1. 2권p264, 형질전환법에서, 목적dna는 플라스미드로 실험하는데,
그림엔 선형dna로 나와있어서요. 편의상 이렇게 그린것이죠?
선형dna를 써도 그림13.42처럼 짝수번 재조합되면 형질전환이 가능한데,
굳이 플라스미드로 하는 이유는 무엇인가요? 굳이 재조합이 안되더라도 형질이 바뀔수 있으니까 그런것인가요?
2. 진핵의 경우는 플라스미드를 넣어주면 재조합이 되어야만 형질전환이 될거같은데,, 이 재조합될 확률이 우연히 서열이 유사하지 않은 이상 너무 적지 않나요?
3. 형질도입의 경우는 세균의 유전자를 일부 가지고 나가는 거니까 서열이 유사해서 내성유전자를 안넣어줘도 다른 대장균에 감염이 될거같은데, 형질전환이나 접합(F플라스미드)은 굳이 필요없는 플라스미드는 갖지 않고 버리니까 내성유전자를 꼭 선택마커로 넣어줘야 하는건가요? 혹은 대사플라스미드라서 필요성이 있어도 되구요..!
4. p264에 형질전환시 짝수번 재조합되어야 한다고 했는데, 원형 플라스미드를 넣어주면 한번만 재조합돼도 큰 원형dna로 재조합이 가능한거 아닌가요?
5. p267 예제에서, A-B-C 순인데
AB 동시형질전환율은 0.33, AC는 0.31입니다.
따라서 AB와 AC가 거의 차이가 안나니까 자연스럽게 BC는 AB거리보다 가깝게 그려주면 될거같은데 왜 이 두 거리는 따지기가 애매하다고 하신건가요?
6. p273 예제에서, 유도물질을 안넣어준 경우는 IPTG뿐만 아니라 알로락토오스도 없다고 가정하는건가요? 젖당이 있는 환경이면 자연스럽게 알로락토오스는 있을수밖에 없지않나요?ㅜ
감사합니다.
첫댓글 2.형질전환은 박테리아의 유전정보 교환 방법 중 하나로, 진핵에서 고려하지 않습니다.
3.네
4.삽입되려면 목적 유전자 양끝에서 한번씩 재조합 되어야하므로 짝수번으로 최소는 2번이죠.
5.A를 기준으로 한 상대적인 거리만 계산한 것이므로 B와 C사이 거리는 예측할 수 없습니다.
6.이 예제에서는 유도물질로 IPTG만 고려하고 있습니다.
답변 잘 해 주셨습니다. 1. 네. 원래 실험실에서 DNA는 벡터에 넣어서 모든 조작을 합니다. 2. 네. 그래서 일부러 knock out 실험에서는 neoR kt 두 유전자를 넣어서 제네티신과 젠시클로비어 환경에서 키우는 겁니다. 4. 한 번 재조합으로는 상동재조합이 되지 않습니다.
감사합니다! 3. 그렇다면 p145 플라스미드 분류에서 내성/대사/성 플라스미드가 있는데 여기서 성 플라스미드는 다른 세균에 접합하여 전달한후 이걸 버리지 않게 하기 위해선 꼭 내성/대성 플라스미드중 하나엔 속하는 것이죠?
4. 둘다 원형이라면, p247 재조합 그림처럼 한번만 재조합돼도 두 핵산이 이어지지 않나요?
7.그림 13.42처럼 형질전환은 꼭 내성/대사유전자 등 필요한게 아니더라도 서열만 비슷하면 재조합되어 형질전환 될 수 있는것인가요?
@희동2 3. 11장 플라스미드 부분을 다시 확인하기 바랍니다. 성플라스미드는 독약-해독제 시스템을 사용하는 별개의 플라스미드입니다. 4. 이어지는게 아니라 상동 재조합을 시킬려는 겁니다. 목적을 잘 확인하기 바랍니다.
@천우신조 감사합니다. 4. 상동재조합이란게 서열이 비슷해서 무작위로 교차되는 것인데, 플라스미드를 형질전환시켰을때 한번만 교차(재조합)되어도 두 핵산이 이어지면서 플라스미드의 유전자가 세균dna 서열에 들어오게 되면 목적을 달성하게 된거 아닌가요?
@희동2 목적이 상동 재조합이지 두 DNA가 융합된걸 얻고 싶은게 아니죠. 실험 목적을 잘 확인하고 질문하기 바랍니다.