동의 현저한 증가가 AZD1480 처리 후 약화되었음을 보여주었습니다(그림 7B-E). 마찬가지로, AZD1480는 공동 배양에서 RBM10-knockdown PAAD 세포에 대한 NK92MI 세포의 사멸 효과를 복원했습니다(그림 7F). 이러한 복원은 RT-qPCR 및 WB 분석에서 볼 수 있듯이 NK 세포에서 PD-1 발현의 감소와 일치했습니다(그림 7G, H).

그림 6 

낮은 RBM10 발현은 NK 세포의 PD-1 발현에 영향을 미친다. PAAD 환자의 조직에서 RBM10 및 CD56 발현에 대한 mIHC 염색 결과; 나. LDH 분석에 의해 검출된 PAAD 세포에 대한 NK92MI 세포의 세포 독성; C-D. 공동 배양 후 NK92MI 세포에서 PD-1 발현에 대한 RT-qPCR(C) 및 WB(D) 분석.

그림 7 

낮은 RBM10 발현은 JAK-STAT 경로를 통해 NK 세포 고갈을 촉진했습니다. A. RBM10 knockdown 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포에서 JAK-STAT 경로 관련 단백질 발현의 웨스턴 블롯(WB) 검출. 나. RBM10 knockdown 및 JAK 경로 억제제 AZD1480 처리 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포에서 JAK-STAT 경로 관련 단백질 발현의 WB 검출. 다. RBM10 knockdown 및 AZD1480 처리 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포의 CCK-8 분석. 디. RBM10 knockdown 및 AZD1480 처리 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포의 집락 형성 분석. 마. RBM10 knockdown 및 AZD1480 처리 후 PATU-8988 및 PANC-1 세포의 Transwell 분석. 에프. AZD1480 처리 후 공동 배양에서 LDH 방법으로 검출된 PAAD 세포에 대한 NK92MI 세포의 세포 독성. 지-H. 공동 배양 시스템에서 AZD1480 처리 후 NK92MI 세포에서 PD-1 발현의 RT-qPCR(G) 및 WB(H) 검출.

토론

췌장암은 5년 생존율이 10% 미만으로 예후가 좋지 않습니다[1, 2]. 이는 주로 서서히 발병하고 민감도와 특이도가 높은 신뢰할 수 있는 조기 진단 접근 방식이 부족하기 때문입니다. 따라서 RBM 단백질과 같은 새로운 바이오마커를 식별하는 것은 조기 발견 및 환자 결과를 개선하는 데 필수적입니다.

다양한 RNA 대사 과정에 관여하는 RBM 단백질은 암 발병과 밀접한 관련이 있는 비정상적인 발현 및 기능 장애를 나타냅니다[7]. RBM 계열의 중요한 구성원인 RBM10은 RBM10 유전자의 돌연변이로 인해 발생하는 희귀 X-연관 유전 질환인 TARP 증후군과의 연관성으로 인해 초기에 주목을 받았습니다[40]. RBM10은 암 발병에 다양한 역할을 합니다. 예를 들어, RBM10을 표적으로 삼으면 자궁내막암의 진행을 촉진하는 반면, 담관암의 발병은 억제합니다[41]. 이러한 결과는 종양 생물학에서 RBM10의 맥락 의존적 역할을 강조합니다.

본 연구는 인간 췌장암 조직에서 RBM10 발현이 감소했음을 입증했습니다. 특히 RBM10의 높은 발현은 예후 개선과 관련이 있었으며, 이는 RBM10의 종양 억제 역할을 시사합니다. 이러한 관찰은 RBM10 녹다운이 췌장암 세포의 생존력, 군집 형성 및 이동을 증가시킨다는 것을 보여주는 시험관 내 연구에 의해 뒷받침됩니다. 이러한 발견은 췌장암 세포의 증식과 이동을 조절하는 RBM10의 중요한 역할을 강조한다.

