DNMT3A mutation on the neuronal epigenome

[Han, EuneKyung]

;'''  DNMT3A mutation on the neuronal epigenome

신경세포 후성유전체에 대한 DNMT3A 돌연변이

Dr Harrison Gabel, "Defining the impact of DNMT3A mutation on the neuronal epigenome" Time Subtitle Machine Translation 8s hello i'm harrison gable from the department of neuroscience at washington 안녕하세요, 저는 12s university in st louis and it's my pleasure to chair this session on 세인트루이스 워싱턴 대학교 신경과학과 해리슨 게이블입니다. 15s neurodevelopment and psychiatric aspects of tbrs TBRS의 신경발달 및 정신의학적 측면에 대한 이번 세션의 사회를 맡게 되어 기쁩니다. 19s we'll have four great talks in this session covering topics ranging from 이번 세션에서는 22s molecular functions of dnmt3a in the brain to 뇌에서 DNMT3A의 분자 기능부터 TBRS에서 나타나는 26s brain circuits disrupted and behavioral phenotypes that arise in tbrs 뇌 회로 장애 및 행동 표현형에 이르기까지 다양한 주제를 다루는 네 가지 훌륭한 발표가 있을 예정입니다. 먼저 제가 TBRS에서 32s i'll kick off the session and tell you about our studies to understand the - 35s impact of dnmt3a mutations in tbrs on enzyme function and epigenetics in the DNMT3A 돌연변이가 효소 기능 및 뇌의 후성유전학에 미치는 영향을 이해하기 위한 연구에 대해 40s brain and then pablo lapunzina from biomedical - 44s research network center for rare diseases and hospital la - 47s paz institute for health research will tell us about clinical findings in 소개하겠습니다. 다음으로 희귀질환 생의학 연구 네트워크 센터와 라파스 병원 건강 연구소의 파블로 라푼지나 박사가 TBRS 환자의 임상 소견에 대해 발표할 예정입니다. 52s patients of tbrs we'll then hear from dr anna oliveira 이어서 하이델베르크 대학교의 안나 올리베이라 박사가 57s from university of heidelberg who will tell - 59s us about her work on the requirement and function of enzymes encoded by - 1:03 dnmt3a in memory formation and finally we'll 기억 형성에 있어 DNMT3A에 의해 코딩되는 효소의 필요성과 기능에 대한 연구를 발표할 것입니다. 마지막으로 1:08 hear from dr ching chun tong from the university of 칭춘통 박사가 발표를 진행할 예정입니다. 1:11 texas health science center at houston who 휴스턴 텍사스 건강과학센터의 연구원이 1:14 will present his findings identifying a neuro circuit - 1:17 between brain feeding centers and emotional areas 뇌의 섭식 중추와 감정 영역 사이의 신경 회로를 규명한 연구 결과를 발표할 예정입니다. 1:21 that co-regulate feeding behaviors and emotional modalities - 1:24 this of course will be relevant to thinking about hyperphagia and tbrs 이 회로는 섭식 행동과 감정 양상을 공동으로 조절합니다. 이는 과식증과 TBR(Temporal Behavioral Reflex) 연구에 중요한 의미를 갖습니다. 발표 후 질의응답 1:29 we'll have time for questions at the end so please be sure to ask away 시간이 있으니 자유롭게 질문해 주시기 바랍니다. 1:33 and there may be additional time at the end for extra questions as well 추가 질문 시간도 마련되어 있습니다. 1:38 so i have the honor to kick off the talks and - 1:42 and and start with the first session i'd like to thank the 첫 번째 세션을 시작하게 되어 영광입니다. 1:45 um tbrs community for the opportunity to present - 1:49 our work defining the impact of dnmt3a mutations on the neuronal epigenome - 1:55 so broadly my lab is interested in understanding epigenetic mechanisms that 저희 연구실에서 DNMT3A 돌연변이가 신경 세포 후성유전체에 미치는 영향을 규명하는 연구를 발표할 기회를 주신 텍사스 대학교 TBR 연구 커뮤니티에 감사드립니다. 저희 연구실은 1:59 contribute to the development of the nervous system 신경계 발달에 기여하는 후성유전학적 메커니즘 2:02 and how these epigenetic gene regulatory mechanisms are disrupted to cause 과 이러한 후성유전학적 유전자 조절 메커니즘의 교란으로 인해 2:06 neurodevelopmental disorders and a major focus of this work that 신경 발달 장애가 발생하는 방식을 연구하고 있습니다. 2:09 brings us into tbrs research is our work to understand dna TBR 연구와 관련된 주요 연구 분야는 DNA 2:13 methylation and its function in the brain 메틸화와 뇌에서의 그 기능에 대한 이해입니다. 2:16 so typically dna methylation occurs at cytosines in the mammalian genome 일반적으로 DNA 메틸화는 포유류 게놈의 시토신에서 발생합니다. 2:21 and dnmt3a the enzyme mutated in tbrs is required for de novo methylation and tbrs 유전자에서 변이된 효소인 dnmt3a는 새로운 메틸화와 2:27 depositing methyl cytosine at cg dinucleotide and many cell types in our CG 디뉴클레오티드에 메틸 시토신을 침착시키는 데 필요하며, 우리 몸의 많은 세포 유형에서 CG 2:32 body typically cg methylation is associated 메틸화가 일어납니다. 일반적으로 CG 메틸화는 2:35 with gene repression where the gene that's marked with 유전자 억제와 관련이 있는데, 2:39 methylation will tend to be off whereas a gene that is does not have cg 메틸화된 유전자는 발현이 억제되는 경향이 있고, CG 메틸화 표지가 없는 유전자는 발현됩니다. 이 2:44 methyl marks will be on now this mechanism takes place 메커니즘 …은 2:49 in the neurons in our brain but recent studies have identified a large 뇌의 뉴런에서 일어나지만, 최근 연구에서는 CG 이외의 부위에서도 많은 2:55 amount of dna methylation occurring in a non-cg context 양의 DNA 메틸화가 발생한다는 사실이 밝혀졌습니다. 2:59 most of this methylation occurs in neurons at high levels at ca sites so 이러한 메틸화는 대부분 뉴런의 Ca 부위에서 높은 수준으로 발생하며, 이를 3:04 methyl cas and that's how i'll refer to it for the rest of the talk 메틸 Ca라고 부르겠습니다. 3:08 so this suggests that the nervous system sort of has special uses for dna 따라서 신경계는 DNA 메틸화에 특별한 용도가 있으며, 3:12 methylation and this methyl ca actually builds up to 이 메틸 Ca는 3:17 very high levels in neurons specifically during postnatal development you'll go 특히 출생 후 발달 과정에서 뉴런에 매우 높은 수준으로 축적됩니다. 3:22 from essentially having almost no methyl ca in your in your - 3:25 neurons to having it build up over the period of - 3:28 several months to a year in humans to very high levels such that there's a 인간의 경우, 뉴런에 메틸 Ca가 거의 없는 상태에서 수개월에서 1년에 걸쳐 매우 높은 수준으로 축적됩니다. 