액체종균제조법(생수통이용)

[qip관리자]

 

액체종균제조법(생수통 이용)

1. 액체종균법을 정리하며

  안녕하십니까!!

  버섯재배에 땀 흘리시는 회원 여려분들

  저는 버섯 재배는 하지 않았지만 우연한 기회에 액체종균 카페를 알게 되어 여러분들에게 제가 알고 있는 지식이 조금이나마 여러분들에게 도움이 되었으면 하고, 부족하지만 사진과 저의 짤막한 소견을 적어봅니다.

  앞에서도 언급했듯이 버섯재배를 하기위해서 액체종균을 제조한 것이 아니고 액체배양을 통해서 기능성식품 원료를 생산하고 진행해온 일들이라 조금은 여러분들이 실망하실 수도  있지만 종균을 제조하는 방법은 같은 원리라고 봅니다. 단지 본 배양에서 배지가 버섯재배를 위한 고체배지(톱밥배지, 볏짚배지등)냐 아니면 액체배지냐의 차이라고 봅니다.

  그리고 한 가지 더 말씀드린다면 각각의 버섯의 종류와 종균에 따라서 좋아하는 배지와 조건이 달라질 수 있기 때문에 회원님들의 상황에 맞게 적용해가는 것이 중요하리라 봅니다.

2. 종균관리

본 사진은 버섯 종균을 평판배지에 영지균사체를 접종하여 키운 사진입니다.

  왼쪽에 있는 plate는 접종전의 모습인데 사용한 배지는 PDA배지(감자한천배지)로서 구매해서 제조했는데, 직접 만들어서 사용하셔도 됩니다. 만드는 방법은 인터넷등에 찾아보시면 될듯합니다.

  저는 시약상에서 구매해서 오토클레이브에서 살균제조 했는데, 살균조건은 121℃ 1기압에서 15분간 살균하여 클린벤치에서 플레이트에 분주하여 냉각 시켜서 사용하였습니다. 이때 주의를 할 것은 배지를 분주하고 뚜껑을 덮으면 뚜껑 윗부분에 물방울이 형성되는데 이것이 없어질 때까지 클린밴치에서 송풍기를  1~2일 정도 켜줍니다.

  그리고 플레이트가 오염이 되었는지 확인하기 위해서 인큐베이터(온도-대략 30℃)에서 1~2일정도 보관했다가  오염여부를 확인(육안으로 확인 시 사진에서 보는 것처럼 배지가 투명함)한 후 냉장고에 보관하면서 필요할 때마다 커내서 사용합니다. 특히 여기서 주의 할 것은 플레이트는 항상 뒤집어서 관리해야 하는데, 이유는 뚜껑부위에 응축수가 형성되는 경우가 있는데, 이응축수가 떨어져서 오염원이 될 수가 있기 때문입니다.

접종할 때는 클린밴치에서 백금구로 배지와 함께 조금 조각내어서 접종합니다.

  접종이 완료된 플레이트는 인큐베이터(24~26℃)에서 5~7일정도 배양하시면 사진의 오른쪽처럼 균사가 플레이트 80~90% 차지하면 배양을 종료하고 냉장보관하고 필요할 때마다 사용합니다.

3. 진탕배양
 

제가 사용한 배지는 GY배지로서 포도당(3%), 이스트엑기스(0.5)를 첨가하여 만들었는데 배지는 PDA배지에서 한천만 빼고 만든 배지를 사용해도 무방함.

  삼각플라스크는 250㎖에 배지를 150㎖분주하였는데 이것은 회원님들이 사용하시는 균주에 특성에 따라 달라질 수가 있습니다. 살균조건은 위 플레이트제조와 같으므로 동시에 만들어 살균하는 것이 무방할듯합니다.

  균사체를 접종할 때는 백금구로 균사체를 3~4㎜정도 잘라서 2~3개정도 접종하고 세이킹인큐베이터에서 온도는 24~26℃,150RPM으로 세팅하시면 5~7일정도면 사진의 왼쪽처럼 균사체가 자라게 됩니다. 이때 배양을 중지해야 할 시점은 매우 중요합니다. 사람으로 말하면 청년기에 중지해야지 너무 오래되어 노쇠화 되면 안 됩니다.

4. 에어포트 제조
 

  지금 이사진은 제가 사용하던 것인데요. 관리자님이 올린자료와는 조금 다릅니다. 사진에서 에어필터가 연결된 스텐파이프는 에어가 들어가는 파이프인데 한쪽을 구부린 이유는  생수통 안에서 균사체가 순환이 잘되게 하기 위해서 구부림. 곧고 기다란 스텐파이프는 액체종균을 톱밥배지에 접종할 때 액종균을 보내는 관입니다.