질병에서 RBM10의 기능을 더 자세히 조사하기 위해 RBM10 녹다운 마우스를 연구했습니다. 이 마우스는 폐포(공기주머니)의 국부적인 감소와 선관 상피(조직 내막관)의 증가를 보였습니다. 또한, 경미한 섬유증(흉터)과 염증성 세포 침투가 관찰되었는데, 이는 나이가 들면서 악화되었습니다. 이러한 결과는 RBM10이 정상적인 췌장 발달에 중요하다는 것을 시사합니다. 본 연구의 데이터는 RBM10 돌연변이가 심장, 뇌 및 사지 발달에 영향을 미치는 TARP 증후군을 유발한다는 보고와 일치합니다[42]. 이러한 조절 장애는 RBM10과 접합 부위 근처의 RNA와의 상호 작용에 의해 매개될 가능성이 높으며, 잠재적으로 기능의 상실 또는 획득으로 이어질 수 있습니다[43].

이러한 관찰에도 불구하고, RBM10-넉다운 마우스를 최대 9개월(인간의 경우 약 30년에 해당) 동안 추적 관찰했을 때, 조직병리학적 수준에서 췌장에서 암성 또는 전암성 병변이 발견되지 않았습니다. 이는 인간에 비해 생쥐의 수명이 상대적으로 짧기 때문일 수 있습니다(즉, 몇 달 대 몇 년). 악성 종양은 흔히 나이와 관련이 있기 때문에, 연구 기간 내에 종양 발병이 일어나지 않았을 수도 있다는 것은 이해할 수 있다. 췌장암 발병에 대한 RBM10의 잠재적 역할을 추가로 조사하기 위해 가능하다면 유전자 변형 토끼 또는 양과 같은 더 큰 동물 모델에서 이 단백질을 연구할 것을 제안합니다[44].

생물정보학(Bioinformatics)은 RBM10 발현이 면역세포 침투, 특히 NK 세포 침투와 밀접한 상관관계가 있음을 밝혔습니다[31]. 이러한 연구 결과와 일치하게, 본 연구는 췌장암 조직에서 RBM10 발현이 현저히 억제되고 NK 세포 침투가 감소하는 것을 확인했다. NK 세포가 악성 종양에 대한 숙주 면역감시에 중요한 역할을 하고 종양 면역 요법에 필수적이라는 점을 고려할 때[45], 이러한 관찰은 취약한 코호트의 췌장 조직에서 RBM10 발현이 억제되어 악성 종양에 대한 숙주 면역이 손상될 수 있음을 시사합니다. 그러나 RBM10 발현 감소가 췌장암에서 NK 세포 침투 억제로 이어지는지 아니면 억제된 결과인지는 불분명합니다. 따라서 RBM10과 NK 세포 침투 사이의 관계, 특히 생체 내 및 시험관 내 세포 독성에 미치는 영향을 명확히 하는 추가 연구는 췌장암에 대한 새로운 표적 치료법을 개발하는 데 귀중한 통찰력을 제공할 수 있습니다[46].

그 후, 특히 RBM10 발현과 관련하여 췌장암에 대한 NK 세포의 effector 기능을 확인하기 위해 NK 세포를 RBM10-knockdown 췌장암 세포와 공동 배양했습니다. 우리는 상향 조절된 PD-1 발현을 동반한 NK 세포에 의한 RBM10-knockdown 췌장암 세포의 약독화 사멸을 관찰했습니다. 이러한 연구 결과는 RBM10이 PD-1 경로의 조절을 통해 췌장암 발병에 대항하는 숙주 면역(NK 세포)에 기여한다는 것을 시사합니다. 우리의 데이터는 또한 암 발병에서 RBM10 발현과 PD-1 경로 사이의 밀접한 상호 작용을 암시합니다. 그러나 한 보고서에 따르면 폐선암 환자에서 높은 RBM10 발현과 PD-L1 양성은 나쁜 결과와 관련이 있으며[47], 이는 서로 다른 종양의 종양 형성에서 RBM10의 차별적인 역할을 시사합니다. 폐와 췌장의 미세환경은 거의 완전히 다르며 뚜렷한 숙주 면역 반응을 유발할 수 있으며, 이는 향후 명확해질 것입니다.