3:32 similar number of methyl ca sites in neurons as there are methyl cg 뉴런에는 메틸 시토신(methyl CG) 부위와 비슷한 수의 메틸 칼슘(methyl Ca) 부위가 존재하며, 3:37 sites and in mice you can see a genome browser 생쥐의 경우 전두엽 피질 분석 결과를 보여주는 게놈 브라우저 스크린샷에서 볼 수 있듯이, 3:41 shot of analysis from the frontal cortex here where this methyl ca is building up 이 메틸 칼슘은 3:44 over a period of weeks until there are about as many methyl ca 몇 주에 걸쳐 축적되어 메틸 칼슘 표지의 수가 3:48 marks as there are methyl cg marks and we in other groups have studied how 메틸 칼슘 표지의 수와 거의 같아집니다. 저희 연구팀은 3:53 this methyl ca comes about and we found that dnmt3a is absolutely 이 메틸 칼슘이 어떻게 생성되는지 연구했고, DNMT3A가 이 메틸화 증가에 절대적으로 필요하다는 것을 발견했습니다. 3:58 required for the up of this methylation if you knock it - 4:00 out post mitotically in neurons you can completely ablate the buildup of methyl 뉴런에서 DNMT3A를 분열 후 제거하면 메틸 칼슘 축적이 완전히 억제되고, 4:05 ca and this results in severe neurological 이로 인해 생쥐에서 심각한 신경학적 4:08 phenotypes in these mice demonstrating the importance of dnmt3a 표현형이 나타납니다. 이는 DNMT3A 4:12 and likely this methyl ca in the function of the brain 와 메틸 칼슘이 뇌 기능에 중요하다는 것을 보여줍니다. 4:16 so this suggests that neurons have this unique epigenome 따라서 …뉴런은 4:19 that has this extra methyl mark and that this is critical to the function of 이러한 추가적인 메틸 표지를 가진 독특한 후성유전체를 가지고 있으며, 이는 뇌 기능에 매우 중요하다는 것을 시사합니다. 4:24 the brain additional evidence that methyl ca and 메틸 …칼슘과 4:28 dna methylation are uniquely critical to the nervous system comes from DNA 메틸화가 신경계에 매우 중요하다는 추가적인 증거는 4:33 studies that our group and others have done on the 저희 연구팀과 다른 연구팀이 수행한 4:36 methyl cytosine binding protein mecp2 which is mutated in the severe 메틸 시토신 결합 단백질 MECP2에 대한 연구에서도 얻을 수 있습니다. 4:40 neurological disorder rhett syndrome and we in other groups have found that 레트 증후군이라는 심각한 신경 질환에서 돌연변이가 발생하는 유전자(MCP2)가 있습니다. 저희 연구팀은 다른 연구 그룹에서 4:44 mcp2 binds tightly to this methyl ca as well as to methyl cg MCP2가 메틸 Ca 뿐만 아니라 메틸 CG에도 강하게 결합하며, 4:48 and that this binding is important for it to regulate genes 이 결합이 유전자 조절에 중요하다는 것을 발견했습니다. 4:51 so in ret syndrome when you lose mecp2 you can't interpret this methylca and 따라서 레트 증후군에서는 MCP2가 소실되면 이 메틸 Ca를 제대로 해석할 수 없게 되고, 4:55 that is likely contributing to a number of aspects of the disorder and 이것 …이 질환의 여러 증상에 기여하는 것으로 추정됩니다. 5:00 so we've been working to understand this pathway and how dna methylation in the 저희는 이 경로와 뇌 DNA 메틸화 기전을 이해하기 위해 연구해 왔습니다. 5:03 brain works and when mutations in dnmt3a were - 5:07 identified in tbrs we felt we had an opportunity to TBR 환자에서 DNMT3A 유전자 돌연변이가 확인되었을 때, 저희는 5:11 contribute to understanding the disorder by using the methods and the analysis - 5:15 that we had been using to understand mecv2 and rett syndrome and the basic MECV2와 레트 증후군, 그리고 5:19 biology of this methylation and applying it to understanding how 이 메틸화의 기본 생물학을 연구하는 데 사용했던 방법과 분석을 활용하여 TBR 환자의 5:25 the epigenome dna methylation in the brain is disrupted in tbrs 뇌에서 후성유전체 DNA 메틸화가 어떻게 교란되는지 이해함으로써 질환 이해에 기여할 수 있는 기회라고 생각했습니다. 5:31 and our approach to this has really been to start with the mutations first the 저희의 접근 방식은 돌연변이, 즉 5:34 genetics first so we've been interested in 유전학부터 시작하는 것이었습니다. 따라서 저희는 5:37 understanding what the mutations that occur - 5:39 in tbrs do to the dnm t3a protein and how that impacts the epigenome TBR에서 발생하는 돌연변이가 DNMT3A 단백질에 어떤 영향을 미치는지 이해하는 데 관심을 가져왔습니다. 그리고 그것이 후성유전체에 어떤 영향을 미치는지 알아보기 위해, 5:44 and we've been looking both at mutations that have come out of the intellectual 우리는 TBR과 관련된 지적 5:46 disability and overgrowth studies associated with tbrs as well as some 장애 및 과성장 연구에서 밝혀진 돌연변이뿐만 아니라 …, 5:52 mutations that have come out of studies of - 5:54 that start with individuals that have been diagnosed primarily with autism 주로 자폐증으로 진단받은 사람들을 대상으로 한 연구에서 밝혀진 돌연변이도 살펴보고 있습니다. 5:58 we don't know if these individuals actually have tbrs and are included in - 6:01 this autism study because they have co-morbid autism 이 연구에 포함된 사람들이 실제로 TBR을 가지고 있는지는 확실하지 않지만, 자폐증이 동반된 경우가 있기 때문에 자폐증 연구에 포함되었을 가능성이 있습니다. 6:04 but there are some mutations that are only in these autism studies 하지만 자폐증 연구에서만 발견된 특정 돌연변이들을 6:08 that have been identified … that we want to we want to look at to see if there 살펴보고, 6:12 are differences between the way these two mutations these 이 두 가지 6:15 two sets of mutations might affect the protein 돌연변이 유형이 단백질에 미치는 영향에 차이가 있는지 확인하고자 합니다. 6:19 so we've taken sort of a three-pronged approach to understanding how mutation 따라서 우리는 6:23 of dnmt3a in tbrs and and potentially an autism affects TBR 및 자폐증에서 DNMT3A 돌연변이가 6:27 the function of the protein and what its impact is i'll tell you 단백질 기능에 어떤 영향을 미치는지 이해하기 위해 세 가지 접근 방식을 취하고 있습니다. 6:31 about those three approaches today one is looking at the specific mutations 오늘 그 세 가지 접근 방식에 대해 설명드리겠습니다. 첫 번째는 특정 돌연변이가 분자 수준 6:36 and how they affect dnmt3a at the molecular level 에서 DNMT3A에 어떤 영향을 미치는지 살펴보는 것입니다. 6:39 and this is in cellular and molecular assays that i'll tell you about 이는 세포 및 분자 분석을 통해 이루어집니다. 이에 대해서는 나중에 자세히 설명드리겠습니다. 6:43 then we started profiling what the consequences of dnmt3a mutation are in 그 후 우리는 생체 내에서 DNMT3A 돌연변이의 결과를 6:47 vivo using mouse models looking at whether or 마우스 모델을 사용하여 분석하기 시작했습니다. 