첫댓글RT-PCR은 초기시료인 RNA양을 파악하기 위해서 사용합니다. RNA로 cDNA를 얻고 이로부터 DNA를 증폭하는 동시에 형광량을 통해 정량적으로 실시간 분석합니다. PCR반응횟수가 늘어날수록 증폭되는 DNA양이 많아져 점점 포화가 되는데, 초기에 cDNA양이 많다면 적은 pcr반응횟수로 빠르게 포화되고 초기에 cDNA양이 적다면 많은 반응횟수를 거쳐야 포화가 됩니다. 이 문제에서는 Ct값을 주었는데 Ct값이 크면 기하급수적으로 증가하는데 많은 반응횟수가 필요하므로 초기 cDNA양이 적은 것임을 알수 있습니다.
그런데 정량분석을 할때는 보정이 필요합니다. 이때 보정은 하우스키핑진으로 합니다. 이것은 항상 일정하게 발현되는 유전자로 보통 액틴유전자를 사용합니다. 실험결과 A-2의 Ct값이 B-2보다 작으므로 조직A에서 사용한 cDNA양(초기시료 RNA)이 조직 B에서 사용한 cDNA보다 기본적으로 2^1.7만큼 많은 것입니다. A-1과 B-1도 이것을 고려해서 생각해야합니다.
첫댓글 RT-PCR은 초기시료인 RNA양을 파악하기 위해서 사용합니다. RNA로 cDNA를 얻고 이로부터 DNA를 증폭하는 동시에 형광량을 통해 정량적으로 실시간 분석합니다. PCR반응횟수가 늘어날수록 증폭되는 DNA양이 많아져 점점 포화가 되는데, 초기에 cDNA양이 많다면 적은 pcr반응횟수로 빠르게 포화되고 초기에 cDNA양이 적다면 많은 반응횟수를 거쳐야 포화가 됩니다. 이 문제에서는 Ct값을 주었는데 Ct값이 크면 기하급수적으로 증가하는데 많은 반응횟수가 필요하므로 초기 cDNA양이 적은 것임을 알수 있습니다.
그런데 정량분석을 할때는 보정이 필요합니다. 이때 보정은 하우스키핑진으로 합니다. 이것은 항상 일정하게 발현되는 유전자로 보통 액틴유전자를 사용합니다. 실험결과 A-2의 Ct값이 B-2보다 작으므로 조직A에서 사용한 cDNA양(초기시료 RNA)이 조직 B에서 사용한 cDNA보다 기본적으로 2^1.7만큼 많은 것입니다. A-1과 B-1도 이것을 고려해서 생각해야합니다.
감사합니다 !!!!!!
2015 MD 38번
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