<P>dpn i digeston method에 관한 질문입니다.</P>
<P> 2번째 단계에서 PCR을 이용해서 돌연변이 서열을 합성하고, 3번째 단계에서 DPN 1을 처리해 메틸화가 1가닥, 2가닥 된 서열을 제거해내기 때문에, 원하는 돌연변이가 일어난 서열만을 얻을 수 있다고 수업시간에 필기를 했습니다</P>
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<P>그런데 1번째 PCR과정에서 얻은 2개의 DNA는 1가닥씩만 메틸화 되어있을 것이고, 이를 다시 PCR해서 얻은 4개의 DNA중에서</P>
<P>2개는 1가닥씩만 메틸화 되어 있어서 DPN1에 의해 제거될 것이고, 1개는 원하는 돌연변이가 일어난 DNA이지만, 나머지 1개를</P>
<P>원하는 돌연변이가 일어난 DNA도 아니고, 둘다 메틸화가 안되어 있으니, DPN1에 의해서 잘리지도 않아</P>
<P>DNA추출시에 2종류의 DNA를 얻게 되지 않나요?</P>
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<P>그림 없이 질문하려니, 질문의도가 명확하게 전달될지 모르겠네요. 제 질문의도는 DPN 1 digestion method의 2단계에서 왼쪽 dna를 pcr하면 하나는 원하는 돌연변이 dna이고, 하나는 한가닥만메틸화되어 dpn1에 의해 제거됩니다. 오른쪽 dna를 pcr하면 하나는 한가닥만 메틸화되어 dpn1에 의해 제거되지만, 나머지 하나는 돌연변이가 한가닥에만 일어나 원하는 dna도 아닌데, 두가닥 모두 메틸화안되어 있어 제거도 안됩니다. </P>
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<P>이렇게 되면 이 실험에서 원하는 dna를 얻을 수 없지 않을까요?</P>
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첫댓글두번째 사이클에서 얻은 나머지 한개의 메틸화가 일어나지 않은 DNA도 돌연변이가 일어난 DNA 입니다. 그림을 잘 그려 보시기 바랍니다. 왜냐면, primer 서열 자체를 변이를 포함해 짜 주었기 때문에 PCR로 증폭이 일어날 때마다 항상 변이 서열이 포함될 수 밖에 없죠.
첫댓글 두번째 사이클에서 얻은 나머지 한개의 메틸화가 일어나지 않은 DNA도 돌연변이가 일어난 DNA 입니다. 그림을 잘 그려 보시기 바랍니다. 왜냐면, primer 서열 자체를 변이를 포함해 짜 주었기 때문에 PCR로 증폭이 일어날 때마다 항상 변이 서열이 포함될 수 밖에 없죠.