6:50 not the mice replicate aspects of tbrs to see if they 마우스가 TBR 증후군의 여러 측면을 재현하는지 여부를 확인하여 6:55 are a good model and then to use those mice to potentially study 좋은 모델인지 알아보고, 이러한 마우스를 사용하여 손상된 6:58 circuits and cell biology that are disrupted 회로 및 세포 생물학을 연구하고 7:02 and to better understand the disorder and finally we have this interest 질환을 더 잘 이해하는 데 활용할 수 있는지 알아보았습니다. 마지막으로, 우리는 7:05 in this methyl ca in the mecp2 pathway and we're interested in using that MECP2 경로의 메틸 칼슘에 관심을 가지고 있으며, 이 7:09 expertise in that interest to understand the consequences on the epi genome 전문 지식을 활용하여 DNMT3A 돌연변이가 후성유전체에 미치는 영향, 즉 7:13 when you mutate dnmt3a what are the molecular effects underlying - 7:17 the organismal level effects and that can tell us if there's overlap between 유기체 수준의 영향 이면에 있는 분자적 효과를 이해하고자 합니다. 이를 통해 7:21 this the tbrs disruption and and TBR 증후군 손상과 7:25 disorders like rett syndrome so in the first part of the talk i'll be telling 레트 증후군과 같은 질환 사이에 중복되는 부분이 있는지 확인할 수 있습니다. 발표의 첫 부분에서는 7:29 you about what we've been doing to study mutations 돌연변이 …연구 7:32 um and and what their effects on the 와 단백질에 미치는 영향에 대해 설명하겠습니다. 7:34 protein are and we're asking three questions here 우리는 세 가지 질문을 던지고 있습니다. 7:36 first are are these mis-sense mutations uh because 첫째, 이러한 돌연변이가 미스센스 돌연변이인지 여부입니다. 지금까지 7:39 most of the mutations that have been identified are mis-sense mutations 확인된 대부분의 돌연변이가 미스센스 돌연변이이기 때문입니다. 둘째, 이러한 돌연변이가 기능 장애를 유발하는지 여부입니다. 돌연변이가 기능 장애를 7:42 are they disruptive it's important to determine for sure - 7:46 that mutations are disruptive before we think about how they 유발하는지 여부를 확실히 확인하는 것이 중요합니다. 우리는 돌연변이가 7:49 might play a role in the disorder because no sense mutations 질환에 어떤 역할을 할 수 있는지 생각해 보았습니다. 왜냐하면 모든 돌연변이가 반드시 질병의 7:53 are not necessarily causative then we want to look to say okay because so many 원인이 되는 것은 아니기 때문입니다. 우리는 많은 7:58 sense mutations have been uh identified do they have simple loss of function 돌연변이가 확인되었으므로, 이러한 돌연변이가 단순한 기능 상실 8:03 effects or are there more complex effects going 효과를 나타내는지, 아니면 더 복잡한 효과를 나타내는지 살펴보고자 합니다. 또한 8:05 on and can we understand the molecular basis of the - 8:08 disorder based on whether or not it's loss of function or 기능 상실 또는 8:12 other complex effects downstream and then finally we 다른 복잡한 하위 효과에 따라 질환의 분자적 기전을 이해할 수 있는지 알아보고자 합니다. 마지막으로, 8:16 want to look at common effects across all the mutations 모든 돌연변이에서 공통적인 효과를 살펴보고 8:18 to see what might be the the drivers of neurological phenotypes um in tbrs TBR 8:25 and potentially in autism-related mutations as well 및 잠재적으로 자폐증 관련 돌연변이에서 신경학적 표현형을 유발하는 요인이 무엇인지 확인하고자 합니다. 이를 위해 8:28 so we've used a number of assays to to look at how each mutation 우리는 여러 가지 분석법을 사용하여 8:33 in a set of representative mutations affect the dnmt3a protein and we've 대표적인 돌연변이 세트에서 각 돌연변이가 DNMT3A 단백질에 어떤 영향을 미치는지 살펴보았습니다. 8:39 looked at cellular localization … and protein expression‎ in a - 8:44 heterologous neuro2a system and then we've been able 이종 Neuro2A 시스템에서 세포 내 위치 및 단백질 발현을 조사했고, 8:47 to do in vitro methyl transferase assays to look at the activity of the - 8:51 enzyme in a tube and what we find uh with the cellular localization assays 시험관 내 메틸 전이효소 분석을 통해 효소 활성을 확인했습니다. 세포 내 위치 분석 8:57 and the protein expression‎ assays interestingly is that mutations in the 및 단백질 발현 분석에서 흥미로운 점은 돌연변이가 9:00 pwp domain seem to be affecting the localization of PWP 도메인은 9:04 the protein such that it is no longer nuclear 단백질의 국소화에 영향을 미쳐 더 이상 핵에 존재하지 않게 되고, 9:07 and that the protein is uh lower expressed 단백질 발현량도 전반적으로 감소하는 것으로 보입니다. 이는 9:10 by and large it's likely due to destabilization of the protein and we 단백질의 불안정화 때문일 가능성이 높으며, 9:15 don't know which comes first the ability the lack of localization or 국소화 능력 저하와 9:18 the destabilization this domain of course is a domain that's 불안정화 중 어느 것이 먼저 발생하는지는 아직 알려지지 않았습니다. 이 도메인은 9:21 important for binding with histones particularly k30 h3k36 methylation 특히 K30, H3, K36 메틸화와 같은 히스톤과의 결합에 중요한 역할을 하므로, 9:26 so we think it's possible that by disrupting that interaction you lose 이러한 상호작용을 방해함으로써 단백질 9:29 localization and stability of the protein 의 국소화와 안정성이 저하될 수 있다고 생각합니다. 9:32 now these pwp mutants this truncation is slightly different but these pwp 이 PWP 돌연변이체들은 절단 부위가 약간 다르지만, 촉매 9:36 mutants are still active in a catalytic assay 활성 분석에서는 여전히 활성을 나타냅니다. 9:40 so the rest of the protein appears to be functioning 즉, 단백질의 나머지 부분은 기능을 하는 것으로 보입니다. 9:44 however the catalytic mutants show a reduction catalytic domain mutants up 그러나 촉매 도메인 돌연변이체는 9:48 here show a reduction in the activity of the - 9:50 enzyme in this in vitro methyltransferase assay 시험관 내 메틸 전달효소 분석에서 효소 활성이 감소하는 것을 보여주지만, 9:53 but no effects in the expression‎ and localization 발현량과 국소화에는 영향을 미치지 않습니다. 9:57 so we have two different ways in which you can break the dnmt3a protein it 따라서 DNMT3A 단백질을 파괴하는 두 가지 다른 방식이 있으며, 10:01 seems to to drive tvrs interestingly this add 흥미롭게도 이 추가 도메인 돌연변이가 TVRS를 유도하는 것으로 보입니다. 10:05 domain um these mutations here seem to have no effect in the assays - 10:10 in these systems um suggesting something more 이러한 시스템에서 수행된 분석에서는 아무런 효과가 없는 것으로 보아 돌연변이의 영향 10:13 subtle is going on in terms of their effects of mutation or perhaps that they 측면에서 더 미묘한 무언가가 일어나고 있거나 10:18 aren't pathologic however in the next essay 병리학적이지 않은 것일 수 있습니다. 