JAK1 및 JAK2 경로의 활성화가 PD-L1 발현을 상향 조절하여 NK 세포에 대한 종양 세포의 감수성을 억제하는 것으로 입증되었다는 점을 감안하여[39], RBM10-knockdown 췌장암 세포에서 JAK-STAT 경로의 활성화 상태를 추가로 조사했습니다. 본 연구의 결과, RBM10 knockdown 후 췌장암 세포에서 인산화된 JAK1(P-JAK1), 인산화된 JAK2(P-JAK2) 및 인산화된 STAT3(P-STAT3)의 발현이 상향 조절되었음을 확인했습니다. 특히, RBM10-knockdown 세포에서 관찰된 변형된 증식 및 이동은 JAK 경로 억제제(AZD1480)로 치료한 후 역전되었습니다. 또한, RBM10-knockdown 췌장암 세포에 대한 NK 세포의 사멸 효과는 JAK 경로 억제제의 치료에 대한 반응으로 회복되었습니다. 이는 RT-qPCR(mRNA 수치)과 웨스턴 블로팅(Western blotting, 단백질 수치)에 의해 확인된 바와 같이 PD-1 발현의 감소를 동반했습니다. 본 연구의 데이터는 NK 세포, RBM10 및 (P-JAK1, P-JAK2, P-STAT3) 신호 경로 간의 기능적 상호 작용을 확인합니다.

본 연구의 결과는 췌장암에서 JAK-STAT에 의한 만성 염증이 세포독성 T-림프구 활성화를 손상시켜 항PD-1 면역요법의 효과를 감소시킨다는 보고와 일치한다[48]. JAK-STAT 경로의 유의미한 변화는 GSEA 분석에서도 관찰되었습니다. 이러한 결과는 시험관 내 연구에서 확인된 바와 같이 JAK-STAT 경로, NK 세포 활성 및 췌장암 진행 사이의 연관성을 강화합니다.

Xiao 등은 RBM10이 hTERT 접합을 조절한다는 것을 입증했습니다[22]. 그러나 췌장암 환자 생존에 미치는 영향은 조사되지 않았습니다. 본 연구는 특히 췌장암 환자 생존과 관련된 RBM 가족 구성원에 초점을 맞추고 있으며, 후속 실험에서도 hTERT 접합이 관련되어 있음을 인정합니다. 본 연구의 가장 중요한 측면은 생물정보학 접근법을 사용하여 면역 관련 숙주 반응을 탐구하여 궁극적으로 NK 세포를 추가 조사의 주요 대상으로 식별하는 것입니다. 또한, RBM10 deletion이 NK 세포에 미치는 영향을 검증하여 보완적인 실험을 통해 연구 결과를 입증했습니다.

또한 Wu 등은 약물 감수성 향상에 대한 RBM10의 역할과 관련하여 NPTX1을 조사했지만 기계론적 분석은 수행하지 않았습니다[23]. 그러나 RBM10과 관련된 세포 표현형 변화는 확인되지 않았으며, 이는 NPTX1과 RBM10 사이의 잠재적인 상호 작용을 나타냅니다. 본 연구는 RBM10과 췌장암 면역의 관계를 조사하여 RBM10 손실이 JAK-STAT 경로를 통한 NK 세포의 PD-1 발현에 영향을 미쳐 잠재적으로 종양 면역 탈출에 기여할 수 있음을 보여줍니다. RBM10, JAK-STAT 경로 및 NK 세포 기능 간의 기계론적 상호 작용을 이해하는 것은 췌장암에 대한 표적 치료법을 개발하기 위한 유망한 방법을 제공합니다.

그러나 숙주 면역을 조절하는 RBM10의 역할, 특히 생체 내 악성 종양에서 NK 세포 기능과의 연관성에 대한 직접적인 증거는 완전히 밝혀지지 않았습니다. 이것은 향후 연구에서 더 자세히 조사될 것입니다.

현재 연구에는 한계가 있습니다. 첫째, RBM10이 NK 세포의 PD-1 발현에 영향을 미치는 메커니즘을 심층적으로 조사하지 않았으며, 이는 향후 연구의 초점이 될 수 있습니다. 둘째, RBM10을 조작한 9개월 된 마우스에서는 종양 병변이 발견되지 않았습니다. 이는 상대적으로 수명이 짧거나 췌장암 발병에 필요한 주요 환경 자극(예: JAK-STAT 경로 또는 PD-1 발현의 활성화)이 없기 때문일 수 있습니다.

