<div><p><br></p><p>1.써던블랏팅에서 5번과정에서 모세관현상을 이용해서 겔에서 NC필터로 DNA를 전이함.</p><p>밑에 두꺼운종이를 깔고 그 위에 NC필터, 또 그 위에 아가로오스겔 그리고 그 위에 종이한장을 덮어서 물의 모세관현상을 이용해 </p><p>겔에서 NC필터로 DNA를 전이하는것보다 그냥 처음부터 NC필터위에 아가로오스겔 두고 물을 뿌리면 안되나요?</p><p><br></p><p>2. 연어정자 DNA를 뿌려서 NC필터를 코팅하는이유가 탐침이 필터에 비특이적으로 결합하는것을 막음.</p><p>그러면 연어정자 DNA라는것이 일단 탐침과 수정란,B세포의 DNA와 상보적이지 않다는것을 알고있고,</p><p>그리고 탐침이 NC필터위에 UV쏴서 DNA가 고정된 부분이 아닌곳에 뿌려지면 연어정자DNA로 코팅된것에 의해</p><p>탐침이 상보성이있는곳을 찾아가게되나요?</p><p><br></p><p>3. 연어정자DNA가 코팅되있으면 탐침이 상보적인 DNA와 결합시 결합을형성하는데 장애물같은역할은 하지않나요? </p></div><p><br></p>
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연어정자 DNA를 뿌리는것이 탐침이 필터에 비특이적으로 결합하는것을 막는것인데 어차피 NC필터는 DNA가 붙질못하고 통과해버리니까 굳이 연어정자DNA를 안뿌리고 탐침을 뿌리면 그에 해당하는 DNA에 붙으면 결합이되면 그 이후 물로 씻겨내면 결합한 DNA는 필터에 남고 안붙은것은 떨어져나갈테니 연어정자DNA를 쓸필요없는거아닌가요?
추가적으로 HCl용액에 넣으면 DNA가닥의 퓨린염기들중 일부가 떨어져나간다.에서 AT가 이중수소결합이라서 더 약해서 CG 삼중수소결합보다 더 잘 떨어져나가는것이지 G염기도 떨어져 나가긴하는거지요??
첫댓글 1. 네 종이에서 종이로 물이 스며드는정도의 힘이 DNA를 전이하기에 적당합니다.
3. 약간의 장애가 될 수는 있을겁니다. 하지만 비특이적인 결합을 줄여주므로 실험결과의 정확성은 훨씬 올라갑니다.
답변 잘 해 주셨습니다. 2. 탐침이 찾아가는게 아니라 전체적으로 뿌리면 그 중 상보성이 있는 서열에만 붙어서 남게 됩니다.
연어정자 DNA를 뿌리는것이 탐침이 필터에 비특이적으로 결합하는것을 막는것인데
어차피 NC필터는 DNA가 붙질못하고 통과해버리니까 굳이 연어정자DNA를 안뿌리고 탐침을 뿌리면 그에 해당하는
DNA에 붙으면 결합이되면 그 이후 물로 씻겨내면 결합한 DNA는 필터에 남고 안붙은것은 떨어져나갈테니
연어정자DNA를 쓸필요없는거아닌가요?
추가적으로 HCl용액에 넣으면 DNA가닥의 퓨린염기들중 일부가 떨어져나간다.에서
AT가 이중수소결합이라서 더 약해서 CG 삼중수소결합보다 더 잘 떨어져나가는것이지
G염기도 떨어져 나가긴하는거지요??