<p class="cafe-editor-text">------♡ 서로 배려하는 물화생지 ♡------ (지우지 마세용)<br /><br />1. 답변 달아주신 분께 감사의 댓글은 필수!<br /><br />2. 모두 볼 수 있도록 비밀댓글은 금지!<br /><br />3. 답변을 받은 후 질문글 삭제하지 않기!<br /><br />4. 질문 전에 검색해보기! 질문은 구체적으로!<br /><br />------♡ 서로 배려하는 물화생지 ♡------ (지우지 마세용)<br /><br /><br />목적유전자 삽입을 위해, 클로닝벡터에ㅜ제한효소를 처리 후 잔기영동 밴드를 확인한다고 하는데<br /><br /><br />그 결과 2개 밴드로 나오면 삽입이 안된거 아닌가요?<br /><br />왜냐하면 '점착성 말단 호환성'개념에서<br />' 두 정류의 제한효소 사용 시 - DNA ligase처리 후 한번 연결된 것은 다시 같은 제한효소에ㅜ의해ㅜ절단되지 못한다' 라는것 때문이라고 생각합니다 .<br /><br /><br />소중한 답변 부탁드리겠습니다 ㅜㅜ</p><p><img src='https://t1.daumcdn.net/cafeattach/3E5/6b84740c0b9eb3973ae090073b9fae321076cbc0' class='txc-image already_attached_image' /></p>
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첫댓글 벡터는 원형이니까 two cut하면 밴드 2개가 나오는 것이 맞습니다.
선생님! 제가 정말 궁금한것은요 ㅜㅜ
저기 위에 읽어보면, "클로닝 과정에 이용해ㅛ던 제한효소로 처리한다" 라는 부분에서, 동일한 제한효소로 처리하면 삽입된 DNA가 잘리지 않을거랴 생각했습니다
왜냐하면
제한효소 처리후 라이게이즈로 목적DNA와 플라스미드를 연결 후에는/ 제한효소 자리가 바뀌기 때문에 동일한 제한효소로 잘리지 않는다!
라고 알고 있어서요 ㅜㅜ
@Rubisco 제가 무엇을 간과하고 있는 것일까요 ㅜㅜ?
@Rubisco 동일하면 당연히 잘리지요.
효소가 인지하는 제한자리가 똑같으니까요.
@Rubisco 댓글 사진
첨착성 말단이 같은 다른 2개의 효소.
본문의 내용
같은 1개의 효소.
@飛烏 선생님 ㅜㅜ
예컨대 EcoRI 한가지 효소만 사용했다면 ... 제한효소를 고려해서 생각하면 한줄이 나올것 같아요 ㅜㅜ
@Rubisco 목적유전자 기준
왼쪽 BamH1. 오른쪽 EcoR1 cut
벡터 cut
BamH1. EcoR1
연결됨.
같은 효소로 잘림.
제한자리가 안바뀌니까.
@Rubisco EcoR1 one cut이면 1밴드
BamH1. EcoR1 two cut이면 2밴드
본문은 two cut
@飛烏 친절하고 구체적인 해석적 설명 진심으로 감사합니다 선생님!!
' 두 정류의 제한효소 사용 시 - DNA ligase처리 후 한번 연결된 것은 다시 같은 제한효소에ㅜ의해ㅜ절단되지 못한다'
이것은 점착성 말단이 일치하는 다른 두 효소의 경우에 해당합니다.
한 쪽 말단만 보았을 때 EcoR1으로만 절단한 경우(벡터도 EcoR1 절단, insert DNA도 EcoR1 절단 ) 연결한 후 다시 EcoR1으로 분리할 수 있습니다.