결론

결론적으로, 본 연구 결과는 RBM10 결실이 JAK-STAT 경로를 변화시켜 NK 세포에서 PD-1 발현을 증가시킨다는 것을 시사합니다. 이는 결국 NK 세포 고갈에 기여하고 종양 진행을 촉진합니다. RBM10, JAK-STAT 경로 및 NK 세포 기능 간의 기계론적 상호 작용을 이해하는 것은 췌장암을 관리하기 위한 표적 치료법 개발을 위한 유망한 길을 제공합니다.

보충 자료

보충 그림 및 표.

승인

통찰력 있는 제안을 제공해 주신 상하이 자오퉁 의과대학 루이진 병원의 Baiyong Shen 교수님께 감사드립니다.

자금

이 연구는 국가자연과학재단(82373348, 82372865), 타이저우 임상의학대학 프로젝트 재단, 난징 의과대학(TZKY20220204 및 TZKY20220205), 상하이 병원 개발 센터 재단(SHDC22023209), 상하이시 과학기술위원회 2020 과학기술 혁신 행동 계획 의료 혁신 연구 특별 프로젝트(20Z11900305)의 보조금으로 부분적으로 지원되었습니다.

윤리 승인 및 참여 동의

인간 샘플을 사용한 실험은 상하이 자오퉁 의과대학 루이진 병원 민족 위원회의 승인을 받았습니다. 정보에 입각한 동의는 적절한 경우 환자 또는 보호자로부터 얻었습니다. 모든 정보에 입각한 동의는 참가자로부터 얻었습니다. 또한, 이 동물 연구는 상하이 자오퉁 대학교 의과대학 퉁런런 병원 윤리 위원회의 승인을 받았다.

데이터 및 자료의 가용성

이 논문의 결론을 뒷받침하는 데이터 세트는 교신 저자로부터 얻을 수 있습니다.

작성자 기여

개념 및 디자인 공부 : Kun Tao, Shisan Bao, Da Fu 및 Hong Yu. 샘플 수집 : Xia Gao, Junjie Huang, Zhenyu Tan. 문학 컬렉션: Feier Chen, Huiyan Wu, Changyi Feng. 데이터 분석 및 해석: Kun Tao, Da Fu, Xia Gao, Jing Yang. 통계 분석: Xia Gao, Xiuqin Zhang, Liuhong Yuan, Pengjun Wang. 원고 초안 작성: Xia Gao 및 Xiuqin Zhang. 원고의 비평적 수정 및 최종 승인: Kun Tao, Shisan Bao, Da Fu. 학습 감독 : Kun Tao, Shisan Bao, Da Fu 및 Hong Yu. 모든 저자가 원고에 기여하고 제출된 버전을 승인했습니다.

상충하는 이해관계

저자는 경쟁 이익이 존재하지 않는다고 선언했습니다.

참조

1. Mizrahi JD, Surana R, Valle JW, Shroff RT. 췌장암. 랜 싯. 2020; 395:2008-20

2. Kleeff J, Korc M, Apte M, La Vecchia C, Johnson CD, Biankin AV. 외. 췌장암. Nat Rev 디스 프라이머. 2016; 2:16022

3. 델 Chiaro M, Sugawara T, Karam SD, Messersmith WA. 췌장암 관리의 발전. 비엠제이. 2023; 383:e073995

4. Hu ZI, O'Reilly EM. 췌장암의 치료 개발. Nat Rev Gastroenterol 간장. 2024; 21:7-24

5. Brozos-Vázquez E, Toledano-Fonseca M, Costa-Fraga N, García-Ortiz MV, Díaz-Lagares Á, Rodríguez-Ariza A. et al. 췌장암 바이오마커: 맞춤형 치료 선택을 발전시키기 위한 경로. 암 치료 Rev. 2024; 125:102719