그러나 다음 에세이에서 10:21 i'll show you we have evidence that they indeed are 실제로 병리학적이라는 증거를 보여드리겠습니다. 따라서 우리는 10:23 so we want to dig deeper on the capacity of these dnmt3a mutations to deposit 이러한 DNMT3A 돌연변이가 10:28 methylation particularly across the neuronal genome 특히 신경 세포 게놈 전체에 걸쳐 메틸화를 축적하는 능력에 대해 더 자세히 조사하고자 합니다. 이를 위해 10:31 so in order to do that we developed an assay where we could look at - 10:35 the capacity enzyme to deposit methyl ca in cultured neurons 배양된 신경 세포에서 효소가 메틸 칼슘을 축적하는 능력을 살펴볼 수 있는 분석법을 개발했습니다. 피질 10:39 if we plate neurons cortical neurons in a dish 신경 세포를 배양 접시에 배양하면 10:42 we can watch the postnatal the post mitotic buildup of 출생 후, 즉 분열 후 10:46 methyl ca occur in these neurons if we do this with uh conditional deletion 신경 세포에서 발생하는 메틸 칼슘 축적을 관찰할 수 있습니다. 조건부 …결손 10:51 dnmt3a mice we can use cree to knock out the endogenous gene DNMT3A 마우스를 사용하여 내인성 유전자를 녹아웃시킨 10:55 and then if we add back a wild type or a mutant 다음 야생형 또는 돌연변이 10:58 gene we can ask whether or not it can rescue that activity to build up 유전자를 다시 추가하여 메틸 칼슘 축적 활성을 회복할 수 있는지 여부를 확인할 수 있습니다. 11:02 methyl ca so mutants would then disrupt the protein would be expected to not be 돌연변이 …는 단백질의 기능을 저해하므로 야생형 단백질을 다시 추가했을 때와 11:07 able to build up methyl ca to the same extent that putting back a wild type 같은 정도로 메틸 칼슘을 축적하지 못할 것으로 예상됩니다. 이것이 바로 그 다음 단계입니다. 11:11 protein does and that's in fact what we see for each 실제로 11:14 of the mutations we've tested including these mutations in the add 우리가 테스트한 각 돌연변이, 특히 AD 도메인의 돌연변이에서 관찰된 결과는 11:18 domain so they all are have deficits in methyl ca 모두 메틸 칼슘 침착에 결함이 있다는 것입니다. 특히 11:22 deposition and the add mutants actually AD 돌연변이는 메틸 칼슘 11:26 can have quite severe deficits in methyl ca deposition 침착에 상당히 심각한 결함을 보일 수 있습니다. 이는 11:30 and we think this may be because the add domain is actually a regulatory domain AD 도메인 …이 11:35 that um interacts with the chromatin and helps to target it and 크로마틴과 상호작용하여 효소를 표적화하고 11:38 activate the enzyme however in assays in which you're not 활성화하는 조절 도메인이기 때문일 수 있다고 생각합니다. 그러나 크로 11:42 measuring the activity the enzyme on chromatinized dna you might not be able 마틴화된 DNA에서 효소 활성을 측정하지 않는 분석에서는 11:45 to see these effects and so really by asking the enzyme in 이러한 효과를 관찰할 수 없을 수도 있습니다. 따라서 뉴런에서 효소 활성을 측정함으로써 11:50 neurons we were able to detect these deficits 이러한 결함을 감지할 수 있었습니다. 11:53 i also want to point out that there seem to be effects that are 또한 일부 돌연변이에서는 다른 11:56 less severe for some mutants compared to others and 돌연변이에 비해 영향이 덜 심각한 것으로 보이며, 11:59 interestingly there may be a correlation of less severe phenotypes less 흥미롭게도 일부 돌연변이에서는 덜 심각한 표현형, 즉 12:02 intellectual disability in some of the mutations uh for example 지적 장애가 덜한 상관관계가 있을 수 있습니다. 예를 들어, 12:06 the ones shown here that that have only partial inactivation of 여기에 제시된 것처럼 12:10 of the enzyme so this might be the beginning of 효소가 부분적으로만 비활성화된 돌연변이에서 이러한 상관관계가 나타납니다. 이는 12:14 a genotype phenotype correlation of course we need more data to better 유전자형-표현형 상관관계의 시작일 수 있습니다. 물론 이를 더 잘 이해하기 위해서는 임상 및 실험 측면 모두에서 더 많은 데이터가 필요합니다. 12:18 understand that both on the clinical side and - 12:21 in the dish … so with that analysis we've made some initial findings where the 이러한 분석을 통해 우리는 초기 연구 결과에서 12:27 mutations we're testing are indeed deleterious and consistent with them 우리가 테스트한 돌연변이들이 실제로 유해하며, 잠재적으로 질환의 12:30 being you know potentially causative for the 원인이 될 수 있다는 점과 일관성이 있음을 확인했습니다. 이는 당연한 결과입니다. 12:33 disorder which of course makes sense uh each of the mutations we've tested 테스트한 각 돌연변이는 12:37 have loss of function effects um on the enzyme suggesting that a 효소 기능 상실 효과를 나타내며, 이는 반수체 12:42 haploid insufficiency does potentially contribute to the disorder 불충분(haploid insufficiency)이 질환에 기여할 가능성을 시사합니다. 또한, 12:48 and then finally we're finding a common effect on ca methylation - 12:52 in these in vitro assays suggesting this could be disrupted in the disorder 이러한 시험관 내 분석에서 칼슘 메틸화에 대한 공통적인 영향을 발견했는데, 이는 질환에서 칼슘 메틸화가 교란될 수 있음을 나타냅니다. 12:56 and because many of these missense mutations look to be 이러한 미스센스 돌연변이 중 상당수가 13:00 null or near null in terms of their activity and there are truncations 활성 측면에서 거의 또는 완전히 소실된 것으로 보이고, 13:04 in individuals with tbrs we felt it was valuable to look at what TBRS 환자에서 절단 변이가 관찰되기 때문에, 13:09 haploinsufficiency of dnmt3a might look like in a mouse - 13:12 starting with a simple condition or a heterozygous constitutive deletion mass 단순한 조건, 즉 DNMT3A의 이형접합성 상시 적 결손을 가진 마우스에서 DNMT3A 반수체 불충분이 어떤 양상으로 나타나는지 살펴보는 것이 중요하다고 판단했습니다. 13:18 of dnmt3a and we can ask what the in vivo effects are of this - 13:22 in this model and for example what are the effects on physiology and behavior 이 모델을 통해 생체 내 효과, 예를 들어 생리 및 행동에 미치는 영향이 13:26 do they mirror aspects of tbrs and then this model could be used to do TBRS의 특징과 유사한지 여부를 확인할 수 있습니다. 또한, 이 모델을 활용하여 13:30 look at circuits and cell effects downstream in future 회로 및 세포 기능을 연구할 수 있을 것입니다. 향후 연구에서 하류 효과 13:34 studies as well as molecular effects so we started those uh analyses and we 뿐만 아니라 분자적 효과도 분석하기 위해 이러한 분석을 시작했습니다. 