  마지막으로 스텐파이프가 작고 실리콘퓨브가 작은 것은 에에 OUT밸브입니다. 에어필터는 시약상이나 과학기기 파는 곳에서 일회용으로 제작되어 파는 것이 있는데 저희는 만들어서 사용했답니다. 만드는 방법은 가벼운 알루미늄 파이프관에 솜으로 내부를 채우고 양쪽에 고무마개에 스텐파이프를 박아서 끼우고 멸균테이프를 감아주면 됩니다.

  멸균테이프와 실리콘튜브는 오엠지화학(02-2272-8767)에서 구매하시면 됩니다. 그리고 실리콘 마개는 성진특수고무(02-2273-5862)에서 구매하면 됩니다. 개인적으로 조금씩 구매하면 단가가 비싸고 필요 이상으로 구매하게 되는데 가능하다면 공동구매하면 좋을듯 합니다. 여기에서 사용된 재료들은 고열(121℃)에서 사용할 수 있는 특수 재작된 재료들입니다. 실리콘튜브 끝에는 솜으로 막아주고 호일로 감싸주고 클램프로 고정시켜줍니다.

5. 생수통 배지제조법

 

  옆 사진은 배양이 완료된 사진인데 접종 전 사진이 없어 아쉽습니다. 배지는 위와 같이 GY배지나 PDB배지를 사용하였으면 액량은 12~13ℓ 배지조성은 같습니다. 여기에 인산염이나 기타첨가물을 넣어 주도 무방한데 각각종균에 따라서 조금씩은 달라집니다.

  배지를 만들어서 살균기에 넣고 살균하는데 이때 사진처럼 에어파이프와 접종용 튜브를 잠그시고 에어 튜브는 열어놓아야 합니다. 고온에서 살균시  압력차에 의해 생수통이 변형이 오거나 실리콘마개가 열려서 액이 손실되며 안전사고에 노출될 수가 있습니다.

  제가 사용한 살균조건은 외부온도 130℃, 내부온도100℃에서 20분간 살균하고 살균기 온도가 100℃까지 떨어진 후 꺼내어 에어밸브를 잠그고 접종실로 옮겨서 냉각 접종했습니다.

냉각시 에어필터라인의 클램프를 열어주면 생수통의변형을 방지하고 오염을 방지하며 냉각할 수가 있다.

접종은 클린밴치 안에서 진탕배양에서 만들어진 삼각플라스크 1병정도 접종해주면 될 것 같은데 균주의 활성에 따라서 접종량은 달라질 수가 있습니다.

6. 배양

 

  접종이 완료된 배지는 배양실에서 일정온도에서 5~7일 정도 에어를 공급하면서 배양하면 위(5)사진처럼 종균을 얻을 수가 있습니다. 여기서 오염여부는 관리자님이 올린자료가 있으니 생략합니다. 옆 사진은 액체종균을 다른 용도로 배양 완료된 사진인데 첨부해봅니다.

  에어는 뒤에서 언급하겠지만 여러번에 걸쳐 무균상태의 공기를 넣어주는데 에어량에 따라서 배양기간이 달라질 수가 있습니다.

7. 에어 시스템

 

위 사진은 제가 사용했던 에어시스템인데 이 경우는 대량으로 액체배양을 할경우고 회원님들은 소규모로 제작하시면 됩니다. 편의를 위해 설명하면 왼쪽에 에어콤푸레샤고 에어저장탱크(에어량에 따라 생략할 수도 있음)를 거쳐 오른쪽사진의 에어 쿨러를 거쳐서 에어드라이어를 거치로 에어필터를 통해서 에어가 걸러지는 과정입니다. 에어 필터를 어느 정도 규모로 하는가는 여러분의 몫이라 할 수가 있습니다. 에어사용량에 따라서 시설비용은 달라지는데 생수통 5~6개정도는 1마력짜리 콤푸레샤면 될듯합니다.

8. 정리하며

  이상 제가 얼마 전까지 해왔던 것을 정리해봤는데 두서없이 적어봤습니다. 회원님들에게 얼마만큼 도움이 되었는지는 모르지만 미약하게나마 도움이 되었으면 합니다. 기회가 된다면 세미나 할 때 불러주시면 글로서 못 다한 자료나 해설을 전해줄 수 있을 듯합니다. 글로 설명하는데 한계가 많은 것 같네요.

  아무쪼록 여러분들의 액체종균을 사용의 성공을 빌며 마지막으로 한마디 더 적는다면 여러분이 직접 여러분에 조건에 맞게 계속 실험해 나가는 것이 가장 중요하리라 봅니다.

회원님들의 성공을 기원하며,

  의문점이 있으면 질문해 주시기 바랍니다. 제가 아는 것은 미약하지만 모두 전해 드리지요.

[시골댁]

좋은정보 감사합니다.
노력하시는 모습이 역력하네요 ~~

[한마디]

도움글 감사합니다

[성은농원]

도움이 되는 정보 감사합니다.