6. Wood LD, Canto MI, Jaffee EM, Simeone DM. 췌장암: 발병, 선별 검사, 진단 및 치료. 소화기. 2022; 163:386-402.e1

7. Li Z, Guo Q, Zhang J, Fu Z, Wang Y, Wang T. 외. 암의 RNA 결합 모티프 단백질 계열: 친구인가 적인가? 프론트 온콜. 2021; 11:757135

8. Su Z, Wang K, Li R, Yin J, Hao Y, Lv X. 외. RBM5의 과발현은 인간 폐 선암 세포에서 자가포식을 유도합니다. 세계 J Surg Oncol. 2016; 14분 57초

9. Guan B, Li G, Wan B, Guo X, Huang D, Ma J. 외. RNA 결합 단백질 RBM38은 miR-92a-3p와 함께 PTEN 3'UTR에 부분적으로 경쟁적으로 결합하여 결장직장암 진행을 억제합니다. Environ 톡시콜. 2021; 36:2436-47

10. Feng H, Liu J, Qiu Y, Liu Y, Saiyin H, Liang X. 외. RNA-binding motif protein 43 (RBM43)은 cyclin B1 발현의 조절을 통해 간세포 암종 진행을 억제합니다. 종양유전자. 2020; 39:5495-506

11. Han H, Lin T, Wang Z, Song J, Fang Z, Zhang J. 외. RNA-결합 모티프 4는 VEGF-A 발현을 선택적으로 활성화하여 HCC에서 혈관신생을 촉진합니다. 파마콜 해상도 2023; 187:106593

12. Xi PW, Zhang X, Zhu L, Dai XY, Cheng L, Hu Y. 외. 유방암에서 CDK1 mRNA의 안정화에 의한 엑소좀 보조인자 RBM7의 발암작용. NPJ 유방암. 2020; 6:58h

13. 이노우에 A, 야마모토 N, 기무라 M, 니시오 K, 야마네 H, 나카지마 K. RBM10은 대체 접합을 조절합니다. 2월: 렛. 2014; 588:942-7

14. Jin X, Di X, Wang R, Ma H, Tian C, Zhao M. 외. RBM10은 RAP1/AKT/CREB 신호전달 경로를 통해 폐선암의 세포 증식을 억제합니다. J 세포 Mol Med. 2019; 23:3897-904

15. Nanjo S, 우 W, Karachaliou N, 블레이클리 CM, 스즈키 J, Chou YT. 외 접합인자 RBM10의 결핍은 EGFR 돌연변이 폐암에서 EGFR 억제제 반응을 제한합니다. J 클린 인베스트. 2022; 132:13발표

16. Bao Y, Zhang S, Zhang X, Pan Y, Yan Y, Wang N. 외 RBM10 손실은 EGFR에 의한 폐암을 촉진하고 스플라이소좀 억제에 대한 민감성을 부여합니다. 암 해상도 2023; 83:1490-502

17. Zhao J, Sun Y, Huang Y, Song F, Huang Z, Bao Y. 외. 기능 분석은 RBM10 돌연변이가 접합을 조절하지 않음으로써 폐 선암종 발병에 기여한다는 것을 밝혔습니다. Sci Rep. 2017; 7:40488

18. Guo L, Wang Y, Yang W, Wang C, Guo T, Yang J. 외. 분자 프로파일링은 표적 및 면역 요법과 대장암 예후에 대한 임상적 통찰력을 제공합니다. 소화기. 2023; 165:414-28.e7

19. Zhao Z, Li J, Shen F. 간세포 암종에서 RNA 결합 단백질 RBM10의 보호 효과. Eur Rev 메드 Pharmacol Sci. 2020; 24:6005-13

20. Li Y, Wei D, Chen Z, Chen Y, Deng Y, Li M. 외. RBM10은 PPM1B 및 YBX1 활성을 조절하여 인간 암세포의 종양 형성 가능성을 조절합니다. 특급 세포 해상도 2024; 435:113932

21. Cao Y, Di X, Zhang Q, Li R, Wang K. RBM10은 종양 세포사멸, 증식 및 전이를 조절합니다. 프론트 온콜. 2021; 11:603932

22. Xiao W, Chen X, Li X, Deng K, Liu H, Ma J. 외. RBM10은 인간 TERT 유전자 접합을 조절하고 췌장암 진행을 억제합니다. Am J 암 Res. 2021;  11:157-70