13:40 have um initial studies where we've looked at 초기 연구에서는 13:42 the heterozygous deletion of dnmt3a and we first looked at growth phenotypes dnmt3a의 이형접합성 결손을 살펴보고 성장 표현형, 즉 과성장을 조사했습니다. 그 결과, 13:46 for you know looking for overgrowth and we do find overgrowth of a - 13:52 longer length of the leg bones in in the animal 동물의 다리뼈 길이가 길어지는 과성장을 발견했는데, 이는 13:55 which would be a correlative increased height that's associated with tbrs TBRS와 관련된 키 증가와 상관관계가 있습니다. 14:00 in addition we see changes in body weight 또한, 시간이 지남에 따라 동물의 체중이 증가하는 변화도 관찰되었습니다. 14:04 where the animals become overweight over time this is a 이는 14:08 maturation dependent effect which may correlate with the trends in in obesity 성숙도에 따른 효과로, TBRS 환자들이 나이가 들면서 보이는 비만 경향과 관련이 있을 수 있습니다. 14:14 that are seen in tbrs patients as they age - 14:19 so that suggests that the overgrowth phenotypes in the in the mice um 따라서 쥐의 과성장 표현형은 14:24 are they're somewhat replicating the overgrowth phenotypes in the humans 인간의 과성장 표현형을 어느 정도 재현하는 것으로 보입니다. 14:28 and so we wanted to look at behavior and see if there are alterations in behavior 그래서 우리는 행동을 살펴보고 14:31 in these mice and we've done a number of assays the 이 쥐들의 행동 변화가 있는지 확인하고자 했습니다. 여러 가지 실험을 진행한 결과, 쥐 14:35 primary effect we've seen in the mice is that they tend to have altered 에서 관찰된 주요 효과는 탐색 행동의 변화였습니다. 즉, 쥐들을 특정 장소에 14:38 exploratory behavior so if we put them in an open field assay 놓으면 탐색 행동이 변화하는 경향을 보였습니다. 개방된 공간에서 탐색할 수 있도록 허용된 개방장 실험에서, 실험 대상 쥐들은 14:42 where they are allowed to explore an open chamber - 14:46 we see that they explore less and that they tend to stay 탐색량이 적고 공간 중앙에서 벗어나 있는 경향을 보였습니다. 14:49 out of the center of the chamber this is often interpreted as a anxiety 이는 쥐들이 공간 중앙에 노출되는 것을 두려워하기 때문에 불안과 관련된 표현형으로 해석되는 경우가 많습니다. 14:53 related phenotype in the mice because they're afraid to get to be exposed in - 14:57 the middle of the chamber likewise if we look at the animals in an 마찬가지로, 불안감을 15:00 elevated plus maze where they can explore either open arms which are more 더 많이 유발하는 개방된 팔과 폐쇄된 팔을 탐색할 수 있는 고가형 플러스 미로에서 실험 대상 쥐들을 살펴보면, 15:03 anxiety producing than closed arms they tend to stay in the closed arms and - 15:08 out of the open arms compared to their wild type litter mates 야생형 동배 쥐들에 비해 폐쇄된 팔에 머무르고 개방된 팔에는 접근하지 않는 경향을 보였습니다. 15:11 this suggests an anxiety-like phenotype that may limit their exploratory 이는 탐색 행동을 제한하는 불안 유사 표현형을 시사합니다. 15:15 behavior we've also looked at communication and 또한, 자폐증이 TBR(Tissue-Based Recognition Syndrome)의 동반 질환이기 때문에 의사소통 및 15:18 the potential for social deficits since autism is a comorbidity in tbrs 사회성 결핍 가능성도 살펴보았습니다. 15:23 and we do see changes in the mice and assays that are used to look at these - 15:27 features of behavior in mice for example the dnmt3a heterozygous knockout 쥐의 행동 특성을 조사하는 데 사용되는 여러 실험에서 변화가 관찰되었습니다. 예를 들어, DNMT3A 이형접합체 녹아웃 쥐는 15:32 has a reduction in maternal isolation-induced ultrasonic 모성 고립으로 유발되는 초음파 15:36 vocalizations which is a phenotype scene in a number 발성이 감소했는데, 이는 15:40 of intellectual disability and autism models 여러 지적 장애 및 자폐증 모델에서 나타나는 표현형입니다. 15:43 and then they also show changes in their uh social 또한, 사회성에도 변화가 나타났습니다. 이 실험에서 생쥐 15:46 their exploration and a three-chambered social approach assay which is an essay 들의 탐색 행동과 3개의 방으로 구성된 사회적 접근 검사를 실시했는데, 이는 15:50 typically to look at sociability of the mice do they like to interact 일반적으로 생쥐의 사회성을, 즉 15:53 with other mice we find that they tend to just explore less in this assay 다른 생쥐들과 상호작용하는 것을 좋아하는지 알아보기 위한 검사입니다. 검사 결과, 생쥐들은 15:59 rather than being less social and we think this may be related more to 사회성이 떨어지는 것이 16:02 an anxiety-like phenotype where they're they fail they don't want to explore the - 16:07 open chamber rather than it being a sociability phenotype 아니라 단순히 탐색 행동을 덜 하는 경향을 보였습니다. 이는 사회성 부족보다는 불안과 유사한 표현형과 관련이 있을 수 있다고 생각합니다. 즉, 열린 방을 탐색하고 싶어하지 않는다는 것입니다. 16:11 we've also looked at learning and memory performance in these mice and a couple 또한, 이 생쥐들의 학습 및 기억 능력도 여러 16:14 different assays i'm showing you contextual and cute fear 가지 검사를 통해 살펴보았습니다. 맥락적 공포 조건화와 자극 공포 16:18 conditioning here … we don't see frank deficits in these mice that would 조건화 검사를 예로 들 수 있습니다. 이 생쥐들에게서 16:23 suggest severe disruption of learning and memory 학습 및 기억 능력의 심각한 장애를 시사하는 뚜렷한 결함은 발견되지 않았습니다. 16:26 however as saying learning and memory as it 그러나 16:28 relates to intellectual disability and mice can be challenging 지적 장애 생쥐의 학습 및 기억은 어려운 문제일 수 있습니다. 16:31 we do see alterations in the behavior for example here in conditioned 예를 들어, 조건 16:35 fear training after the animal is exposed to a tone and a foot shock 공포 훈련에서 소리와 발 충격에 노출된 후, DNM3 이형접합체 녹아웃 생쥐에서 16:39 there is a increase in the freezing behavior um - 16:42 this sort of anxiety related freezing behavior of the mice after this 불안과 관련된 정지 행동이 증가하는 것을 관찰했습니다. 16:46 experience in the dnm three a heterozygous knockout - 16:49 and then in the contextual fear and the cued 그리고 맥락적 공포 및 자극 16:52 fear assays downstream the mice continue to freeze more 공포 검사에서도 유사한 결과가 나타났습니다. 쥐들이 계속해서 더 많이 얼어붙는 것을 보면 그 16:55 so they're they're remembering the experience but they seem to have a 경험을 기억하고 있는 것 같지만, 그 경험에 16:59 heightened emotional response uh to the experience and 대한 감정적 반응이 고조되고 17:02 an altered behavior … so these assays have shown us that the mice do have 행동이 변하는 것처럼 보입니다. 