<p> </p>
<p style="text-align: left;"><img src="https://t1.daumcdn.net/cfile/cafe/241DB24D51E00A6634" class="txc-image" width="788" style="clear: none; float: none;" border="0" vspace="1" hspace="1" actualwidth="788" id="A_241DB24D51E00A66345B8D"/></p>
<p>이 실험의 목적은 단백질X와 단백질Y가 상호작용(결합)하는지 판단하는 것이다.</p>
<p> </p>
<p>글루타티온은 글루타티온 전이효소(GST)의 기질이다.<br>따라서 글루타티온 아가로스 비드에 GST가 결합할 수 있다.(기질과 효소의 결합)</p>
<p> </p>
<p><strong>시험관1</strong><br>세포 추출액만 들어있다.<br>세포 추출액에는 단백질Y가 들어있다.<br>이 실험의 목적이 GST-X와 단백질Y의 상호작용(결합여부)인 것을 염두해두자.</p>
<p> </p>
<p><strong>시험관2</strong><br>글루타티온 아가로스 비드와 GST가 결합할 것이다.<br>비드를 침전시키면 GST도 함께 침전된다.<br><실험결과>의 단백질 염색에서 함께 침전됨을 확인할 수 있다.</p>
<p><br><strong>시험관3</strong><br>글루타티온 아가로스 비드와 GST-X가 결합하는지 안하는지 여부는 실험결과로 확인할 수 있다.<br><실험결과>의 단백질 염색에서 함께 침전됨을 확인할 수 있다.</p>
<p><br><strong>시험관4</strong><br>글루타티온 아가로스 비드와 GST가 결합한다.<br>만약 GST와 세포추출액 속의 단백질Y가 결합한다면<br>비드를 침전시키면 GST도 함께 침전되고 단백질Y도 함께 침전된다.<br>GST와 세포추출액 속의 단백질Y가 결합하지 않는다면<br>단백질Y는 침전되지 않는다.<br>이 결합여부를 <실험결과>를 통해 확인할 수 있다.<br><실험결과>에서 웨스턴 블롯팅의 결과 4번 시험관에서 밴드가 나오지 않은 것으로 보아 GST와 단백질Y는 결합하지 않는다.</p>
<p><br><strong>시험관5</strong><br>글루타티온 아가로스 비드와 GST-X가 결합한다.<br>만약 GST-X와 세포추출액 속의 단백질Y가 결합한다면<br>비드를 침전시키면 GST-X도 함께 침전되고 단백질Y도 함께 침전된다.<br>GST는 Y와 결합하지 않는데<br>GST-X는 Y와 결합한다.<br>즉 단백질X는 Y와 결합한다는 것을 알 수 있다.</p>
<p><br><strong><실험결과></strong><br><strong>단백질 염색</strong>에서는 각 단백질의 분자량을 알 수 있다.<br>융합단백질인 GST-X는 GST에 X가 붙어 있기 때문에 <br>30kDa정도의 GST보다 커서 약 70kDa 정도에서 나타남을 확인할 수 있다.<br>각각의 시험관에 각각의 단백질들이 존재함을 확인할 수 있다.<br>2와 4시험관에는 GST가 존재하고 3과 5시험관에는 GST-X가 존재함을 확인하였다.</p>
<p> </p>
<p><strong>웨스턴 블로팅</strong>에서는 항-Y항체를 사용하였다.<br>항-Y항체는 단백질Y가 존재하는 밴드에서만 나타나게 된다.<br>웨스턴블로팅에서 밴드는 5번 시험관에서만 나타났다.<br>5번 시험관에서만 Y단백질이 존재했다는 것을 알 수 있다.</p>
<p> </p>
<p>실험과정에서 비드로 침전시킨 후 비드에 결합한 단백질을 추출하여 SDS전기영동한 것이므로<br>비드에 결합한 단백질만이 웨스턴 블롯팅에서 나타날 수 있다.<br>결합하지 못한 단백질은 침전되지 못하므로 웨스턴 블로팅에서 나타날 수 없다.</p>