23. Wu J, Liu G, An K, Shi L. NPTX1은 췌장암 세포의 증식 및 이동을 억제하고 RBM10을 표적으로 하여 화학 요법 감도를 향상시킵니다. 온콜 레트. 2022; 23분 154초

24. Mainous AG 3rd, Struelens MJ, Bao S. 이해 상충 선언에서 환자의 중요성. Front Med (로잔). 2024; 11:1365067

25. 테일러 SC, 포쉬 A. 정량적 웨스턴 블롯 실험의 설계. Biomed 해상도 Int. 2014; 2014:361590

26. Liu Y, Liu P, Duan S, Lin J, Qi W, Yu Z. 외. CTCF는 FLG-AS1 의존성 후성유전학적 조절 및 대식세포 분극을 통해 췌장암 진행을 향상시킵니다. 세포 사멸은 다릅니다. 2025; 32:745-62

27. Wu L, Liu F, Yin L, Wang F, Shi H, Zhao Q. 외. 거세 저항성 전립선암에 대한 폴리펩티드 PSMA 표적 키메라 항원 수용체 공학 자연 살해 세포의 확립 및 페롭토시스 관련 세포 사멸 유도. 암 공동체 (Lond). 2022; 42:768-83

28. Liu P, Gao X, Yu Z, Liu Y, Liu Y, Lin J. 외. H19는 종양 관련 대식세포에서 분극 및 선택적 스플라이싱을 촉진하여 췌장암 진행을 촉진합니다. 암 Lett. 2024; 611:217389

29. Wu B, Hu K, Li S, Zhu J, Gu L, Shen H. 외. Dihydroartiminisin은 상피 난소암의 성장과 전이를 억제합니다. Oncol Rep. 2012; 27:101-8

30. Ye H, Yu W, Li Y, Bao X, Ni Y, Chen X. 외. AIM2는 JAK/STAT3를 통해 종양 관련 대식세포에서 PD-L1 발현을 조절하여 폐 선암 면역 회피를 촉진합니다. Hum 백신 면역. 2023; 19:2269790

31. Newman AM, Steen CB, Liu CL, Gentles AJ, Chaudhuri AA, Scherer F. 외. 디지털 세포 분석으로 벌크 조직에서 세포 유형 풍부도 및 발현 측정. 냇 바이오테크놀. 2019; 37:773-82

32. Shen W, Song Z, Zhong X, Huang M, Shen D, Gao P. 외. Sangerbox: 포괄적이고 상호 작용 친화적인 임상 생물정보학 분석 플랫폼입니다. 이메타. 2022; 1:36회

33. 리 T, 팬 J, 왕 B, Traugh N, 첸 Q, Liu JS. 외 TIMER: 종양 침투 면역 세포를 종합적으로 분석하기 위한 웹 서버입니다. 암 해상도 2017; 77:E108-E10

34. Zhang X, Yuan L, Tan Z, Wu H, Chen F, Huang J. 외. CD64는 당뇨병성 상처 치유에 중요한 역할을 합니다. 전면 면역. 2024; 15:1322256

35. Yuan L, Tan Z, Huang J, Chen F, Hambly BD, Bao S. 외. 결장직장암 배액 림프절에서 PD-1, CTLA-4 및 FOXP3와 IL-38의 상관관계의 임상적 중요성을 조사합니다. 전면 면역. 2024; 15:1384548

36. Wu H, Yang J, Yuan L, Tan Z, Zhang X, Hambly BD. 외. IL-38은 전립선암의 발병을 촉진합니다. 전면 면역. 2024; 15:1384416

37. Zhang W, Hubbard A, Jones T, Racolta A, Bhaumik S, Cummins N. 외. 티라미드 신호 증폭 및 동일 종 항체를 이용한 완전 자동화된 5-plex 형광 면역조직화학. 연구소 투자. 2017; 97:873-85

38. Chen F, Zhang F, Tan Z, Hambly BD, Bao S, Tao K. 결장직장암의 인터루킨-38: 정밀 의학의 잠재적 역할. 암 면역 면역. 2020; 69:69-79

39. Bellucci R, Martin A, Bommarito D, Wang K, Hansen SH, Freeman GJ. 외 JAK1 및 JAK2의 인터페론 γ 유도 활성화는 PD-L1 발현의 상향 조절을 통해 NK 세포에 대한 종양 세포의 감수성을 억제합니다. 종양면역학. 2015; 제4:E1008824