이러한 실험을 통해 쥐들의 17:08 changes in their behavior changes in their physiology some of which 행동과 생리적 변화가 나타나는데, 그중 일부는 17:12 uh mirror aspects of tbrs so we think that those alterations are something TBR 증후군의 일부 양상과 유사하다는 것을 알게 되었습니다. 따라서 이러한 변화를 연구하여 17:17 that we can study in these mice looking at what circuits might be 어떤 신경 회로가 17:20 affected and the cell biology underlying those disrupted circuits in the future 영향을 받는지, 그리고 이러한 회로 장애의 기저에 있는 세포 생물학적 메커니즘을 향후 연구할 수 있을 것으로 생각합니다. 17:25 but one of the first applications we've used the mice for is to look at the 저희가 쥐를 활용한 첫 번째 연구 분야 중 하나는 후성 17:28 epigenomic effects so again looking at how dna methylation 유전체적 효과를 살펴보는 것입니다. 즉, 게놈 전체에 걸쳐 DNA 메틸화가 어떻게 17:32 might be affected across the genome and how this impacts this mecp2 media gene 영향을 받는지, 그리고 이것 …이 17:37 regulation that my lab has studied … and looking to see if 저희 연구실에서 연구해 온 MECP2 유전자 조절에 17:41 there's overlap in what might be happening in mecv2 어떤 영향을 미치는지, 그리고 MECP2 관련 17:44 disorders and what's happening in tbrs so for this analysis we've 질환과 TBR 증후군에서 나타나는 현상 사이에 공통점이 있는지 확인하는 것입니다. 이를 위해 17:50 undertaken a number of epigenomic studies 여러 후성유전체 연구를 수행했으며, 17:53 we've done whole genome bisulfite sequencing in - 17:56 several different brain regions i'll be telling you 여러 뇌 영역에서 전장 유전체 바이설파이트 시퀀싱을 진행했습니다. 17:59 and about data we have from the cerebral cortex today 오늘 대뇌 피질에서 얻은 데이터에 대해 말씀드리겠습니다. 18:02 and then we've been looking at um histone acetylation which is a 그리고 우리는 18:09 a marker and a reporter of the activity of regulatory elements across the genome 게놈 전체에 걸쳐 조절 요소의 활성을 나타내는 지표이자 보고자인 히스톤 아세틸화를 살펴보았습니다. 18:13 and this could tell us the consequences of 이를 통해 DNA 메틸화 변화의 결과를 알 수 있습니다. 더 나아가 18:15 changes in dna methylation that occur and then to look even - 18:19 more downstream we can look at changes in gene expression‎ and ask are there 하위 단계로 유전자 발현 변화를 살펴보고 18:22 changes in genes that could be driving alterations in the mice … so when we 생쥐의 변형을 유도할 수 있는 유전자 변화가 있는지 확인할 수 있습니다. DNMT3A 이형접합체 녹아웃 생쥐의 대뇌 피질에 대한 18:28 look at … whole genome bisulfite sequencing data of the cortex of dnmt3a 전체 게놈 바이설파이트 시퀀싱 데이터를 살펴보면, 게놈 전체에 걸쳐 18:34 heterozygous knockout mice we find that by and large cg methylation cG 메틸화가 대체로 유지되는 것을 알 수 있습니다. 이는 18:39 is maintained across the genome that can be seen in these genome browser tracks - 18:43 here where at a very wide scale the cg 여기 게놈 브라우저 트랙에서 볼 수 있듯이, 매우 넓은 범위에서 두 유전자형 18:47 methylation is very consistent between the two genotypes 간에 cG 메틸화가 매우 일관적입니다. 18:51 now if we classify different regions of the genome and ask does the cg 이제 게놈의 여러 영역을 분류하고 18:54 methylation change in those particular regions like genes 특정 영역(예: 유전자, 18:58 or promoters or cpg islands we we don't see much in the 프로모터 또는 cG 섬)에서 cG 메틸화 변화가 있는지 살펴보면, 큰 변화는 보이지 않습니다. 19:02 way of effects there's some subtle effects 미묘한 변화가 일부 19:06 and there might be a few regions that are a little bit more sensitive but as a 나타나고 몇몇 영역은 조금 더 민감할 수 있지만, 19:09 general rule the cg methylation is maintained 일반적으로 cG 메틸화는 유지됩니다. 19:12 however if we look for focal changes in dna methylation searching for DNA 메틸화의 19:16 differentially methylated regions we can identify several thousand 국소적 변화를 찾아 차등 메틸화 영역(DMR)을 검색하면 수천 개의 19:19 dmrs most of which are hypodmrs where dna methylation DMR을 식별할 수 있으며, 대부분은 저메틸화 DMR(hypoDMR)입니다. 이는 19:24 at cg sites has been lost which is consistent with loss of the direct cg 부위에서 DNA 메틸화가 소실된 것으로, 19:28 activity of dnmt3a on those sites or reduction of that 해당 부위에 대한 DNMT3A의 직접적인 활성 소실 또는 활성 감소와 일치합니다. 19:31 activity these sites tend to overlap with 이러한 부위는 19:34 regulatory elements in the genome such as enhancers 게놈의 조절 요소, 예를 들어 19:38 over on the left here or cpg island shores regions 왼쪽의 인핸서 또는 T3A의 조혈계 이형접합 결손에서 파괴되는 것으로 나타난 19:42 right next to the promoters of genes that have been shown to be disrupted 유전자 프로모터 바로 옆의 CPG 아일랜드 쇼어 영역과 겹치는 경향이 있습니다. 19:47 in heterozygous deletions in the hematopoietic system - 19:50 for t3a and these sites are sites of regulation of genes so the 따라서 19:55 changes in cg methylation we see here have the potential to disrupt 여기서 관찰되는 cg 메틸화 변화는 19:59 gene expression‎ patterns in the mice and contribute to 생쥐의 유전자 발현 패턴을 교란하고 20:02 alterations in in the nervous system and nervous system function 신경계 …및 신경계 기능의 변화에 ​​​​기여할 가능성이 있습니다. 특히 신경계에서 20:08 where we really see quite dramatic effects however is that in this non-cg 매우 극적인 효과가 나타납니다. 그러나 비 cg 20:12 methylation this methyl ca that is specific to neurons so we find 메틸화, 즉 뉴런에 특이적인 메틸화에서는 20:18 in contrast to cg methylation that there's actually a global cg 메틸화와는 대조적으로 20:21 30 to 50 reduction of methyl ca across the genome and heterozygous 메틸화 수준이 전반적으로 30~50% 감소한 것을 발견했습니다. 그 세대 20:26 knockout mice you can see that here in this genome browser track where this 이 게놈 브라우저 트랙에서 20:30 dotted line is is at the same point on the scale and 점선이 있는 지점이 동일한 스케일 지점에 있는 것을 볼 수 있습니다. 