<p> </p><p style="text-align: left;"></p><p><br></p><p><br></p><p style="text-align: left;"><img src="https://t1.daumcdn.net/cfile/cafe/216220335977273F10" class="txc-image" width="1024" style="clear: none; float: none;" border="0" vspace="1" hspace="1" actualwidth="1024" data-filename="2011 peet 12 사본.jpg" exif="{}" id="A_216220335977273F10B409"/></p><p><br></p><p style="text-align: left;"></p><p><br></p><p style="text-align: center;"><br></p>
<p>① 틀림</p>
<p> Y가 GST에 결합한다면 웨스턴블로팅결과 Ⅳ에서 밴드가 나와야한다.</p>
<p>② 정답</p>
<p> 단백질 염색에서</p>
<p> GST-X는 대략 70kDa이다.</p>
<p> GST는 대략 30kDa이다.</p>
<p> 둘의 차이는 X의 분자량이며 약 40kDa이다.</p>
<p> 웨스턴블로팅 결과 Y의 크기는 60kDa이다. </p>
<p> 따라서 Y(60)가 X(40)보다 더 크다.</p>
<p>③ 틀림</p>
<p> Y에 항-Y항체에 대한 결합 부위가 있다.</p>
<p> 만약 X에 항-Y항체에 대한 결합 부위가 있다면 3번 시험관에서도 웨스턴블로팅 결과 밴드가 나와야 한다.</p>
<p>④ 틀림</p>
<p> SDS 전기영동을 하였다. SDS에 의해서 복합체는 분리된다.</p>
<p>⑤ 틀림</p>
<p> GST효소는 기질인 글루타티온이 붙어있는 아가로스 비드에 잘 결합한다.</p>
<!-- -->
@飛烏아 지금보니까 문제의 오번 레인에 연하게 한줄 더있는데 혹시 저게 단백질 Y 아닌가요??? 비드에 결합한 단백질을 SDS전기영동 한 후, 단백질염색과 웨스턴 블롯팅을 하니까 x와 결합되어있던 Y도 함께 단백질염색되야 된다고 생각했는데 다시 보니 연하게 선이 하나 더 있었네요. 제가 생각한게 아닌가요?? ㅜㅜㅜㅜㅜ
첫댓글 감사합니다!!!!!!!!! ㅠㅠㅠㅠㅠㅠㅠ 아무리봐도 모르겠었는데 ㅠ감사합니다!!
GST와 X는 공유결합으로 융합시켰고, Y는 X와 비공유 결합으로 융합된것이죠? 이거는 실험 결과로 알수있는 것들이고요??
GST-X는 융합단백질이라고 문제에 주어졌습니다.
오래전 글이라 보실지 모르겠지만 오타가 있는것 같아서요!
② 정답
단백질 염색에서
GST-X는 대략 70kDa이다.
GST는 대략 30kDa이다.
둘의 차이는 X의 분자량이며 약 50kDa이다.
웨스턴블로팅 결과 Y의 크기는 60kDa이다.
따라서 Y(60)가 X(50)보다 더 크다.
에서 x분자량은 70-30=40kDa 이네요! ㅎㅎ
감사합니다
수정할게요
단백질 염색에서 GST만 염색되고, 단백질 Y는 염색되지 않는 이유는 뭔가요????
(나)단계. 침전된 단백질만을 가지고 진행한 실험이기 때문입니다.
결합하지 못하면 침전되지 못하므로 나타나지 않습니다.
위의 실험결과는 모든 단백질이 아니라
'글루타티온 아가로스 비드'와 결합하여 침전된 단백질만을 가지고 한 실험입니다.
@飛烏 아 지금보니까 문제의 오번 레인에 연하게 한줄 더있는데 혹시 저게 단백질 Y 아닌가요???
비드에 결합한 단백질을 SDS전기영동 한 후, 단백질염색과 웨스턴 블롯팅을 하니까 x와 결합되어있던 Y도 함께 단백질염색되야 된다고 생각했는데
다시 보니 연하게 선이 하나 더 있었네요.
제가 생각한게 아닌가요?? ㅜㅜㅜㅜㅜ
@할수있어!!! 연하게 한 줄 더 있는 것 Y 맞습니다.
설명은 본문에 이미지로 추가하였습니다.