40. Daicheng H, Shiwen X, Jingxuan Z, Junbo H, Bo W. TARP 증후군과 관련된 프레임시프트 RBM10 변형. 프론트 유전자. 2022; 13:922048

41. Chang J, Zhang Y, Zhou T, Qiao Q, Shan J, Chen Y. 외. RBM10 C761Y 돌연변이는 담관암에서 발암성 ASPM 이성질체를 유발하고 β-카테닌 신호를 조절했습니다. J 특급 클린 암 Res. 2024; 43:104 아까

42. Niceta M, Barresi S, Pantaleoni F, Capolino R, Dentici ML, Ciolfi A. 외. TARP 증후군: 장기 생존, 선천성 심장 결함의 해부학적 패턴, 감별 진단 및 병리학적 고려 사항. Eur J 메드 제넷. 2019; 62:103534

43. Wang Y, Gogol-Döring A, Hu H, Fröhler S, Ma Y, Jens M. 외. 통합 분석을 통해 RBM10 매개 접합 조절의 기저에 있는 분자 메커니즘을 밝혔습니다. EMBO 몰 메드. 2013; 5:1431-42

44. Hou Y, Zhang X, Sun X, Qin Q, Chen D, Jia M. 외. 심혈관 의학을 위한 유전자 변형 토끼 모델. Eur J 파마콜. 2022; 922:174890

45. 마이어스 JA, 밀러 JS. 암 면역 요법을 위한 NK 세포 플랫폼 탐색. 냇 목사 Clin Oncol. 2021; 18:85-100분

46. Jiang P, Jing S, Sheng G, Jia F. NK 세포의 기본 생물학과 종양 면역 요법에 적용. 전면 면역. 2024; 15:1420205

47. 이사카 T, 미야기 Y, 요코세 T, 사이토 H, 가사지마 R, 와타베 K. 외 RBM10 및 PD-L1 발현이 병리학적 N1-N2 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 폐 선암종의 예후에 미치는 영향. Transl 폐암 Res. 2023; 12:2001-14

48. Lu C, Talukder A, Savage NM, Singh N, Liu K. JAK-STAT 매개 만성 염증은 세포독성 T 림프구 활성화를 손상시켜 췌장암에서 항-PD-1 면역요법 효능을 감소시킵니다. 종양면역학. 2017; 6:E1291106

작성자 연락처

 교신저자: Kun Tao (taokun20119@163.com), Da Fu (fd12374@rjh.com.cn), Shisan Bao (profbao@homtail.com), Hong Yu (yuhong@njmu.edu.cn).

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인용 스타일

APA  복사

Gao, X., Zhang, X., Huang, J., Tan, Z., Yang, J., Yuan, L., Wang, P., Chen, F., Wu, H., Feng, C., Yu, H., Bao, S., Fu, D., Tao, K. (2025). RBM10은 PD-1 발현을 통한 면역 회피를 억제하여 췌장암 발병을 억제합니다. 암 저널, 16(10), 3080-3093. https://doi.org/10.7150/jca.111459.

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가오, X.; 장, X.; 황, J.; 탄, Z.; 양, J.; 위안, L.; 왕, P.; 첸, F.; 우, H.; 펑, C.; 유, H.; 바오, S.; 푸, D.; Tao, K. RBM10은 PD-1 발현을 통해 면역 탈출을 억제하여 췌장암 발병을 억제합니다. J. 게자리 2025, 16 (10), 3080-3093. DOI: 10.7150/jca.111459입니다.

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Gao X, Zhang X, Huang J, Tan Z, Yang J, Yuan L, Wang P, Chen F, Wu H, Feng C, Yu H, Bao S, Fu D, Tao K. RBM10은 PD-1 발현을 통해 면역 탈출을 억제하여 췌장암 발병을 억제합니다. J 캔서 2025; 16(10):3080-3093. 도:10.7150/jca.111459. https://www.jcancer.org/v16p3080.htm

CSE   복사

Gao X, Zhang X, Huang J, Tan Z, Yang J, Yuan L, Wang P, Chen F, Wu H, Feng C, Yu H, Bao S, Fu D, Tao K. 2025년. RBM10은 PD-1 발현을 통한 면역 회피를 억제하여 췌장암 발병을 억제합니다. J 게자리. 16(10):3080-3093.

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