이형접합체 녹아웃 마우스 20:34 you can see that in the heterozygous knockout there's just a 에서는 20:37 downshift of all the methylation and this really applies across all 모든 메틸화가 감소하는 것을 확인할 수 있으며, 이는 20:41 classes of elements we've looked at for the most part … where genes and 유전자 …, 20:46 promoters and uh and cpgio and shores all 프로모터, cpgio 및 쇼어 등 우리가 살펴본 대부분의 요소에 적용됩니다. 모든 메틸화가 20:50 go down substantially … and we were particularly interested in seeing that 상당히 감소합니다. 특히 전사 인자와 결합하여 프로모터를 조절하는 루프인 인핸서와 원거리 20:55 enhancers distal regulatory elements that 조절 요소에서 20:58 bind transcription factors and loop to regulate - 21:01 promoters they lose the ca methylation as well Ca 메틸화가 감소하는 것을 관찰하는 데 관심이 있었습니다. 이는 21:05 and our interest in this comes from the fact that our studies of mecp2 recently 최근 MECV2 연구에서 21:10 have shown that one site where mecv2 seems to act MECV2가 작용하는 부위 중 하나가 인핸서의 21:13 is to bind dna methylation both methyl cg and DNA 메틸화(메틸 CG 및 21:17 methyl ca at enhancers and to repress the activity 메틸 Ca)에 결합하여 이러한 인핸서의 활성을 억제하는 것으로 나타났기 때문입니다. 21:21 of these enhancers this can be measured by seeing a change 이는 히스톤 아세틸화 변화를 통해 측정할 수 있습니다. MECV2가 21:24 in the histone acetylation when you have mecb2 there the histone 존재할 때 히스톤 21:28 satellation levels will be at one level and then when you knock out mcp2 아세틸화 수준은 일정하지만, MECV2를 녹아웃시키면 21:32 there will be an increase in the histone acetylation 증가합니다. 히스톤 아세틸화 21:34 and an increase in the expression‎ of the genes that are regulated by the 와 인핸서에 의해 조절되는 유전자 발현 증가가 나타나는데, 21:37 enhancers and so this is the phenotype that we've 이것이 21:40 seen in the mecp2 knockout mouse and in thinking about what's going on in MECP2 녹아웃 마우스에서 관찰된 표현형입니다. 21:44 the tbrs model we're losing about a quarter of the TBRS 모델에서 일어나는 일을 생각해 보면, 게놈 전체, 특히 21:48 binding sites for mecp2 across the genome including at these 이러한 인핸서에서 MECP2 결합 부위의 약 4분의 1이 소실되고 있습니다. 21:51 enhancers so it's possible that a subtle phenocopy of the mecp2 enhancer 따라서 …MECP2 인핸서 조절 이상이 미묘하게 모방된 표현형이 21:57 dysregulation could be occurring in the tbrs TBRS 22:00 model mass so we wanted to go ahead and look at this 모델에서도 나타날 수 있습니다. 그래서 우리는 이를 확인하기 위해 22:03 we looked at the methylation at enhancers across the genome 게놈 전체의 인핸서에서 메틸화를 조사했습니다. 여기 K-27 아세틸화로 표시된 22:07 and you can see at these two example enhancers marked by 두 개의 예시 인핸서에서 메틸화가 감소된 것을 볼 수 있습니다. 22:10 k-27 acetylation here that there's a reduction in methylation - 22:15 and at enhancers that are most repressed by mecp2 which tend to be MECP2에 의해 가장 많이 억제되는 인핸서, 즉 22:19 have high numbers of methyl ca sites you get a very robust 메틸화 부위가 많은 인핸서에서는 22:23 robust reduction in the methyl ca and this 메틸화가 매우 강하게 감소합니다. 이는 22:26 because it's 50 of a high number is a larger number of sites that are reduced 높은 수치 중에서도 50%가 감소했다는 것은 이 인핸서에서 감소된 부위의 수가 더 많다는 것을 의미합니다. 22:31 at these enhancers and so we would expect that now that these binding sites 따라서 이러한 결합 부위가 감소하면 MECP2 인핸서의 발현이 증가할 것으로 예상할 수 있습니다. 22:35 are gone from ecb2 that the repression of the enhancer ECB2에서 사라진 유전자는 인핸서 억제에 22:38 is affected and that's in fact what we see we see a subtle upregulation of 영향을 미치며, 실제로 우리는 22:42 acetylation at these mecp2 repressed enhancers compared to your typical - 22:46 enhancer in the genome um so that's partially phenocopy in the 게놈 내 일반적인 인핸서와 비교했을 때 MECP2에 의해 억제된 인핸서에서 아세틸화가 미묘하게 상향 조절되는 것을 관찰했습니다. 이는 22:51 effect of loss of mdcp2 which would be losing the - 22:54 repression of every single methyl site in the genome 게놈 내 모든 메틸 부위의 억제가 사라지는 MDCP2 결핍 효과와 부분적으로 유사한 표현형을 나타냅니다. 22:57 i should say that these effects are really genome-wide we're looking at a 이러한 효과는 게놈 전체에 걸쳐 나타난다는 점을 강조해야 합니다. 우리는 높은 메틸화 수준을 23:01 an example set of enhancers that have high methylation and then are up 가진 인핸서들의 예시를 살펴보고 있으며, 23:04 regulated relative to other enhancers but all enhancer genomic essentially 다른 인핸서들에 비해 상향 조절되는 것을 확인했습니다. 모든 인핸서 게놈은 본질적으로 23:08 have some methylation and we think it's actually the amount of 어느 정도의 메틸화를 가지고 있으며, 23:11 methylation that's there before you knock out dnft3a is going to predict how DNF3A 유전자를 제거하기 전의 메틸화 정도가 23:15 much acetyl change there is so these are 아세틸화 변화를 예측하는 데 중요한 역할을 할 것으로 생각합니다. 따라서 이러한 효과는 23:18 really very subtle but widespread effects on - 23:21 enhancer regulation genome-wide so if the enhancer dysregulation is 게놈 전체에 걸쳐 인핸서 조절에 매우 미묘하지만 광범위하게 영향을 미칩니다. 만약 인핸서 조절 이상이 23:27 occurring that's similar to the mecp2 knockout we might expect changes in gene MECP2 결핍과 유사하게 발생한다면, 23:30 expression‎ that also have some overlap with rett 레트 23:35 syndrome mecp2 models and so we've profiled our rna sequencing 증후군 MECP2 모델과 일부 겹치는 유전자 발현 변화를 예상할 수 있습니다. 그래서 우리는 이러한 변화를 분석했습니다. 23:40 data from the dnm t3a heterozygous cerebral cortex DNM-T3A 이형접합 대뇌 피질의 RNA 시퀀싱 데이터는 23:44 and consistent with with what others have observed in models of 다른 연구자들이 신경발달 장애 모델에서 관찰한 것과 일치합니다. 이형접합 유전자 23:47 neurodevelopmental disorders where there's a heterozygous loss of a gene 결손이 있는 경우 23:50 the changes in gene expression‎ are quite subtle we get a handful of significantly 유전자 발현 변화는 매우 미미하며, 유의미하게 23:55 dysregulated genes and probably many below significance 조절 이상을 보이는 유전자는 소수에 불과하고 유의성 역치 미만의 효과를 보이는 유전자도 다수 관찰됩니다. 이러한 유의미하게 조절 이상을 보이는 23:59 threshold effects if we take those significantly - 24:01 dysregulated genes and ask do they overlap with the 유전자들을 대상으로 24:04 effects that we see in rett syndrome models we do in fact see a very 레트 증후군 모델에서 나타나는 효과와 중복되는지 살펴보면, 24:08 significant enrichment and an overlap of the genes - 24:11 dysregulated in the two models so these repressed genes these genes that go up 두 모델에서 조절 이상을 보이는 유전자들 사이에 매우 유의미한 풍부도와 중복이 있음을 알 수 있습니다. 즉, 24:15 when you knock out mecp2 they overlap with the genes that go up MECP2 유전자를 녹아웃시켰을 때 발현이 증가하는 유전자들은 DNM-T3A 이형접합 유전자를 24:19 when you delete dnmt3a heterozygously and vice versa 삭제했을 때 발현이 증가하는 유전자들과 중복되며, 그 반대의 경우도 마찬가지입니다. 24:25 so this suggests that the gene expression‎ effects happening in the tbrs 이는 TBRS 모델에서 나타나는 유전자 발현 효과가 24:28 model are you know subtle partial phenocopy - 24:32 of the effects in the ret syndrome model to some degree 레트 증후군 모델의 효과를 미묘하게 부분적으로 모방하는 것임을 시사합니다. 24:35 we can also look in a sort of a non-thresholded way where we're not just 또한, 24:38 demanding significant thresholds but looking genome-wide at whether or not 유의성 역치만을 요구하는 것이 아니라 게놈 전체를 대상으로 유전자 발현 변화를 살펴보는 비임계값 분석 방식도 고려할 수 있습니다. 24:41 they're gene expression‎ effects that are similar between the two models 두 모델 간에 유사한 유전자 발현 효과가 나타났 24:45 and we get a very significant uh overlap in terms of these effects 으며, 24:49 using gene set enrichment analysis and other 유전자 세트 농축 분석 및 기타 접근 24:51 approaches so there is a partial phenocopy of the gene 방식을 사용하여 이러한 효과 측면에서 매우 유의미한 중복을 확인했습니다. 따라서 24:56 dysregulation that's going on in rett syndrome - 24:58 in the tbrs models so uh that's uh TBRS 모델에서는 레트 증후군에서 나타나는 유전자 조절 이상이 부분적으로 재현됩니다. 이것이 25:04 the presentation for today in conclusion i just want to tell you that 오늘 발표 내용입니다. 결론적으로, 25:08 in our analysis of dnmp3a missed sense mutations we found DNMP3A 미스센스 돌연변이 분석에서 뉴런의 25:12 a common loss of function effects including effects on ca methylation 칼슘 메틸화 침착에 영향을 미치는 것을 포함하여 공통적인 기능 상실 효과를 발견했습니다. 25:15 deposition in neurons so i think this is going to be happening 이는 25:18 in most versions of tbrs the heterozygous deletion model a model 대부분의 TBRS 변형에서 나타날 것으로 예상됩니다. 반수체 불충분 모델인 이형접합체 결손 모델은 25:25 of haploid insufficiency does have uh defects in growth and - 25:29 behavioral deficits that have relevance to tbrs so we think there TBRS와 관련된 성장 및 행동 결함을 나타냅니다. 따라서 25:32 is a contribution of haploid sufficiency to the disorder we found that ca 반수체 충분성이 이 질환에 기여한다고 생각합니다. 칼슘 25:38 methylation is very sensitive to this heterozygous disruption 메틸화는 이러한 이형접합체 파괴에 매우 민감하며, 이형접합체 25:41 and we get a you know global reduction of methyl ca uh genome-wide - 25:46 in the heterozygous knockout whereas methylcg 녹아웃에서 게놈 전체에 걸쳐 칼슘 메틸화가 전반적으로 감소하는 반면, 메틸 CG는 25:49 is affected at local sites um but in ways that could affect gene 영향을 받습니다. 국소 부위에서, 하지만 유전자 조절에 영향을 미칠 수 있는 방식으로, 25:54 regulation and finally we see that there's this 그리고 마지막으로, DNMT3A 이형접합체에서 25:58 overlap in the dysregulation of enhancers and genes that are occurring 발생하는 인핸서와 유전자의 조절 이상이 26:02 in the dnmt3a heterozygotes that overlap with mecp2 mutants and MECP2 돌연변이 및 26:08 models of rett syndrome so we think this means that 레트 증후군 모델과 겹치는 것을 발견했습니다. 따라서 이는 26:11 the disorders are clearly distinct and there are aspects of dnmt3a function 두 질환이 분명히 구별되며, DNMT3A 기능의 일부 측면은 26:15 that uh work early in development that do not 발달 초기 단계에서 작용하지만 26:18 overlap with mecb2 so there are going to be lots of things about the disorder MECP2와는 겹치지 않는다는 것을 의미한다고 생각합니다. 따라서 두 질환에는 많은 차이점이 있을 것입니다. 26:21 that are different the disorders that are different but in the mature brain 하지만 성숙한 뇌에서는 26:26 there we think that um gene regulation in neurons 뉴런의 유전자 조절에서 두 질환 모두에서 26:29 there is going to be some some some functionally relevant 기능적으로 관련 26:33 and important convergent gene disruption going on 되고 중요한 수렴적 유전자 파괴가 일어날 것이라고 생각합니다. 26:37 in the two disorders that it would be important to think about the - 26:40 consequences of that and whether or not any sort of therapeutics 이러한 결과와 어떤 종류의 치료법이 26:43 could try to target those those shared effects 이러한 …공통 효과를 표적으로 삼을 수 있는지에 대해 생각해 보는 것이 중요합니다. 여기서 마치겠습니다. 26:47 and i'll just stop there but i want to thank - 26:50 everybody who did the work of course the most important slide 물론 이 연구에 참여해주신 모든 분들께 감사드립니다. 가장 중요한 것은 26:54 diana christian and dennis wu are two great students in the lab who 다이애나 크리스천과 데니스 우는 오늘 제가 말씀드린 연구를 주도한 연구실의 훌륭한 학생 두 명입니다. 26:57 spearheaded the study that i just talked to you - 27:00 about today along with work from russell moore jenna 러셀 무어, 제나 마틴, 아담 클 27:04 martin adam clemons and ryan liu amongst other 레몬스, 라이언 리우를 비롯한 27:07 folks in the lab and we've had great collaborations with 연구실 구성원들의 연구 와 워싱턴 주립대, 미주리 대학교의 27:10 folks at washu and at mizzou including joe dougherty david 조 도허티, 데이비드 27:15 wozniack cheryl hill tim lay amanda smith and of 워즈니악, 셰릴 힐, 팀 레이, 아만다 스미스, 그리고 물론 27:19 course marwan shanawi so i'll thank you very much for your 마르완 샤나위와 같은 훌륭한 연구진들과의 협업이 있었습니다. 경청해 주셔서 대단히 감사합니다. 27:24 attention i'd be happy to answer any … questions 질문이 있으시면 언제든지 말씀해 주십시오. 27:37 you -

https://www.youtube.com/watch?v=yKKilDOYBLU&t=8s

https://youtu.be/yKKilDOYBLU